3p21.3区域鼻咽癌相关基因——BLU的抑癌功能

背景与目的:染色体3p21.3区域的杂合性丢失是鼻咽癌细胞中高发和早期的细胞遗传学变异,提示缺失区域内可能存在与鼻咽癌发生相关的抑癌基因。BLU基因定位于3p21.3,蛋白质结构中含有MYND功能域。已有研究表明,BLU基因在鼻咽癌细胞中发生高频率的启动子甲基化和表达缺失。本研究构建了野生型BLU基因和其突变体的表达载体,分析BLU基因对鼻咽癌细胞恶性增殖的可能抑制作用。方法:用RT-PCR方法钓取BLU基因全长cDNA;用定点突变技术分别构建缺失MYND结构域的突变体、携带Ser402Phe点突变及缺失第405位Cys和第406位Ser的突变体、以及携带Gly160Arg点突变的BLU基因突变体的表达载体。将野生型BLU基因和MYND缺失型突变体转染鼻咽癌细胞CNE1和CNE2,用TUNEL方法检测、观察细胞凋亡情况;通过细胞计数和克隆形成实验分析稳定转染细胞的生长特性;分析稳定转染BLU基因的载体对CNE2细胞裸鼠致瘤性的影响。结果:瞬时转染野生型或MYND缺失突变型BLU基因不能诱导CNE2细胞凋亡;外源表达BLU基因对CNE2的细胞凋亡以及对CNE1、CNE2的细胞增殖和克隆形成能力均无明显影响;BLU基因对CNE2细胞的裸鼠成瘤能力也没有明显抑制作用。结论:尽管BLU基因在鼻咽癌中发生高频率变异,但其对鼻咽癌细胞的恶性增殖并没有明显抑制作用。

BLU基因慢病毒表达载体的构建

目的:构建BLU基因慢病毒表达载体。方法:采用PCR技术从人脐带来源的间充质干细胞中扩增出BLU基因,将其接入慢病毒载体(pSL6-IRES-EGFP)中,经菌落PCR、酶切和测序鉴定,然后转染293T细胞观察表达情况。结果:PCR、酶切和测序鉴定克隆了重组子(pSL6-BLU-IRES-EGFP),并在293T细胞中成功表达BLU基因。结论:成功地克隆了含有BLU基因的慢病毒表达载体。

肾癌组织中RASSF1A和BLU基因的异常甲基化

目的:观察肾癌组织中RASSF1A和BLU基因启动子甲基化状态,探讨二者在肾癌发生中的可能作用。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测26例肾癌组织和相应癌旁组织中RASSF1A和BLU基因启动子甲基化状态,分析二者检测结果。结果:肾癌组织中17例(65.4%)RASSF1A基因异常甲基化表达,相应癌旁组织中无RASSF1A基因异常甲基化表达;11例(42.3%)肾癌组织中BLU基因高甲基化,相应癌周组织中未发现BLU基因高甲基化。结论:肾癌组织中RASSF1A和BLU基因启动子高度甲基化,表明RASSF1A和BLU基因甲基化可能与肾癌的发生相关。

3p21.3区域相关抑癌基因——BLU在肝癌组织中的表达及临床意义

目的探讨3p21.3区域相关抑癌基因———BLU在肝癌组织中的表达及临床意义。方法采用RT-PCR的方法检测BLU基因在39例肝癌组织以及相应的癌旁组织中的表达。结果35.9%(14/39)癌组织表达,87.2%(34/39)癌旁组织表达,两者差异有统计学意义(P<0.01);合并有肝硬化或者乙肝表面抗原阳性的患者,其肝癌组织中BLU基因的表达失活的比例显著高于无肝硬化或乙肝表面抗原阴性患者(P<0.01)。低分化肝癌较中、高分化肝癌BLU基因未表达的比例显著增高(P<0.01)。肝癌组织中BLU的表达情况与年龄、性别、术前肝功能Child-Pugh分级及肿瘤大小的差异无统计学意义(P>0.05)。结论BLU基因可能参与调控肝癌的发生、发展过程,并进而影响其生物学特点及预后。

