LncRNA-Mhrt、BMI1基因表达水平与心肌肥厚患者心肌纤维化程度的关系研究

目的:分析长链非编码RNA(LncRNA)-肌球蛋白重链相关RNA转录本(Mhrt)、BMI1基因表达水平与心肌肥厚患者心肌纤维化严重程度的相关性。方法:回顾性分析2020年6月—2021年6月于柳州市柳铁中心医院接受治疗的102例心肌肥厚患者,患者均接受钆延迟强化(LGE)序列检测并根据患者累及的阳性节段数量分为LGE 1组和LGE 2组。观察两组LncRNA-Mhrt、BMI1基因表达情况、心功能及LGE评分结果,采用Pearson相关系数分析心肌肥厚患者心肌纤维化程度与LncRNA-Mhrt、BMI1基因表达的相关性。结果:LGE 2组的LncRNA-Mhrt、BMI1基因表达水平明显高于LGE 1组(P<0.05)。两组的左室收缩末期容积(LVESV)、射血分数(EF)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);LGE 2组左室舒张末期容积(LVEDV)、左室心肌质量(LVM)水平均明显高于LGE 1组(P<0.05)。Pearson相关系数分析显示心肌肥厚患者心肌纤维化程度的LGE积分与LncRNA-Mhrt、BMI1基因表达均呈正相关(P<0.05)。结论:LncRNA-Mhrt及BMI1基因的异常高表达在一定程度上能够反映出患者并发心肌纤维化程度,对检测心肌肥厚患者病情发展及评估其预后具有重要价值,后续临床中针对该类患者可进行上述两项指标的监测并优化和完善相关诊疗方案,对提高患者预后具有重要效用。

小鼠睾丸组织Bmi1基因的克隆及原核表达

目的:克隆小鼠Bm i1 cDNA并进行原核表达,为下一步制备BM I1多克隆抗体奠定基础。方法:从小鼠睾丸组织中克隆Bm i1 cDNA,测序并利用BLAST程序比对证明该基因序列正确后,构建原核表达载体pET-28 c-Bm i1,将其转入大肠埃希菌BL21中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并通过免疫印迹检测重组目的蛋白。结果:成功克隆了小鼠Bm i1 cDNA,原核表达的融合蛋白可与H is标签抗体和BM I1单克隆抗体特异性结合。结论:小鼠睾丸组织中Bm i1基因有表达;成功克隆了小鼠Bm i1 cDNA并在大肠埃希菌BL21中正确表达了重组蛋白rBM I1。

Bmi1基因研究进展

Bmi1是PcG(Polycomb group)家族重要的调控基因,该基因与干细胞的增殖和肿瘤的发生密切相关,中枢神经系统干细胞、末梢神经系统干细胞和造血干细胞都依赖该基因进行自我更新。另外,在小鼠精原干细胞中也检测到该基因的表达,表明该基因对精原干细胞的自增殖也有一定的影响。简要综述了该基因的结构、作用原理、信号通路及对细胞增殖影响的相关研究进展。

小鼠Bmi1基因的克隆及其在支持细胞中的表达

目的从昆明鼠睾丸中克隆Bmi1基因,构建真核表达载体,并转染支持细胞,以便用作培养精原干细胞(SSCs)的滋养层.方法以5日龄昆明鼠为材料,提取小鼠睾丸组织中总RNA后,以RT-PCR技术克隆小鼠睾丸Bmi1基因,构建真核表达载体,并转染TM4细胞(睾丸支持细胞株),在转染后40 h进行免疫荧光鉴定.结果成功克隆小鼠睾丸Bmi1基因的cDNA,测序正确;免疫荧光细胞染色显示,转染后的支持细胞中有Bmi1蛋白表达.结论本研究为以转染了Bmi1基因的支持细胞作饲养层培养SSCs奠定了基础.

Bmi1基因沉默对人舌鳞癌细胞生物学功能的影响

目的:检测Bmi1(B lymphoma Mo-MLV insertion region 1)在舌鳞癌细胞与正常舌黏膜中的表达差异,探讨Bmi1基因沉默后对口腔舌鳞癌细胞生物学功能的影响。方法:实时定量逆转录聚合酶链反应(q RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测Bmi1蛋白和m RNA在舌鳞癌细胞系和正常舌黏膜组织中的表达情况;采用免疫荧光染色检测Bmi1在舌鳞癌细胞中的分布情况;通过短发夹sh RNA有效抑制Bmi1表达后,MTT实验检测其对舌鳞癌细胞增殖能力的影响;划痕实验检测其对舌鳞癌细胞迁移能力的影响;Transwell实验检测其对舌鳞癌细胞侵袭的影响;克隆形成实验检测其对舌鳞癌细胞克隆形成率的影响;构建移植瘤实验观察其对移植瘤生长的影响。结果:Bmi1在舌鳞癌细胞中高表达,而在正常舌黏膜中低表达(P<0.05);Bmi1基因沉默后显著抑制舌鳞癌细胞的增殖、侵袭、迁移能力以及抑制体内移植瘤的生长(P<0.05),这与Bmi1对下游靶基因P16、P14和E-cadherin的调控有关。结论 :Bmi1与舌鳞癌多种恶性生物学功能的调控密切相关,可能是舌鳞癌潜在的治疗靶点。

