期刊文献+
共找到77篇文章
< 1 2 4 >
每页显示 20 50 100
利用小泛素蛋白修饰分子融合技术在大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组抗菌肽LLv
1
作者 殷文霞 王为栋 +4 位作者 刘晓东 邵坤 单虎 张洪亮 王述柏 《青岛农业大学学报(自然科学版)》 2023年第4期265-269,共5页
为了研究在大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中利用小分子泛素蛋白(small ubiquitin-like modifier,SUMO)融合技术表达重组抗菌肽LLv(antimicrobial peptide LLv)的方法。试验以天然抗菌肽LL-37氨基酸组成及分子结构为依据,人工设计了LLv的氨... 为了研究在大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中利用小分子泛素蛋白(small ubiquitin-like modifier,SUMO)融合技术表达重组抗菌肽LLv(antimicrobial peptide LLv)的方法。试验以天然抗菌肽LL-37氨基酸组成及分子结构为依据,人工设计了LLv的氨基酸序列和基因序列。利用SUMO融合技术,构建重组大肠杆菌表达载体pSUMO-LLv在E.coli BL21(DE3)中表达SUMO-LLv,并研究异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl beta-D-thiogalacyranoside,IPTG)浓度和诱导时间对融合蛋白SUMO-LLv表达的影响,同时分析融合蛋白SUMO-LLv表达的可溶性并分离纯化目的蛋白LLv。结果表明:建立的E.coli BL21(DE3)的pSUMO-LLv重组表达载体,经DNA测序验证构建正确;SUMO-LLv的诱导表达最佳条件是IPTG浓度0.5 mmol/L,诱导表达时间为2 h;融合蛋白SUMO-LLv主要存在于菌液上清液中,表达含量为11.34μg/mL;免疫印迹试验(Western blot)鉴定证明融合蛋白具有良好的反应原性;采用Ni柱亲和层析法在诱导菌液中成功纯化到了目的蛋白LLv,大小为5 kDa。说明在E.coli BL21(DE3)中利用SUMO融合技术表达重组抗菌肽LLv的方法可行。 展开更多
关键词 LLv SUMO 融合蛋白 诱导表达 E.coli bl21(de3)
下载PDF
枯草杆菌纳豆激酶基因的克隆及其在E.coliBL21(DE3)plysS中的表达 被引量:3
2
作者 张立全 刘慧 +6 位作者 苏慧敏 扈廷茂 侯鑫 扈会平 邢万金 常福厚 王永胜 《内蒙古大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期284-287,共4页
用CTAB法从枯草杆菌(纳豆株)中提取基因组DNA,聚合酶链式反应(PCR)扩增获得837bp的DNA片段,将该基因片断克隆到pMD18-T载体上,筛选重组子,通过限制性内切酶、PCR技术和测序分析确定该重组子所含插入片断为纳豆激酶基因.利用基因重组技... 用CTAB法从枯草杆菌(纳豆株)中提取基因组DNA,聚合酶链式反应(PCR)扩增获得837bp的DNA片段,将该基因片断克隆到pMD18-T载体上,筛选重组子,通过限制性内切酶、PCR技术和测序分析确定该重组子所含插入片断为纳豆激酶基因.利用基因重组技术构建了纳豆激酶基因的融合表达载体,转化E.coliBL21(DE3)plysS后经IPTG诱导在大肠杆菌中高效表达,经SDS-PAGE电泳及bandscan软件分析融合蛋白分子量约为33.4kD,约占菌体总蛋白29.4%. 展开更多
关键词 枯草杆菌 纳豆激酶 克隆表达 bl21(de3)plysS
下载PDF
一步法制备大肠杆菌BL21(DE3)菌株感受态细胞及转化条件优化 被引量:6
3
作者 张迹 李智 +1 位作者 张宇 袁巧云 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第12期529-532,共4页
