布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0580基因的原核表达

【目的】构建布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0580基因的原核表达载体,并进行免疫原性及其对人胚胎滋养层细胞(HPT-8)细胞因子表达量影响的分析。【方法】本研究从羊种布鲁氏菌(B.melitensis)标准株16M的基因组中克隆BMEI0580基因片段,亚克隆到pMD19-T载体中并测序,克隆至表达载体pET-28a,构建重组质粒pET-28a-BMEI0580利用大肠杆菌进行表达,并进行Western-Blot检测,ELISA方法检测细胞因子的表达量。【结果】成功构建了pET-28a-BMEI0580原核表达载体,并在大肠杆菌中成功表达了BMEI0580基因,经过SDS-PAGE检测,重组蛋白的分子量大约是57kDa,Western-Blot检测其具有免疫特性。【结论】本实验成功表达了布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0580基因,为进一步研究其免疫性和保护性奠定了基础。