TNF-α对损伤的内侧副韧带和前交叉韧带中BMP-1基因表达的影响

目的：就TNF—α对损伤的内侧副韧带和前交叉韧带中BMP-1基因表达的影响进行探讨。方法：选择重庆医科大学附属第一医院骨科教研室在2011年09-11月时间内所收集到的4例滑膜组织和交叉韧带标本，其中女2例，男2例，截肢膝关节相应组织是在无菌条件下用镊子和剪刀来取得。先细胞培养，其次，pET32a（＋）-Tat—PTD—VP3重组质粒构建示，分别测定半定量PCR、实时定量PCR。结果：本组资料研究表明，TNF-α作用时间分别为24h、12h、6h、2h，作用浓度为5ng／ml。对于那些已经损伤的MCL细胞中，BMP-1的表迭随着TNF-α浓度的不断增加也会出现避步的下降趋势，用实时定量PCR来进行显示，BMP-1表这为117％、70％、62％、41％。而对于那些已经损伤的ACL细胞中，BMP-1的表达随着TNF-α浓度的不断增加会出现逐渐下降的趋势。用实时定量PCR来进行显示，BMP-1表达从最初的69％，下降到最后的27％。结论：TNF-α能够有效地下调ACL作用，以及前交叉韧带（ACL）和内侧刮韧带（MCL）中BMP～1基因表述都出现了较大的下降，本实验为有效促进ACL自我修复，早期抑制TNF-α浓度提供了较好的理论依据。

黄河鲤肌间骨转录组分析及斑马鱼bmp1基因敲除模型构建

肌间骨(IBs)由肌膈间的肌腱骨化而来,仅存在于低等硬骨鱼类中,研究选取黄河鲤(Cyprinus carpio haematopterus)肌间骨发育前后两个关键阶段进行转录组测序,并对差异表达基因进行功能富集分析.结果表明:测序共获得高质量有效序列120356780条,共筛选出差异表达基因3454个(上调1283个,下调2171个).GO和KEGG分析显示差异基因主要富集于胞外区域、跨膜运输、氧化还原过程、催化活性、蛋白结合等功能,参与次生代谢物的生物合成、PI3K-Akt信号通路、AMPK信号通路、糖酵解等.经qRT-PCR验证差异基因表达谱与RNA-seq结果基本一致后,为进一步了解其生物功能,选取两阶段中显著上调基因bmp 1,利用CRISPR/Cas9建立bmp 1突变的嵌合体斑马鱼(Danio rerio).测序验证bmp 1突变品系已成功构建,表型观察结果发现突变型明显发育迟缓且尾部出现脊椎畸形.

Gremlin-1在骨关节炎中的研究进展

Gremlin-1是一种骨形态发生蛋白(BMP)拮抗剂,通过与受体直接结合并抑制BMP信号传导而发挥作用,其中BMP参与了骨骼组织正常发育以及维持体内平衡的过程,据研究显示,由Gremlin-1抑制BMP蛋白在骨关节炎(OA)的发生、发展中有着极大的意义,如今,有许多学者研究发现Gremlin-1与OA的进展有密切的联系,值得注意的是,Gremlin-1还参与了相关信号通路干扰间充质干细胞的细胞活力以及介导成骨细胞分化的过程,致使OA的进一步恶化。因此本文主要从Gremlin-1基因出发,探讨与OA的关系以及介导的相关信号通路抑制骨形成过程而影响OA进展做一综述。

骨碎补总黄酮对大鼠胫骨牵张末期BMP-2与Smad-1表达的影响

目的：探讨骨碎补总黄酮干预下BMP-2与Smad-1在大鼠胫骨牵张成骨末期中的表达。方法：40只大鼠建立大鼠胫骨牵张成骨模型,随机分成4组,分别为对照组、中药组、阻遏剂组及阻遏剂加中药组,每组10只。所有大鼠于牵张第20天时给予拍片评估,处死,取标本,HE染色评价成骨质量,用免疫组化分析各组BMP-2与Smad-1的表达。结果：中药组BMP-2与Smad-1的表达最高（P〈0.05）,阻遏剂加中药组明显高于阻遏剂组（P〈0.05）。结论：BMP-2与Smad-1的表达在牵张成骨期间对成骨有重要促进作用,补肾法可以促进大鼠胫骨牵张末期BMP-2与Smad-1的表达。

TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖及橙皮素、芍药苷的干预

目的：探讨橙皮素和芍药苷对正常培养及TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法：首先,0、50、100、150、200μg/mL的橙皮素或芍药苷作用于正常培养条件下的人肺动脉血管平滑肌细胞,24 h及48 h检测药物的细胞增殖抑制率。接着,应用均匀设计制订TGF-β1与BMP的剂量组合,诱导细胞增殖,多元线性回归和单因素方差分析确定诱导细胞增殖的TGF-β1与BMP的优化剂量组合;应用该剂量诱导细胞增殖,MTT和Brd U两种方法检测药物对细胞增殖的影响。结果：150、200μg/mL的橙皮素或芍药苷抑制正常培养条件下的细胞增殖（P〈0.05或0.01）。多元回归方程显示：TGF-β1和BMP-4对细胞增殖的影响相互拮抗,7.5 ng/mL TGF-β及20 ng/mL BMP-4显著增加细胞的增殖（P〈0.05）。12.5-100μg/mL的橙皮素不能显著抑制TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖（P〉0.05）;25-100μg/mL的芍药苷显著抑制TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖（P〈0.05或0.01）。结论：橙皮素和芍药苷均抑制正常肺动脉平滑肌细胞的增殖。芍药苷抑制TGF-β1/BMP-4诱导肺动脉血管平滑肌细胞增殖,具有较高的研究与开发价值。

脊髓损伤大鼠膝关节软骨IL-1、BMP-2表达及肢体功能评价

目的观察脊髓损伤大鼠膝关节软骨BMP-2(bone morphogenetic protein-2)和IL-1(interleukin-1)的表达及分布特点,探讨脊髓损伤后肢体感觉运动障碍对膝关节软骨退变的影响。方法清洁级3月龄雌性SD大鼠36只,随机分为脊髓损伤组(spinal cord injury,SCI) 18只、对照组18只。脊髓损伤组采用改良的Allen打击法建立模型,对照组仅行T10椎板切除术。分别在术后第1,2,3,4,5,6周观察大鼠后肢感觉运动功能恢复的情况,并记录结果。术后第1,3,6周取大鼠膝关节软骨常规石蜡包埋及切片,免疫组化染色检测BMP-2和IL-1阳性细胞表达及分布特点。结果改良Rivlin斜板实验结果显示,损伤后第1周是运动功能下降最明显时期,两组间差异具有统计学意义(P <0. 01)。伤后6周的恢复期内,对照组BBB(Basso Beattie and Bresnahan)评分高于损伤组,差异有统计学意义(P <0. 01)。伤后第1周关节软骨IL-1阳性表达强度高于对照组,差异具有统计学意义(P <0. 01);第3周BMP-2阳性表达强度高于对照组,差异具有统计学意义(P <0. 05);第6周时IL-1与BMP-2的阳性表达强度均高于对照组,差异具有统计学意义(P <0. 01)。结论脊髓损伤早期关节软骨中IL-1表达较强;随着神经功能的恢复BMP-2的表达逐渐增强。改良Rivlin斜板实验可作为脊髓损伤后大鼠一般行为的观察指标,BBB评分可作为脊髓损伤后肢体功能恢复的评价方案。

肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏bmp-7、pdgf、timp-1 mRNA表达的影响

目的:通过观察肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏bmp-7、pdgf、timp-1 mRNA表达的影响,探讨肾衰饮延缓慢性肾功能衰竭的药效学机制。方法:52只SD大鼠随机分为正常组、模型组、尿毒清组及肾衰饮组。采用腺嘌呤灌胃法制作大鼠肾衰模型。造模成功后肾衰饮组大鼠给予肾衰饮煎剂灌胃,尿毒清组大鼠给予尿毒清颗粒灌胃,各组大鼠连续给药4周,全自动生化分析仪检测血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)及白蛋白水平,HE染色及Masson染色观察各组大鼠肾组织病理变化,Real time-PCR技术检测大鼠肾脏bmp-7、pdgf、timp-1 mRNA表达情况。结果:与正常组比较,模型组血肌酐、尿素氮水平显著升高(P<0.01),白蛋白水平显著降低(P<0.01);与模型组比较,肾衰饮组和尿毒清组大鼠血肌酐、尿素氮水平均显著降低(P<0.01);白蛋白水平均显著升高(P<0.01)。HE及Masson染色显示模型组大鼠肾脏组织发生明显的病理学改变,肾衰饮组及尿毒清组大鼠肾脏病理改变发生明显改善。与正常组相比,模型组大鼠肾脏bmp-7基因mRNA表达水平显著下降(P<0.01),pdgf、timp-1基因mRNA表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,肾衰饮组大鼠肾脏bmp-7基因mRNA表达水平显著升高(P<0.01),pdgf、timp-1基因mRNA表达水平显著下降(P<0.01)。结论:肾衰饮可能通过调节慢性肾功能衰竭大鼠肾脏bmp-7、pdgf、timp-1 mRNA表达,发挥其延缓慢性肾功能衰竭进展的重要生物学作用。