大肠杆菌BL21(DE3)菌株是大肠杆菌表达系统最常用的宿主菌株,因此人们需要1种便捷有效的感受态细胞制备和转化方法。一步法感受态细胞制备操作方便,只加1种试剂即可,更快捷稳定,转化也更方便,不需要热激。研究大肠杆菌感受态细胞一步法... 大肠杆菌BL21(DE3)菌株是大肠杆菌表达系统最常用的宿主菌株,因此人们需要1种便捷有效的感受态细胞制备和转化方法。一步法感受态细胞制备操作方便,只加1种试剂即可,更快捷稳定,转化也更方便,不需要热激。研究大肠杆菌感受态细胞一步法制备对BL21菌株的适用性,并对转化过程中的关键参数进行探索和优化。结果表明,该一步法制备的BL21菌株感受态细胞可获得106CFU/μg DNA转化效率,完全能够满足常规转化要求。转化过程中相关参数的最佳条件为冰水浴30 min,室温放置10 min,37℃、150 r/min振荡复苏40 min。 展开更多
关键词 感受态细胞制备 一步法 大肠杆菌bl21(de3)菌株 转化条件
下载PDF
TAT-hEGF融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中高效自我表达 被引量:1
4
作者 智庆文 苗爱玲 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期89-91,100,共4页
为了获得TAT-hEGF融合蛋白在E.coliBL21(DE3)中高效表达,构建了原核表达载体pRSET-tat-hegf,将其转化E.coliBL21(DE3)得到重组工程菌BL21(DE3)/pRSET-tat-hegf。工程菌在无IPTG的诱导下实现了高效表达,TAT-hEGF融合蛋白的表达量占总菌... 为了获得TAT-hEGF融合蛋白在E.coliBL21(DE3)中高效表达,构建了原核表达载体pRSET-tat-hegf,将其转化E.coliBL21(DE3)得到重组工程菌BL21(DE3)/pRSET-tat-hegf。工程菌在无IPTG的诱导下实现了高效表达,TAT-hEGF融合蛋白的表达量占总菌体蛋白的45.6%,主要以包涵体形式存在。 展开更多
关键词 TAT—hEGF融合蛋白 人表皮生长因子 包涵体 E.COLI bl21(de3)
下载PDF
基因工程菌株BL21(DE3)(pECB-ST1)菌种的限定代次及保存条件试验 被引量:1
5
作者 邓光存 吕玉玲 +1 位作者 王玉炯 许崇波 《宁夏农学院学报》 2002年第2期24-26,共3页
本文对基因工程菌株BL2 1(DE3) (pECB -ST1)菌种的限定代次及保存条件进行了详细研究。实验结果证实 ,基因工程菌株BL2 1(DE3) (pECB -ST1)基础种子体外传至 10代 ,其效力、培养特性均不发生变化 ,表明基因工程菌株BL2 1(DE3) (pECB -S... 本文对基因工程菌株BL2 1(DE3) (pECB -ST1)菌种的限定代次及保存条件进行了详细研究。实验结果证实 ,基因工程菌株BL2 1(DE3) (pECB -ST1)基础种子体外传至 10代 ,其效力、培养特性均不发生变化 ,表明基因工程菌株BL2 1(DE3) (pECB -ST1)是一株良好的疫苗生产菌株。基因工程菌株BL2 1(DE3) (pECB -ST1)甘油菌种和冻干菌种分别在 2 0℃保存 2年和 3年 ,菌种的数量未明显减少 。 展开更多
关键词 保存条件 基因工程菌株bl21 de3 pECB-ST1 菌种 限定代次 基因工程灭活苗
下载PDF
大肠杆菌BL21(DE3)lpxM突变株的构建 被引量:2
6
作者 张君 方宏清 +2 位作者 谢达平 刘志敏 陈惠鹏 《生物技术通讯》 CAS 2006年第4期489-492,共4页
目的:lpxM基因失活可以产生极低内毒素活性的脂多糖。构建大肠杆菌BL21(DE3)的lpxM突变株,并考察该突变株的生长状态和表达重组蛋白的能力。方法:构建同源臂长500bp左右的打靶载体,借助Red同源重组系统,使E.coliBL21(DE3)的lpxM基因发... 目的:lpxM基因失活可以产生极低内毒素活性的脂多糖。构建大肠杆菌BL21(DE3)的lpxM突变株,并考察该突变株的生长状态和表达重组蛋白的能力。方法:构建同源臂长500bp左右的打靶载体,借助Red同源重组系统,使E.coliBL21(DE3)的lpxM基因发生插入失活,再导入编码FLP位点特异性重组酶的质粒pCP20去除抗性基因。PCR鉴定发生插入突变的菌株,应用SDS-PAGE分析突变前后的脂多糖,考查对重组蛋白表达的影响。结果:PCR鉴定结果说明lpxM基因发生了插入突变。与出发株比较,突变株的脂多糖电泳图谱发生了明显变化,但其生长状态与表达重组蛋白的能力与出发株基本一致。结论:大肠杆菌BL21(DE3)的lpxM突变株可以用于重组蛋白的表达。 展开更多
关键词 大肠杆菌bl21(de3) lpxM基因 Red同源重组系统