BLU基因在鼻T/NK细胞淋巴瘤石蜡与冻存组织中的甲基化状态比较研究

目的 :探讨 BL U基因在 T/ NK细胞淋巴瘤发生中的作用与分子病理诊断中的应用价值。方法 :选用已经确诊为鼻 T/ NK细胞淋巴瘤 1 2例的冻存组织标本与 2 0例石蜡组织标本 ,从组织中提取 DNA,用 MSP方法检测 BL U基因启动子的甲基化状态。结果 :在 1 2个冰冻组织病例中 ,用 M引物扩增的产物 ,BLU基因全部为阳性 ,U引物扩增的产物 ,BL U基因 1 1例为阳性 ;2 0例石蜡组织病例中 ,M引物扩增的产物 6例阳性 ,U引物扩增的产物 1 2例阳性。表明 BLU基因在鼻 T/ NK细胞淋巴瘤中有高度甲基化 ,冰冻组织中的甲基化检出率明显高于石蜡组织。结论 :BL U基因启动子 Cp G岛在鼻 T/ NK细胞淋巴瘤中普遍高度甲基化 ,表明此抑癌基因被失活 ,可能是 T/ NK细胞淋巴瘤的发病机制之一。

抑癌基因BLU在肿瘤中的作用及分子机制研究进展

BLU是位于3号染色体p21.31区域的一个重要的抑癌基因,BLU基因主要通过调节NF-κB信号、JNK信号和EPK-RAS-RAF-MEK(细胞外信号激酶)等信号通路来调控细胞周期、诱导细胞凋亡等发挥抑癌作用。BLU基因在许多实体肿瘤中表观遗传失活或者下调,可能原因是BLU启动子甲基化,去甲基化药物治疗后能够内源性恢复BLU基因的表达,恢复正常的抑癌作用。抑癌基因甲基化在肿瘤中经常发生,有望成为肿瘤诊断、预后的标志物和抗肿瘤的治疗靶点。现着重阐述BLU基因的结构、生物学作用、信号传导通路机制以及BLU基因与肿瘤相关性的研究进展。

蓝光促进绿僵菌产孢和产孢调节基因fluG表达

目的明确蓝光照射对绿僵菌产孢的促进作用及与产孢调节基因flu G表达量的关系,为绿僵菌发酵生产提供光照促进产孢的理论依据和技术参数。方法以绿僵菌高效杀虫菌株M202为试材,平板接种培养,通过显微观察每隔12 h的菌体发育状态,确定菌株发育进程产孢前期、初始期、旺盛期、平稳期的对应时段。以蓝光6 804—54 432 J·m-2的8个能量梯度,照射处理在黑暗中培养至不同发育期即24、48、72 h的菌体,继续培养到产孢稳定期后,采用打孔法取样,以显微计数法检测计算产孢量,评估菌体发育阶段对蓝光的敏感性以及蓝光照射能量对产孢量的影响。克隆flu G,建立flu G real-time PCR反应体系;以蓝光6 804—54 432 J·m-2的8个能量梯度,照射处理发育至48 h即处于产孢前将进入产孢期的菌丝体,照射处理后立即取菌丝,液氮冷冻,提取RNA并反转录成c DNA,通过real-time PCR检测flu G表达量,评估蓝光照射对flu G表达量的影响。结果绿僵菌M202菌株发育24 h前为萌发期,24—72 h为菌丝快速生长期,其中48 h还处于产孢前期,60 h已进入产孢初期,72—96 h为产孢盛期,96—120 h为产孢末期,120 h后为孢子成熟期,7—10 d后产量达到稳定。蓝光不同能量照射24 h菌龄即初期菌丝体,其产孢量与无光照处理的对照无显著差异,照射48 h菌龄即菌丝快速生长的产孢前期,其产孢量显著提高,最适照射能量为20 412—40 824 J·m-2,其中34 020 J·m-2使产孢量最高达无光照处理对照的1.50倍,72 h菌龄即产孢结构形成、产孢量快速增长期对蓝光最为敏感,低至6 804 J·m-2的照射能量即可显著提高产孢量,且宽泛的各剂量均有效。对于flu G的表达,在试验照射剂量范围内,48 h菌龄接受蓝光照射后,flu G表达量显著提高,表达量随照射剂量呈先上升后下降的趋势,在20 412 J·m-2以下较低能量时,flu G表达量与照射剂量成正相关,当照射时间为2.25 h时,表达量达到最高,为无光照处理对照的2.41倍,而在20 412 J·m-2以上较高能量时,二者呈现负相关,随着蓝光照射时间的增加,基因表达量呈下降趋势;灰色关联度分析显示,当关联因子为0.5时,产孢量与flu G表达量的关联度r值为0.74。结论蓝光照射能够促进绿僵菌产孢及flu G表达,不同发育阶段的菌体对蓝光感应有显著差异,在48—72 h菌龄时照射34 020 J·m-2能量可获得最高产孢量,产孢与flu G之间有较高关联度说明flu G参与绿僵菌产孢的调控。

