趋化因子BLC表达载体构建及在肿瘤细胞中的表达

目的 建立真核表达重组体 pc DNA- BL C的稳定转染细胞株 ,为研究趋化因子 BL C的抗肿瘤免疫作用机制奠定基础。方法 以小鼠脾脏组织总 RNA为模板 ,通过 RT- PCR扩增 BL C全长 c DNA,并将扩增的 c DNA片段插入 pc DNA3.1(+)真核表达质粒 ,构建重组质粒 pc DNA- BL C,重组子经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定后 ,用脂质体转染技术导入 Colon2 6细胞 ,经 G4 18筛选建立稳定转染细胞株。用免疫印迹法 (Western Blot)鉴定转染细胞表达的蛋白质 ,证实 BL C存在。用趋化实验证实转染细胞株表达的 BL C有生物学活性。结果 真核表达重组体 pc DNA- BL C构建成功 ,pc DNA- BL C稳定转染细胞株表达有生物学活性的 BL C。结论 成功建立了 BL C的稳定转染细胞株 ,为研究 BL C的抗肿瘤免疫作用机制继而发展肿瘤疫苗奠定了基础。