下载PDF
基于重组工程法高转化效率的大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株构建 被引量:2
7
作者 张飞飞 石牡丹 尚广东 《安徽农业科学》 CAS 2015年第20期29-31,72,共4页
[目的]提高最常用的异源蛋白表达宿主菌E.coli BL21(DE3)的转化效率。[方法]利用基于质粒的重组工程系统和双链断裂修复功能。[结果]敲除了编码降解外源DNA的I型限制性内切酶的hsdR基因,获得了高转化效率以及其他功能与BL21(DE3)仍保持... [目的]提高最常用的异源蛋白表达宿主菌E.coli BL21(DE3)的转化效率。[方法]利用基于质粒的重组工程系统和双链断裂修复功能。[结果]敲除了编码降解外源DNA的I型限制性内切酶的hsdR基因,获得了高转化效率以及其他功能与BL21(DE3)仍保持一致的LS1928菌株。[结论]获得的LS1928菌株可能会作为获得催化用酶的关键材料,进而在蛋白质工程等研究领域有着重要的作用。 展开更多
关键词 重组工程 基因敲除 双链断裂修复 大肠杆菌bl21(de3)
下载PDF
破菌时可自动降解宿主核酸的大肠杆菌BL21(DE3)的lpxM突变株构建 被引量:1
8
作者 张君 方宏清 +2 位作者 戴红梅 谢达平 陈惠鹏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期46-52,共7页
研究利用Red同源重组技术对常用大肠杆菌表达宿主菌BL21(DE3)进行改良,构建破菌时可自动降解宿主核酸的大肠杆菌表达宿主菌,该菌株可望有助于解决因破菌时宿主菌染色体核酸释放给后续纯化重组蛋白工作带来的困难。将N端连有OmpA的信号肽... 研究利用Red同源重组技术对常用大肠杆菌表达宿主菌BL21(DE3)进行改良,构建破菌时可自动降解宿主核酸的大肠杆菌表达宿主菌,该菌株可望有助于解决因破菌时宿主菌染色体核酸释放给后续纯化重组蛋白工作带来的困难。将N端连有OmpA的信号肽的S.aureus nucleaseB(nucB)表达框整合至E.coli BL21(DE3)的lpxM位点,改造后菌株(称为BLN)经诱导能表达nucB、并分泌至周质空间,这样可使宿主核酸免受该酶"毒性"影响,菌体裂解后,nucB释放,能自动降解宿主核酸。BLN菌体生长状态以及表达外源重组蛋白的能力与出发菌基本一致。 展开更多
关键词 E.COLI BL2I(de3) Red同源重组系统 IpxM 金黄色葡萄球菌核酸酶
下载PDF
猪瘟兔化弱毒株E2蛋白ABCD抗原结构域在大肠杆菌BL21(DE3)和Rosseta(DE3)中的表达及鉴定 被引量:1
9
作者 李儒曙 苏惠龙 +1 位作者 刘宇 张健騑 《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第6期11-15,共5页
为获得大量的猪瘟病毒重组蛋白抗原,本文构建了猪瘟兔化弱毒株E2蛋白ABCD抗原结构域原核重组表达质粒pET-32a(+)-ABCD,对该重组表达质粒在大肠杆菌BL21(DE3)和Rosseta(DE3)中的表达产量进行了比较分析,并采用胶体金免疫层析和蛋白质免... 为获得大量的猪瘟病毒重组蛋白抗原,本文构建了猪瘟兔化弱毒株E2蛋白ABCD抗原结构域原核重组表达质粒pET-32a(+)-ABCD,对该重组表达质粒在大肠杆菌BL21(DE3)和Rosseta(DE3)中的表达产量进行了比较分析,并采用胶体金免疫层析和蛋白质免疫印迹鉴定重组蛋白的反应原性。结果表明重组质粒pET-32a(+)-ABCD在大肠杆菌BL21(DE3)和Rosseta(DE3)中均可以获得可溶性表达,目的蛋白表达量分别占总蛋白量的比例为11.4%和19.7%,大肠杆菌Rosseta(DE3)作为表达宿主菌更高效,且重组蛋白具有反应原性。该研究为猪瘟病毒重组蛋白抗原的制备提供了参考。 展开更多
关键词 E2蛋白ABCD抗原结构域 bl21(de3)和Rosseta(de3) 表达 鉴定
下载PDF
rimJ基因缺失不影响大肠杆菌BL21(DE3)生长的温度敏感性
10
作者 颛孙丹丹 方宏清 +3 位作者 戴红梅 李树龙 谢迟 陈惠鹏 《生物技术通讯》 CAS 2010年第4期505-508,共4页