TSLC1和BLU基因在鼻NK/T细胞淋巴瘤中CpG岛甲基化研究

目的了解鼻NK/T细胞淋巴瘤中抑癌基因TSLC1和BLU的甲基化状况,并探讨其在鼻NK/T细胞淋巴瘤发生发展中的作用及与临床病理参数之间的关系。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)技术,检测30例鼻NK/T细胞淋巴瘤、10例鼻咽淋巴组织增生中TSLC1和BLU基因启动子区的甲基化状况;应用原位杂交方法对30例鼻NK/T细胞淋巴瘤进行EB病毒检测。结果30例鼻NK/T细胞淋巴瘤中,TSLC1和BLU基因的甲基化频率分别为83.3%(2/530)和50.0%(1/530),且TSLC1和BLU基因中至少有1个抑癌基因发生甲基化的频率为86.7%(2/630);10例鼻咽淋巴组织增生中,2例发生了TSLC1基因甲基化,而BLU基因全部甲基化阴性而非甲基化阳性。未发现TSLC1和BLU基因CpG岛甲基化与EB病毒感染有关。TSLC1和BLU基因启动子区CpG岛甲基化与临床病理特征之间均无统计学相关性(P>0.05)。结论30例鼻NK/T细胞淋巴瘤中多基因的启动子甲基化是一种普遍的事件。两种抑癌基因启动子区CpG岛均具有很高的甲基化频率,表明其在鼻NK/T细胞淋巴瘤的发生发展中具有重要作用,可能对肿瘤的早期诊断及预后评估具有重要意义。

鼻NK/T细胞淋巴瘤中BLU基因启动子区CpG岛甲基化状态研究

目的检测鼻NK/T细胞淋巴瘤中抑癌基因BLU启动子区CpG岛甲基化的状况,并探讨其在鼻NK/T细胞淋巴瘤发生、发展中的作用及与临床病理特征的关系。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)技术,检测30例鼻NK/T细胞淋巴瘤、10例鼻咽淋巴组织增生中BLU基因启动子区的甲基化状况;应用原位杂交方法对30例鼻NK/T细胞淋巴瘤进行EB病毒检测。结果30例鼻NK/T细胞淋巴瘤中有15例肿瘤组织BLU基因启动子区CpG岛发生异常甲基化,甲基化频率为50%(15/30),而10例鼻咽淋巴组织增生均无甲基化;EB病毒阳性组BLU基因的甲基化频率与阴性组对比差异无统计学意义(P>0.05);BLU基因启动子区CpG岛甲基化与临床病理特征之间均无统计学相关性(P>0.05)。结论在鼻NK/T细胞淋巴瘤中,抑癌基因BLU启动子区CpG岛具有很高的甲基化频率,表明其在鼻NK/T细胞淋巴瘤的发生、发展中具有重要作用,并对肿瘤的早期诊断具有重要意义。

胃癌BLU基因启动子区高甲基化的临床意义

目的研究BLU基因启动子区高甲基化在胃癌发生发展中的作用。方法应用甲基化特异性PCR技术分别检测92例胃癌组织与相应的癌旁组织以及79例胃癌患者与79例正常人外周血BLU基因甲基化水平,分析BLU基因甲基化与临床病理参数的相关性。结果胃癌组织BLU基因甲基化率高于癌旁组织(67.39%vs.52.17%)(P<0.05)。BLU基因甲基化与患者性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、TNM分期和浸润深度之间无明显相关性(P>0.05),但与肿瘤淋巴结转移密切相关(P<0.05)。胃癌患者外周血BLU基因甲基化率与正常人外周血比较差异无统计学意义(63.29%vs.56.96%)(P>0.05)。结论 BLU基因启动子的CpG岛在胃癌组织存在高甲基化现象,提示BLU基因的高甲基化可能与抑癌基因被失活从而导致胃癌的发生有关。BLU甲基化可能参与胃癌淋巴结转移。