BMP-4cDNA的克隆表达及活性的初步测定

目的利用原核基因工程生产有诱骨活性的骨形态发生蛋白 - 4 (BMP - 4 )。 方法应用RT -PCR技术 ,从成熟人的胎盘组织中扩增出长 0 .34Kb编码人骨形态发生蛋白 - 4成熟肽的基因序列 ,经测序证实后 ,装入表达载体pET - 2 2b ,诱导表达后SDS -PAGE显示在 14kd处有一明显的表达条带。经初步鉴定 ,证实表达蛋白部分位于裂菌处理后的上清中 ,部分以包涵体的形式存在于沉淀中。将沉淀中的包涵体蛋白纯化、变性和复性处理 ,和上清中的蛋白分别经真空冷冻干燥后 ,植入小鼠的肌肉内检测蛋白活性。 结果第 14d和 2 1d ,组织切片可见骨细胞和骨基质的形成。 结论大肠杆菌表达的BMP -