目的:研究rimJ基因对大肠杆菌BL21(DE3)菌株生长的温度敏感性的影响。方法:利用SceⅠ-Red同源重组技术将大肠杆菌BL21(DE3)基因组中的rimJ基因缺失,得到rimJ缺失突变菌;比较缺失突变株和原始菌株在不同温度(25℃、37℃、42℃)下的最大... 目的:研究rimJ基因对大肠杆菌BL21(DE3)菌株生长的温度敏感性的影响。方法:利用SceⅠ-Red同源重组技术将大肠杆菌BL21(DE3)基因组中的rimJ基因缺失,得到rimJ缺失突变菌;比较缺失突变株和原始菌株在不同温度(25℃、37℃、42℃)下的最大比生长速率,利用统计学方法分析rimJ基因的缺失对BL21(DE3)菌株生长的温度敏感性是否有影响。结果:rimJ基因被成功敲除;统计分析结果表明缺失突变株和原始菌株的最大比生长速率没有明显区别。结论:rimJ基因缺失对大肠杆菌BL21(DE3)生长的温度敏感性无影响。 展开更多
关键词 rimJ基因 大肠杆菌bl21(de3) 比生长速率 SceⅠ-Red同源重组 温度敏感性
下载PDF
Expression of Duck Interferon Alpha in BL21(DE3)plysS
11
作者 RENGui-ping QUJuan-juan +4 位作者 PEIFu-cheng LIJing-peng LIUXiang-yu LILu WANGJun-wei 《Journal of Northeast Agricultural University(English Edition)》 CAS 2005年第1期11-13,共3页
To obtain the protein of duck interferon alpha and study its biological activities, the prokaryotic expression vector of DuIFN-αwas constructed and expressed in BL21 (DE3) plysS. Using PCR technique, the protein gene... To obtain the protein of duck interferon alpha and study its biological activities, the prokaryotic expression vector of DuIFN-αwas constructed and expressed in BL21 (DE3) plysS. Using PCR technique, the protein gene of DuIFN-αwas cloned from pMD-18-duIFN-αrecombinant. The gene was then inserted to pGEM-T vector and identified by restriction endonuclease analysis and sequencing. DuIFN-αwas ligated with the prokaryotic expression vector of pET30 a, then transformed into BL21 (DE3) plysS. The best inducing time and IPTG concentration for the expression of this recombinant protein was tested through the expression of the positive recombinant with different time span and different IPTG concentration. Lots of the protein of DuIFN-αwere expressed in BL21(DE3)plysS with 1 mmol·L-1 IPTG for 4 hours and its molecular weight for 34 000. 展开更多
关键词 DUCK Α-INTERFERON clonging EXPRESSION bl21(de3)plysS
下载PDF
BL21(DE_3)/PET-11做为人IL-2表达系统的研究 被引量:2
12
作者 公茂凯 章静波 +3 位作者 刘德培 张世馥 刘丕旭 董敏 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第1期60-65,共6页