丹酚酸A对慢性肾衰竭大鼠BMP-7/Smads/TGF-β1信号通路的调控作用

目的:观察丹酚酸A对5/6肾切除(Platt法)大鼠肾组织骨形态发生蛋白-7(BMP-7)、转化生长因子β_1(TGF-β_1)/Smads信号通路的调节作用。方法:将40只大鼠随机分为:假手术组、模型组、丹酚酸A组、科素亚组,采用Platt法复制慢性肾衰竭大鼠模型,术后8周分别观察大鼠肾组织BMP-7、Smad6、TGF-β_1蛋白及基因的表达,p-Smad2/3、p-Smad1/5/8的蛋白表达。结果:各治疗组大鼠肾组织BMP-7、Smad6、p-Smad1/5/8的表达较模型组升高(P<0.01 or P<0.05),TGF-β_1、p-Smad2/3的表达较模型组明显减弱(P<0.01 or P<0.05)。结论:丹酚酸A可能是通过诱导BMP-7、Smad6、p-Smad1/5/8蛋白表达,抑制p-Smad2/3蛋白表达,调节BMP-7/Smads/TGF-β_1信号通路,抑制了TGF-β_1信号向细胞核内转导的通路,从而抑制细胞外基质增生,起到延缓肾纤维化的作用。

BMP-4与17β-雌二醇对MBA-1细胞护骨素表达的影响

目的探讨骨形态生成蛋白-4(BMP-4)与17β-雌二醇对小鼠骨髓基质细胞株MBA-1细胞护骨素表达的影响。方法用BMP-4及17β-雌二醇干预MBA-1细胞后,用RT-PCR和Western印迹检测护骨素表达的变化。结果在无BMP-4或17β-雌二醇干预的情况下,MBA-1细胞在自身分化成熟过程中伴有护骨素的表达增加;经BMP-4与17β-雌二醇干预后可上调MBA-1细胞护骨素表达增加。结论BMP-4与17β-雌二醇可上调MBA-1细胞护骨素表达,从而诱导MBA-1细胞向成骨细胞方向分化。

不同缺氧时间点对小鼠心脏成纤维细胞旁分泌TGF-β1和BMP-2的影响

目的:探讨不同缺氧时间点对小鼠心脏成纤维细胞旁分泌TGF-β1、BMP-2蛋白和mRNA的影响。方法:将体外分离培养的第2代小鼠心脏成纤维细胞,分别缺氧0、12、24、48 h。ELISA法和RT-PCR法检测不同时间点心脏成纤维细胞旁分泌TGF-β1、BMP-2的蛋白和mRNA水平。结果:相较于缺氧0 h,缺氧12 h后TGF-β1的蛋白和mRNA表达呈上调趋势,但24 h、48 h后逐步下调;而BMP-2在缺氧12 h、24 h后,蛋白和mRNA表达均逐步上调,48 h后mRNA水平下调。与缺氧24 h相比,缺氧48 h后TGF-β1和BMP-2的蛋白以及mRNA表达均下调。结论:不同缺氧时间诱导的心脏成纤维细胞旁分泌TGF-β1和BMP-2的变化,可能参与了心肌纤维化的病理过程。

TSP-1与BMP-7在慢性鼻-鼻窦炎鼻黏膜组织中的表达及意义

目的观察血小板反应蛋白-1(TSP-1)、骨形态发生蛋白-7(BMP-7)在慢性鼻-鼻窦炎(CRS)患者鼻黏膜组织中的表达变化,探讨其在CRS发病机制中的意义。方法采用酶联免疫吸附方法检测TSP-1、BMP-7及转化生长因子β1在鼻黏膜组织中的含量变化。结果随着CRS不伴鼻息肉型患者分期的增高,TSP-1和TGF-β1水平逐渐升高(P<0.05),BMP-7水平逐渐下降(P<0.05)。随着CRS伴鼻息肉型患者分期的增高,TSP-1和TGF-β1水平均明显下降(P<0.05),BMP-7水平均明显升高(P<0.05)。结论 TSP-1与BMP-7在CRS中表达异常,可能在CRS发病机制中发挥作用。

