BLU基因慢病毒表达载体的构建

目的:构建BLU基因慢病毒表达载体。方法:采用PCR技术从人脐带来源的间充质干细胞中扩增出BLU基因,将其接入慢病毒载体(pSL6-IRES-EGFP)中,经菌落PCR、酶切和测序鉴定,然后转染293T细胞观察表达情况。结果:PCR、酶切和测序鉴定克隆了重组子(pSL6-BLU-IRES-EGFP),并在293T细胞中成功表达BLU基因。结论:成功地克隆了含有BLU基因的慢病毒表达载体。

BLU基因在鼻T/NK细胞淋巴瘤石蜡与冻存组织中的甲基化状态比较研究

目的 :探讨 BL U基因在 T/ NK细胞淋巴瘤发生中的作用与分子病理诊断中的应用价值。方法 :选用已经确诊为鼻 T/ NK细胞淋巴瘤 1 2例的冻存组织标本与 2 0例石蜡组织标本 ,从组织中提取 DNA,用 MSP方法检测 BL U基因启动子的甲基化状态。结果 :在 1 2个冰冻组织病例中 ,用 M引物扩增的产物 ,BLU基因全部为阳性 ,U引物扩增的产物 ,BL U基因 1 1例为阳性 ;2 0例石蜡组织病例中 ,M引物扩增的产物 6例阳性 ,U引物扩增的产物 1 2例阳性。表明 BLU基因在鼻 T/ NK细胞淋巴瘤中有高度甲基化 ,冰冻组织中的甲基化检出率明显高于石蜡组织。结论 :BL U基因启动子 Cp G岛在鼻 T/ NK细胞淋巴瘤中普遍高度甲基化 ,表明此抑癌基因被失活 ,可能是 T/ NK细胞淋巴瘤的发病机制之一。

BLU基因异常甲基化与肿瘤研究进展

肿瘤是危害人类健康的最大杀手,肿瘤的发病率近年来呈上升趋势,死于肿瘤的人数逐年增加。肿瘤的发生、发展不仅取决于遗传因素,同时也受到表观遗传修饰的影响。表观遗传通过启动子甲基化、组蛋白去乙酰化及非编码RNA等调控方式来实现对基因表达的调控,意味着异常的表观遗传修饰可能会参与肿瘤发生。肿瘤表观遗传学机制贯穿肿瘤发生。

3p21.3区域鼻咽癌相关基因——BLU的抑癌功能

背景与目的:染色体3p21.3区域的杂合性丢失是鼻咽癌细胞中高发和早期的细胞遗传学变异,提示缺失区域内可能存在与鼻咽癌发生相关的抑癌基因。BLU基因定位于3p21.3,蛋白质结构中含有MYND功能域。已有研究表明,BLU基因在鼻咽癌细胞中发生高频率的启动子甲基化和表达缺失。本研究构建了野生型BLU基因和其突变体的表达载体,分析BLU基因对鼻咽癌细胞恶性增殖的可能抑制作用。方法:用RT-PCR方法钓取BLU基因全长cDNA;用定点突变技术分别构建缺失MYND结构域的突变体、携带Ser402Phe点突变及缺失第405位Cys和第406位Ser的突变体、以及携带Gly160Arg点突变的BLU基因突变体的表达载体。将野生型BLU基因和MYND缺失型突变体转染鼻咽癌细胞CNE1和CNE2,用TUNEL方法检测、观察细胞凋亡情况;通过细胞计数和克隆形成实验分析稳定转染细胞的生长特性;分析稳定转染BLU基因的载体对CNE2细胞裸鼠致瘤性的影响。结果:瞬时转染野生型或MYND缺失突变型BLU基因不能诱导CNE2细胞凋亡;外源表达BLU基因对CNE2的细胞凋亡以及对CNE1、CNE2的细胞增殖和克隆形成能力均无明显影响;BLU基因对CNE2细胞的裸鼠成瘤能力也没有明显抑制作用。结论:尽管BLU基因在鼻咽癌中发生高频率变异,但其对鼻咽癌细胞的恶性增殖并没有明显抑制作用。

TSLC1和BLU基因在鼻NK/T细胞淋巴瘤中CpG岛甲基化研究

目的了解鼻NK/T细胞淋巴瘤中抑癌基因TSLC1和BLU的甲基化状况,并探讨其在鼻NK/T细胞淋巴瘤发生发展中的作用及与临床病理参数之间的关系。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)技术,检测30例鼻NK/T细胞淋巴瘤、10例鼻咽淋巴组织增生中TSLC1和BLU基因启动子区的甲基化状况;应用原位杂交方法对30例鼻NK/T细胞淋巴瘤进行EB病毒检测。结果30例鼻NK/T细胞淋巴瘤中,TSLC1和BLU基因的甲基化频率分别为83.3%(2/530)和50.0%(1/530),且TSLC1和BLU基因中至少有1个抑癌基因发生甲基化的频率为86.7%(2/630);10例鼻咽淋巴组织增生中,2例发生了TSLC1基因甲基化,而BLU基因全部甲基化阴性而非甲基化阳性。未发现TSLC1和BLU基因CpG岛甲基化与EB病毒感染有关。TSLC1和BLU基因启动子区CpG岛甲基化与临床病理特征之间均无统计学相关性(P>0.05)。结论30例鼻NK/T细胞淋巴瘤中多基因的启动子甲基化是一种普遍的事件。两种抑癌基因启动子区CpG岛均具有很高的甲基化频率,表明其在鼻NK/T细胞淋巴瘤的发生发展中具有重要作用,可能对肿瘤的早期诊断及预后评估具有重要意义。