BL21(DE_3)/PET-11做为人IL-2表达系统的研究公茂凯,章静波,刘德培,张世馥刘丕旭,董敏(中国医学科学院中国协和医科大学北京基础医学研究所,北京100005)关键词白细胞介素2,BL21(DE_3),聚... BL21(DE_3)/PET-11做为人IL-2表达系统的研究公茂凯,章静波,刘德培,张世馥刘丕旭,董敏(中国医学科学院中国协和医科大学北京基础医学研究所,北京100005)关键词白细胞介素2,BL21(DE_3),聚合酶链反应中图号R392。12白细... 展开更多
关键词 白细胞介素2 bl21(de3) 聚合酶链反应
下载PDF
新型抗SARS-CoV-2刺突RBD重组单链抗体在大肠埃希菌BL21中的表达、纯化及效率研究
13
作者 彭诗浛 李雄雄(校) 《微生物学免疫学进展》 CAS 2024年第1期102-102,共1页
世界各地为抗击SARS-CoV-2做出了许多努力,在众多产品中,重组抗体被认为适合作为某些诊断/治疗的替代品。基于其重要性,本研究旨在研究一种新型强效重组单链抗体(scFv)在大肠埃希菌BL21(DE3)系统中的表达、纯化和效率。使用特异性PCR确... 世界各地为抗击SARS-CoV-2做出了许多努力,在众多产品中,重组抗体被认为适合作为某些诊断/治疗的替代品。基于其重要性,本研究旨在研究一种新型强效重组单链抗体(scFv)在大肠埃希菌BL21(DE3)系统中的表达、纯化和效率。使用特异性PCR确认scFv克隆到pET28a载体后,进行表达研究。经表达研究后,采用合适的策略,使用Ni2+-NTA树脂提取和纯化外周血浆蛋白。 展开更多
关键词 重组抗体 bl21(de3) 诊断/治疗 特异性PCR 大肠埃希菌 提取和纯化
原文传递
响应面设计法优化GST发酵培养基 被引量:7
14
作者 王金华 谈丹 +1 位作者 陈雄 罗璇 《武汉理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第11期35-39,97,共6页
利用响应面方法对重组谷胱甘肽硫转移酶表达菌株E coliBL21(DE3)PGEX发酵生产谷胱甘肽硫转移酶(GST)的培养基进行了优化。用Plackett-Burman实验方法研究葡萄糖、酵母膏和MgSO4等20个营养因子对产GST活力的影响,结果表明主要影响因子为... 利用响应面方法对重组谷胱甘肽硫转移酶表达菌株E coliBL21(DE3)PGEX发酵生产谷胱甘肽硫转移酶(GST)的培养基进行了优化。用Plackett-Burman实验方法研究葡萄糖、酵母膏和MgSO4等20个营养因子对产GST活力的影响,结果表明主要影响因子为葡萄糖、酵母膏和MgSO4。根据实验结果对主要影响因子的浓度范围进行估计,然后用Box-Behnken设计及响应面分析确定主要影响因子的最佳浓度。结果表明当葡萄糖浓度为42.06 g/L,蛋白胨浓度为10g/L,酵母膏浓度为8.47 g/L,NaCl浓度为1 g/L,MgSO4浓度为1.62 g/L时,E coliBL21(DE3)PGEX产GST活力达到633.9 mmol/(L.h),较原始培养基的活力提高了63.75%。 展开更多
关键词 谷胱甘肽硫转移酶(GST) 重组菌株bl21(de3)P^GEX 响应面设计法 发酵培养基
下载PDF
蜘蛛大壶状腺丝蛋白基因的克隆和原核表达 被引量:5
15
作者 潘红春 宋大祥 +1 位作者 周开亚 朱国萍 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期446-451,共6页
以悦目金蛛(Argiope amoena)丝腺SMARTRACEcDNA文库为模板进行RT-PCR,克隆了1条大壶状腺丝蛋白(major ampullate spidroin,MaSp)基因cDNA序列。该条cDNA序列编码的氨基酸序列可区分为两部分(1)富含丙氨酸的片段和富含甘氨酸的片段相间... 以悦目金蛛(Argiope amoena)丝腺SMARTRACEcDNA文库为模板进行RT-PCR,克隆了1条大壶状腺丝蛋白(major ampullate spidroin,MaSp)基因cDNA序列。该条cDNA序列编码的氨基酸序列可区分为两部分(1)富含丙氨酸的片段和富含甘氨酸的片段相间排列构成的重复氨基酸序列区,并且富含甘氨酸的片段中有脯氨酸分布;(2)约100个氨基酸残基组成的C末端非重复氨基酸序列区。把MaSp基因cDNA序列亚克隆到质粒pET28b(+)中,构建原核表达质粒pET28b(+)-MaSp,表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。SDS-PAGE、氨基酸组成测定和N末端氨基酸序列测定的结果表明,表达产物为重组MaSp,表达量约为40mg/L。还对C末端非重复氨基酸序列对重组MaSp在水媒介中溶解性的影响进行了探讨。 展开更多