p16^INK4a基因及其抑制基因Bmil在不同年龄人角膜内皮细胞中的表达及其意义

背景p16^INK4a基因在细胞老化和早衰过程中发挥着重要作用，是目前已知的细胞衰老的主导基因。角膜内皮细胞（CECs）周期停滞于G。期且体内缺乏增生能力，是否与细胞衰老有关尚未得知。目的探讨不同年龄的正常人CECs中p16^INK4a基因及其抑制基因Bmil的表达。方法收集临床上DX液保存的行角膜移植手术后剩余的供体周边环状角膜组织，记录供体年龄。经锥虫蓝一茜素红双染法观察CECs的活性；行苏木精一伊红染色以证实角膜材料的组织结构正常。将收集到的角膜环材料按照年龄分为〈30岁组、30～50岁组和〉50岁组，每组30个角膜环，其中15个用于总RNA提取，另外15个角膜环等分为3份，分别用于免疫组织化学检测、免疫荧光检测和CECs活性的观察。提取每个角膜环的总RNA，行实时荧光定量PCR检测，观察p16^INK4amRNA、BmilmRNA和Ki67mRNA在CECs中的表达。行冰冻切片免疫组织化学染色，检测p16^INK4a、Bmil和Ki67蛋白在CECs中的表达。免疫荧光法检测p16”“。在CECs的表达。结果苏木精一伊红染色结果显示，供体角膜上皮、基质和内皮结构完整，排列规则。实时荧光定量PCR检测显示随年龄增长，p16^INK4a。mRNA的表达增强，而BmilmRNA和Ki67mRNA的表达减弱，差异均有统计学意义（F=5．703，P=0．014；F=3．950，P=0．042；F=548．500，P=0．000），其中与〈30岁组比较，〉50岁组p16^INK4amRNA在CECs中的表达量明显升高，而BmilmRNA和Ki67mRNA的表达均明显降低，差异均有统计学意义（P=0．006、0．013、0．000）。免疫组织化学结果可见，p16^INK4a。蛋白在各组CECs中均有表达，主要位于细胞核内，而Bmil与Ki67在年老供体的表达强度均弱于年轻供体，与实时荧光定量PCR的结果基本一致。免疫荧光染色显示，年老供体CECs p16^INK4a的表达强度强于年轻供体。结论细胞衰老主导基因p16^INK4a的表达随年龄增加而增高，其抑制基因Bmil的表达随年龄增加而降低。

重组Bmi1基因的慢病毒的制备和鉴定

目的制备携带B细胞特异单克隆鼠白血病毒整合位点1基因(Bmi1基因)的慢病毒pSin-Bmi1,并在人胚胎干细胞H1中过表达Bmi1基因和BMI1蛋白。方法根据GeneBank提供的Bmi1基因序列,以H1来源的cDNA为模板扩增其cDNA序列,回收片段,Bmi1基因和pSin载体分别进行双酶切,连接后的质粒转化。经菌落PCR、双酶切鉴定及测序鉴定pSin-Bmi1阳性克隆。将阳性表达的pSin-Bmi1和包装质粒转染到293T细胞中制备病毒液。将包装好的病毒感染人胚胎干细胞H1细胞系并用嘌呤霉素筛选稳定表达BMI1的细胞株。通过Western blot验证H1细胞中外源性BMI1蛋白表达。结果经菌落PCR、限制性核酸内切酶酶切和测序证实目的基因Bmi1序列正确。Western blot检测发现感染重组Bmi1的慢病毒的细胞中有外源性BMI1蛋白的高表达,而未感染重组Bmi1的慢病毒的对照组未检测到BMI1表达。结论成功制备了携带Bmi1基因的慢病毒,并得到了稳定高表达外源Bmi1的细胞株。