blu基因在鼻咽部淋巴瘤的甲基化状态研究

目的 探讨鼻咽部淋巴瘤blu基因启动子的高度甲基化在肿瘤发生中的作用及在分子病理诊断中的应用价值。方法 选用 2 0例鼻咽部NK T细胞淋巴瘤 (包括NK细胞淋巴瘤、NK样T细胞淋巴瘤及外周T细胞淋巴瘤 )石蜡包埋组织 ,用甲基化特异性PCR(methylationspecificPCR ,MSP)方法检测。结果 blu基因在鼻咽部NK T细胞淋巴瘤中高度甲基化 ,出现率为 30 % (2 0例中 6例 )。其中在 15例NK细胞淋巴瘤中 4例存在blu的高度甲基化 ;2例NK样T细胞淋巴瘤中 1例有高度甲基化 ;3例外周T细胞淋巴瘤 (非特殊型 )中 1例有blu高度甲基化状态。结论 blu基因启动子的CpG岛在鼻咽部NK T细胞淋巴瘤中高度甲基化现象 ,表明此抑癌基因被失活 ,提示blu基因的高度甲基化可能与淋巴瘤的发生有关。证实MSP方法在石蜡组织标本中可以检测基因甲基化。blu基因的高度甲基化也可能为鼻咽部NK T细胞淋巴瘤提供新的肿瘤分子病理诊断标记物。

鼻NK/T细胞淋巴瘤中BLU基因启动子区CpG岛甲基化状态研究

目的检测鼻NK/T细胞淋巴瘤中抑癌基因BLU启动子区CpG岛甲基化的状况,并探讨其在鼻NK/T细胞淋巴瘤发生、发展中的作用及与临床病理特征的关系。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)技术,检测30例鼻NK/T细胞淋巴瘤、10例鼻咽淋巴组织增生中BLU基因启动子区的甲基化状况;应用原位杂交方法对30例鼻NK/T细胞淋巴瘤进行EB病毒检测。结果30例鼻NK/T细胞淋巴瘤中有15例肿瘤组织BLU基因启动子区CpG岛发生异常甲基化,甲基化频率为50%(15/30),而10例鼻咽淋巴组织增生均无甲基化;EB病毒阳性组BLU基因的甲基化频率与阴性组对比差异无统计学意义(P>0.05);BLU基因启动子区CpG岛甲基化与临床病理特征之间均无统计学相关性(P>0.05)。结论在鼻NK/T细胞淋巴瘤中,抑癌基因BLU启动子区CpG岛具有很高的甲基化频率,表明其在鼻NK/T细胞淋巴瘤的发生、发展中具有重要作用,并对肿瘤的早期诊断具有重要意义。

胃癌BLU基因启动子区高甲基化的临床意义

目的研究BLU基因启动子区高甲基化在胃癌发生发展中的作用。方法应用甲基化特异性PCR技术分别检测92例胃癌组织与相应的癌旁组织以及79例胃癌患者与79例正常人外周血BLU基因甲基化水平,分析BLU基因甲基化与临床病理参数的相关性。结果胃癌组织BLU基因甲基化率高于癌旁组织(67.39%vs.52.17%)(P<0.05)。BLU基因甲基化与患者性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、TNM分期和浸润深度之间无明显相关性(P>0.05),但与肿瘤淋巴结转移密切相关(P<0.05)。胃癌患者外周血BLU基因甲基化率与正常人外周血比较差异无统计学意义(63.29%vs.56.96%)(P>0.05)。结论 BLU基因启动子的CpG岛在胃癌组织存在高甲基化现象,提示BLU基因的高甲基化可能与抑癌基因被失活从而导致胃癌的发生有关。BLU甲基化可能参与胃癌淋巴结转移。

抑癌基因BLU在肿瘤中的作用及分子机制研究进展

BLU是位于3号染色体p21.31区域的一个重要的抑癌基因,BLU基因主要通过调节NF-κB信号、JNK信号和EPK-RAS-RAF-MEK(细胞外信号激酶)等信号通路来调控细胞周期、诱导细胞凋亡等发挥抑癌作用。BLU基因在许多实体肿瘤中表观遗传失活或者下调,可能原因是BLU启动子甲基化,去甲基化药物治疗后能够内源性恢复BLU基因的表达,恢复正常的抑癌作用。抑癌基因甲基化在肿瘤中经常发生,有望成为肿瘤诊断、预后的标志物和抗肿瘤的治疗靶点。现着重阐述BLU基因的结构、生物学作用、信号传导通路机制以及BLU基因与肿瘤相关性的研究进展。