关键词 悦目金蛛 大壶状腺丝蛋白基因 原核表达 pET28b(+) bl21(de3)
下载PDF
重组人BMP6在大肠杆菌中可溶表达、纯化及活性分析 被引量:12
16
作者 雷荣悦 乔玉欢 +2 位作者 闫继东 杨爽 朱天慧 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期452-459,共8页
BMP6是一种调节成骨细胞和成软骨细胞分化的骨诱导因子,在修复各种骨缺损方面具有很好的应用潜力。有诱骨活性的BMP6是多二硫键的二聚体蛋白,疏水性极强容易聚集沉淀。为了在大肠杆菌中可溶表达具有生物活性的重组人BMP6(rhBMP6),构建... BMP6是一种调节成骨细胞和成软骨细胞分化的骨诱导因子,在修复各种骨缺损方面具有很好的应用潜力。有诱骨活性的BMP6是多二硫键的二聚体蛋白,疏水性极强容易聚集沉淀。为了在大肠杆菌中可溶表达具有生物活性的重组人BMP6(rhBMP6),构建了具有TRX、GST、MBP、CBD融合标签和His6标签的rhBMP6成熟肽原核表达载体,调节诱导温度和IPTG浓度,比较不同融合标签和诱导条件对目的蛋白表达量和溶解性的影响。结果表明,MBP最能有效的增强rhBMP6的溶解性,诱导条件对溶解性影响较小。大肠杆菌BL21 trxB(DE3)这种硫氧还蛋白还原酶缺陷菌株为rhBMP6二硫键在胞质中形成提供了合适的氧化还原环境。MBP和BL21 trxB(DE3)相结合在细胞质中高效可溶表达出了BMP6融合蛋白二聚体。表达产物经亲和层析和凝胶排阻层析纯化后,能诱导成肌细胞系C2C12向成骨细胞方向转化。 展开更多
关键词 BMP6 MBP bl21 trxB(de3) 可溶性
下载PDF
抗重组日本血吸虫P38抗原单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:6
17
作者 吴锦雅 周晓红 陈晓光 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期110-113,共4页
目的在大肠埃希菌中可溶性表达日本血吸虫P38(SjP38)抗原分子,并以其纯化产物为抗原,制备抗SjP38单克隆抗体(McAb)。方法将pET32(a)-P38重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),在1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导下表达,超声破菌后获得... 目的在大肠埃希菌中可溶性表达日本血吸虫P38(SjP38)抗原分子,并以其纯化产物为抗原,制备抗SjP38单克隆抗体(McAb)。方法将pET32(a)-P38重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),在1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导下表达,超声破菌后获得可溶性表达产物,通过镍柱一步法纯化,以纯化的重组SjP38为抗原,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,用ELISA和有限稀释法筛选出高分泌滴度McAb杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,蛋白质印迹法(Westernblotting)分析其特异性。结果筛选出能稳定分泌抗重组SjP38单克隆抗体的8株杂交瘤细胞株,均为IgG1;Westernblotting分析显示8株单抗能与日本血吸虫虫卵抗原中的天然P38发生特异性结合。结论制备的抗P38杂交瘤细胞株能分泌高滴度、高特异性的McAb。 展开更多
关键词 单克隆抗体 重组日本血吸虫 制备 38抗原 bl21(de3) 杂交瘤细胞株 BALB/c小鼠 blotting 免疫球蛋白亚类 Western 大肠埃希菌 鉴定 McAb 蛋白质印迹法 可溶性表达 mol/L 有限稀释法 ELISA 杂交瘤技术 特异性结合 抗原分子
下载PDF
玉米APX基因的克隆及其原核表达研究 被引量:4
18
作者 任瑛 赵美爱 +2 位作者 郭新梅 裴玉贺 宋希云 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第4期49-55,共7页