BMI-1基因在66例白血病中的表达及其意义

目的:观察BMI-1(B-cell-specific moloney leukemia virus insert site 1)基因在白血病中的表达及其与白血病的关系。方法:应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,分别检测慢性粒细胞白血病细胞株(K562),26例慢性粒细胞白血病(CML)患者,6例慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者,34例急性白血病(AL)患者和10例对照的骨髓单个核细胞(BMMNC)中BMI-1mRNA的表达情况,分析其在自血病中的表达规律及临床意义。结果:BMI-1基因在10例对照组标本中无表达;K562细胞株中BMI-1基因呈阳性表达;CML组中BMI-1基因的阳性率为15.4%,其中包括CML慢性期(CML-CP)及CML急变期(CML-AP),其阳性率分别为5%和50%;CLL组中BMI-1基因无表达;AL组中BMI-1基因表达率为47.1%,其中包括急性髓系自血病(AML)及急性淋巴细胞白血病(ALL),其阳性率分别为57.7%和12.9%;CML-CP组与CML-AP组阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05),初诊AL中,AML组和ALL组阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05),CML- AP组与初诊AL组阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。对2例初诊BMI-1基因阳性表达患者随诊发现。初诊时BMI -1基因表达阳性,完全缓解后无表达,复发后再次表达,经再次治疗后仅达部分缓解,其BMI-1基因表达持续阳性。结论:BMI-1基因在白血病中存在较高的表达,在正常人及完全缓解病例中无表达,且与疾病的转归相关,提示BMI-1基因高表达可能参与白血病的发生、发展过程,有可能作为一种分子标志,为白血病的靶向治疗提供新的位点。

Bmi1、EZH2在食管鳞癌中的表达及其临床价值

目的探讨Bmi1与EZH2共同高表达对食管鳞癌的影响。方法回顾性分析82例食管鳞癌患者的临床资料,考察Bmi1与EZH2在食管鳞癌组织中的表达情况及其对食管鳞癌患者生存率的影响,并进一步分析Bmi1与EZH2的表达情况对食管鳞癌的影响是否存在关联性。结果肿瘤组织Bmi1与EZH2的IS得分均明显高于癌旁组织(P<0.05);Bmi1高表达组患者2～5年及5年生存率较Bmi1低表达组低(P<0.05),EZH2高表达组患者各时间段生存率与低表达组比较差异无统计学意义(P>0.05);Bmi1与EZH2共同高表达组与其他组的食管鳞癌患者的P16表达情况差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Bmi1与EZH2与食管鳞癌的发生和发展有密切联系,且影响食管鳞癌患者的预后,Bmi1与EZH2共同高表达是食管鳞癌发生的独立危险因素。

土木香内酯抑制宫颈癌细胞的增殖及其机制研究

目的观察土木香内酯对Hela细胞BMI1基因表达的影响,探讨AL抑制Hela细胞增殖的可能机制。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞株,CCK8(cell counting kit⁃8)法和平板克隆实验检验AL对Hela细胞活性及增殖能力的影响;通过Real⁃time PCR与Western blot检测经AL处理过的Hela细胞BMI1基因的表达情况;Real⁃time PCR与western blot检测沉默和过表达BMI1基因的效率;过表达BMI1基因后检测AL对Hela细胞增殖的影响。结果AL能显著抑制Hela细胞的活性及增殖能力,且呈明显的剂量依赖性;Hela细胞经AL处理后,BMI1的转录和蛋白表达明显降低;过表达BMI1基因后,Hela细胞的活性增强,AL可抑制由BMI1过表达引起的细胞活性增强;shRNA干扰BMI1后,BMI1的表达显著降低,再施予AL,BMI1的表达降低更加明显。结论AL抑制宫颈癌细胞增殖,其机制可能是通过抑制BMI1的表达发挥作用。

EPO在缺氧环境下对神经保护机制的研究

目的讨论促红细胞生成素(EPO)对氯化钴(CoCl2)缺氧环境下U251细胞增殖以及对BMI1基因转录水平的影响,为研究EPO对神经保护的作用奠定基础。方法将实验细胞分为对照组(0μmol/mL CoCl2)、CoCl2组(400μmol/mL CoCl2)和CoCl2+EPO组(400μmol/mL CoCl2和75 U/mL EPO)。通过CCK-8法检测CoCl2对细胞增殖的影响来评价缺氧模型;CCK-8法检测缺氧条件下EPO对U251细胞增殖的影响;qPCR法检测CoCl2组和CoCl2+EPO组中BMI1基因转录水平的变化。结果 CoCl2组48 h细胞增殖水平低于对照组比较,差异有统计学意义(P <0.05);CoCl2+EPO组增殖水平高于CoCl2组胞,差异有统计学意义(P <0.05)。CoCl2+EPO组BMI1基因转录水平高于CoCl2组,差异有统计学意义(P <0.05)。结论本研究成功构建CoCl2对人神经胶质U251细胞的缺氧模型,EPO在缺氧环境下通过上调BMI1基因的表达促进U251细胞的增殖,EPO对神经细胞具有保护作用。