IGF-1基因转染对骨髓基质细胞分泌IGF-1、VEGF、BMP-2的影响

目的:观察胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因转染的骨髓基质细胞(MSCs)合成IGF-1、血管内皮细胞生长因子(VEGF)和骨形成蛋白-2(BMP-2)的变化,进一步了解基因转染骨髓基质细胞的生物学特性。方法:将含有IGF-1基因的真核质粒转染入大鼠骨髓基质细胞(MSCs)中,以正常培养的MSCs为对照组,分别于1、3、5、7 d对MSCs进行IGF-1、VEGF和BMP-2免疫组化观察。通过图像分析的方法检测IGF-1基因转染对MSCs合成IGF-1、VEGF和BMP-2的影响。结果:IGF-1基因转染后可促进MSCs合成IGF-1、BMP-2、VEGF(P<0.05),第三天合成IGF-1、BMP-2、VEGF作用最明显。结论:IGF-1基因转染的MSCs较未转染细胞合成IGF-1、BMP-2、VEGF明显增加。

BMP-7联合IGF-1对兔退变髓核细胞生物学活性的影响

目的探讨骨形态发生蛋白-7(BMP-7)联合胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对体外培养兔退变髓核细胞(NPCs)生物学活性的影响。方法通过建立兔腰椎间盘退变模型及体外培养兔退变NPCs,将实验兔随机分为4组,即对照组、BMP-7干预组、IGF-1干预组、BMP-7和IGF-1联合干预组。BMP-7和IGF-1干预3d、5 d、7 d后,通过MTT法检测各组细胞活力,用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,RT-PCR检测NPCs中Ⅱ型胶原和蛋白聚糖(PG)的mRNA水平,ELISA检测各组细胞液中Ⅱ型胶原蛋白含量,二甲基亚甲基蓝比色法检测各组PG的含量。结果 BMP-7或IGF-1单独或联合给药都能显著提高NPCs活力、抑制细胞凋亡,并提高Ⅱ型胶原和PG mRNA及蛋白含量,且联合给药促进程度大于单独给药,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BMP-7联合IGF-1可提高体外培养兔退变NPCs活力及功能性蛋白的表达。

BMP-2、TGF-β1在颈椎后纵韧带骨化症发病机制中的作用

后纵韧带骨化系脊椎后纵韧带的进行性增生性骨化,以颈椎部位多见。颈椎后纵韧带骨化症的病因目前尚未明确,可能与多种因素有关,如年龄、种族、基因、内分泌异常、生长因子和应力的改变等,其中很多和骨形成有关的生长因子,如转化生长因子超家族,在其发病机制中具有重要的作用。近年来,通过大量的组织化学和细胞化学实验证明,BMPs和TGF-β在颈椎后纵韧带骨化症发病机制的研究中有重要意义[1]。

印度将升级BMP-1步兵战车动力组件

据《简氏防务周刊》2014年10月15日报道,印度国防部已向印度制造商发出建议征求书,旨在通过升级正在印度陆军服役的BMP-1步兵战车动力组件,使其服役年限延长15年。根据建议征求书的要求,目前功率210kW的UTD-20型发动机和手动变速箱将升级为印度产功率为294kW的发动机和自动变速箱。升级工作计划在位于印度普内的512陆军基地车间实施,升级完成后将由印度陆军进行测试,一年后进行批量升级。印度向苏联订购并装备了700辆BMP-1步兵战车,而后被BMP-2S和"萨拉斯"步兵战车(采用俄罗斯变速箱技术的国产战车)所取代。

rhIGF-1对成骨细胞增殖、BMP-2及Cbfa1基因表达的影响

目的通过重组人胰岛素样生长因子(rhIGF-1)对体外成骨细胞增殖、骨形态蛋白-2(BMP-2)及核心结合因子1(Cbfa1)基因表达的影响,探讨rhIGF-1对骨代谢影响的可能机制。方法不同浓度的rhIGF-1(0、10、50、100ng/ml)刺激体外培养的大鼠成骨细胞,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,用半定量RT-PCR法检测成骨细胞BMP-2、Cbfa1基因的表达。结果rhIGF-1可明显促进成骨细胞增殖(P<0.05),并促进成骨细胞BMP-2、Cbfa1基因的表达(P<0.01),具有浓度依赖性。结论rhIGF-1可促进成骨细胞的增殖、分化及成熟,可能是通过增强BMP-2、Cbfa1基因的表达来实现的。