为了研究冷胁迫处理下的玉米抗坏血酸过氧化物酶的作用,根据GenBank发表的APX基因的ORF序列设计引物,利用RT-PCR从冷胁迫后的玉米自交系(E28)叶片总RNA中经cDNA转化,pMD19-T载体的亚克隆,获得APX基因开放阅读框,长度为753 bp,编码250个... 为了研究冷胁迫处理下的玉米抗坏血酸过氧化物酶的作用,根据GenBank发表的APX基因的ORF序列设计引物,利用RT-PCR从冷胁迫后的玉米自交系(E28)叶片总RNA中经cDNA转化,pMD19-T载体的亚克隆,获得APX基因开放阅读框,长度为753 bp,编码250个氨基酸残基。生物信息学分析显示,APX相对分子质量和理论等电点依次为27.3 kDa和5.56。将携带完整的ORF序列连入表达载体pET-28a(+)中,APX基因经IPTG诱导后高效表达,SDS-PAGE电泳检测到目标蛋白的大小约为27.3 kDa,与预测结果一致。抗盐分析显示,重组大肠杆菌BL21(pET28-APX)的抗盐性明显高于对照菌株BL21(pET28)且其抗NaCl的临界浓度为0.6 mol/L,这为后期对作物的抗逆研究提供了科学依据。 展开更多
关键词 APX 原核表达 pET28a(+) IPTG bl21(de3)
下载PDF
单链抗体与力达霉素辅基蛋白在大肠埃希菌表达的发酵工艺 被引量:3
19
作者 高瑞娟 赵春燕 +1 位作者 王玉凤 李电东 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期210-214,237,共6页
目的确定工程菌E.coli BL21(DE3)Star^(TM)/pEFL表达抗Ⅳ型胶原酶单链抗体与力达霉素辅基蛋白构成的融合蛋白Fv-LDP的摇瓶发酵工艺。方法比色法测定菌体浓度,干燥失重法测定细菌干重,SDS-PAGE-Spot Denso法测定融合蛋白Fv-LDP表达量,单... 目的确定工程菌E.coli BL21(DE3)Star^(TM)/pEFL表达抗Ⅳ型胶原酶单链抗体与力达霉素辅基蛋白构成的融合蛋白Fv-LDP的摇瓶发酵工艺。方法比色法测定菌体浓度,干燥失重法测定细菌干重,SDS-PAGE-Spot Denso法测定融合蛋白Fv-LDP表达量,单因素或正交设计优化发酵工艺。结果确定了融合蛋白Fv-LDP表达的最佳培养基配方和培养条件,融合蛋白Fv-LDP表达量为830μg/ml左右,比LB培养基的产量提高5.6倍。结论优化工程菌发酵工艺大大提高了融合蛋白Fv-LDP表达水平,不仅为下一步中试研究和规模化生产奠定了基础,而且为其它生物来源的抗体和抗生素组分在基因工程大肠埃希菌的生产提供了发酵方面的实验证据。 展开更多
关键词 单链Fv抗体 力达霉素辅基蛋白 工程菌bl21(de3)Star^(TM/pEFL 发酵工艺 优化
下载PDF
重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a在大肠杆菌中的表达和纯化 被引量:4
20
作者 王新 陈海旭 +3 位作者 陆坚峰 张毅 屈贤铭 杨胜利 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期337-341,共5页
为了大量制备重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a(rETIa) ,对构建的基因工程菌株E .coliBL2 1(DE3)pET2 2b mETIa进行了表达条件的优化 .用摇瓶培养 ,rETIa蛋白占菌体总蛋白 4 0 %以上 .经破碎菌体 洗涤包涵体 溶解包涵体 复性初步纯化后 ,再... 为了大量制备重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a(rETIa) ,对构建的基因工程菌株E .coliBL2 1(DE3)pET2 2b mETIa进行了表达条件的优化 .用摇瓶培养 ,rETIa蛋白占菌体总蛋白 4 0 %以上 .经破碎菌体 洗涤包涵体 溶解包涵体 复性初步纯化后 ,再经二步柱层析纯化获得电泳纯的rETIa蛋白 .测定了rETIa对胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、组织型纤溶酶原激活因子缺失突变体 (NTA)的抑制活性 . 展开更多
关键词 重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a 大肠杆菌 表达 纯化
下载PDF
上一页 1 2 4 下一页 到第
使用帮助 返回顶部