壮筋续骨汤对骨折大鼠血清BMP-7和IGF-1水平的影响和意义

目的 研究壮筋续骨汤对大鼠股骨骨折后骨形态发生蛋白（BMP-7）和胰岛素样生长因子-1（IGF-1）血清水平的变化,探讨其促进骨折愈合的作用机制。方法 成年健康雄性Wistar大鼠72只,用低速牙科钻在股骨中段切断股骨制备骨折模型,应用壮筋续骨汤水煎液干预治疗。X线观察骨折局部愈合情况,组织病理学观察骨痂结构,酶联免疫吸附试验检测血清BMP-7和IGF-1水平。结果 大鼠骨折后7 d骨折断端主要为纤维肉芽组织,14 d为纤维-软骨性骨痂组织,21 d骨性骨痂增多,模型组与治疗组未见显著差异,28 d治疗组骨痂重塑质量明显优于模型组。大鼠术后7~21 d,治疗组和模型组血清BMP-7和IGF-1水平无显著性差异,术后28 d均显著降低（P〈0.05）,但治疗组明显高于模型组（P〈0.05）。结论 壮筋续骨汤可能通过降低内源性BMP-7和IGF-1降解,增强其活性,发挥促进骨折愈合的作用。

盐酸二甲双胍对成骨细胞增殖、BMP-2及Cbfa-1基因表达的影响

目的初步研究二甲双胍(MF)在体外对小鼠颅盖骨成骨细胞增殖、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)及核心结合因子(Cbfa-1)mRNA表达的影响,探讨二甲双胍对骨代谢的可能作用机制。方法 (1)分离培养原代颅盖骨成骨细胞并对其进行鉴定。(2)以乳鼠成骨细胞为体外实验模型,不同浓度(0、50、100、200、400μmol/L)的MF干预体外培养的成骨细胞24h后,MTT法检测成骨细胞的增殖能力,实时荧光定量PCR法检测成骨细胞BMP-2及Cbfa-1基因表达。结果二甲双胍干预成骨细胞24h后,可促进成骨细胞的增殖,在浓度400μmol/L的OD值最大为0.298±0.047(P<0.05);可促进BMP-2及Cbfa-1mRNA的表达,呈剂量效应关系。结论二甲双胍可促进成骨细胞的增殖和分化,可能通过调节BMP-2及Cbfa-1的表达,从而促进骨的形成。

接骨续筋口服液对家兔骨折愈合过程BMP-2、TGF-β1表达的影响

目的:观察接骨续筋口服液主要成分对兔骨折愈合过程中骨痂中BMP-2、TGF-β1的影响。方法:选取健康8个月龄长耳新西兰大白兔80只,随机取12只作为假手术组;其余60只制作骨折模型后再分为5组,分别为模型组、对照组、接骨续筋口服液低、中、高剂量组,每组12只;余8只预留意外死亡。于术后第2天开始给药,假手术组及模型组动物灌等容量的蒸馏水;接骨续筋口服液按低剂量组、中剂量组、高剂量组灌胃给药;对照组以云南白药灌胃给药。每组分批于术后1、2、4周各处死3只,以检测接骨续筋口服液对不同时期骨折愈合过程中骨痂中BMP-2、TGF-β1表达影响。结果:在家兔骨折造模后愈合中1W,2W,4W接骨续筋口服液高剂量组骨痂中BMP-2、TGF-β1明显高于其余各组。结论:接骨续筋口服液能通过提高骨折后骨痂内BMP-2、TGF-β1的表达,从而促进骨折愈合。

包载rhBMP-2和SDF-1的双层纳米微球的构建及体外释药研究

目的:构建搭载基质细胞衍生因子1(SDF-1)和人骨形态发生蛋白2(rh BMP-2)的双层纳米微球缓释系统,研究其体外释药特性。方法:用"乳化-溶剂挥发法"制备聚乳酸/壳聚糖(PLA/CS)双层纳米微球,通过正交试验获得最佳制备参数;动态光散射法测定纳米微球的粒径,电镜观察纳米微球的形态;在乳化过程中将rh BMP-2和SDF-1依次加入纳米微球中,计算其包封率和载药量,透析袋扩散法检测其体外缓释效果。结果:制备的双层纳米微球外形圆整,表面光滑,平均粒径为(542.33±14.38)nm,微球之间无粘连。rh BMP-2包封率为(82.41±1.05)%,载药量为(24.67±0.43)ng/mg;SDF-1包封率为(75.58±0.84)%,载药量为(22.63±0.41)ng/mg。药物释放持续至少30 d,呈"双相释放"。第30天时累计释放的rh BMP-2和SDF-1分别为72.85%和91.01%。结论:成功制备了包裹SDF-1和rh BMP-2的双层载药微球,形态良好,包封率较高,体外缓释效果较好。