BMP⁃2/Smad信号通路探讨金匮肾气丸对BMSCs成骨分化的影响

目的观察金匮肾气丸含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的影响并探讨其发生的作用机制。方法制备金匮肾气丸含药血清,CCK⁃8法筛选出最佳浓度的金匮肾气丸含药血清对BMSCs向成骨分化的影响。将BMSCs分为空白组(control组)、成骨诱导组(OIS)、空白血清组(ROIS组)及含药血清组(JKSQ⁃OIS),分别对各组BMSCs进行成骨诱导。连续干预14 d及21 d后,分别进行碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红染色镜下观察各组碱性磷酸酶活性和成骨矿化水平;连续干预14 d后,实时荧光定量PCR(q⁃PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测各组BMSCs中骨形态发生蛋白2(BMP⁃2)、Smad1、ALP、Runt相关转录因子2(runt⁃related transcription factor 2,Runx2)及成骨细胞特异性转录因子(Osterix,OSX)mRNA和蛋白的相对表达量。结果与control组相比,OIS组与ROIS组出现点状矿化结节,ALP染色轻微变深,ALP和Runx2 mRNA及蛋白的表达上升(P<0.05,P<0.01),OSX的表达上升但不明显(P>0.05);与OIS组相比,JKSQ⁃OIS组矿化结节成片分布,ALP染色明显加深,BMP⁃2、Smad1、ALP和Runx2 mRNA及蛋白的表达上升(P<0.05,P<0.01),OSX mRNA及蛋白表达有上升趋势(P>0.05)。结论金匮肾气丸含药血清可能通过调控BMP⁃2/Smad信号通路,上调ALP、Runx2和OSX的表达,促进BMSCs向成骨分化,改善OP。

骨质疏松性椎体压缩性骨折患者血清BMP-2,Runx2水平对术后骨折延迟愈合的预测价值

目的探讨骨质疏松性椎体压缩性骨折(Osteoporotic vertebral compressibility fracture,OVCF)患者血清骨形态发生蛋白-2(Bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、核心结合因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)水平对术后骨折延迟愈合的预测价值。方法选取2020年1月-2023年4月徐州医科大学附属淮安医院骨科收治的260例OVCF患者为研究对象,均采用经皮椎体成形术(Percutaneous vertebroplasty,PVP)或椎体后凸成形术(Percutanous kyphoplasty,PKP)治疗,根据术后3个月骨折愈合情况分延迟愈合组、正常愈合组。分析OVCF患者术后骨折延迟愈合的影响因素及血清BMP-2,Runx2水平对术后骨折延迟愈合的预测价值。绘制决策曲线和临床影响曲线,评价血清BMP-2,Runx2水平对术后骨折延迟愈合的价值。结果260例患者术后无失访,22例出现骨折延迟愈合,发生率为8.46%(22/260)。延迟愈合组年龄、吸烟比率、合并糖尿病比率、合并甲状腺疾病比率、有椎体裂隙征比率大于正常愈合组,骨密度T值、术前和术后3个月血清BMP-2,Runx2水平小于正常愈合组,差异有统计学意义(P<0.05)。合并糖尿病、有椎体裂隙征是OVCF患者术后骨折延迟愈合的独立危险因素,骨密度T值、BMP-2,Runx2是OVCF患者术后骨折延迟愈合的独立保护因素(P<0.05)。BMP-2,Runx2联合预测OVCF患者术后骨折延迟愈合对应AUC值为0.856。阈值在0.10~0.63范围内,BMP-2,Runx2联合评估模型评估OVCF患者术后骨折延迟愈合的净受益率优于单独检测。在阈值概率为0.26时,被该模型划分入高风险的人数与真阳性人数基本达成一致。结论OVCF患者血清BMP-2,Runx2水平降低,二者联合检测对术后骨折延迟愈合具有较高的预测效能。

载硅烷和BMP-2的多孔钛表面构建及其成骨活性评价

目的探究钛材纳米多孔表面载硅烷和骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的制备方法和制备表面促成骨能力评价。方法采用碱热处理、硅烷化修饰和BMP-2固定,构建硅烷和BMP-2修饰的纳米多孔表面,扫描电子显微镜、X射线光电子能谱、红外光谱和水接触角检测分别表征制备过程中表面形貌、元素、官能团和亲水性的变化,免疫荧光观察固定的BMP-2,细胞活性测试和细胞荧光染色分析表面促成骨细胞黏附和增殖能力,碱性磷酸酶活性评估促细胞成骨能力。结果材料表征手段证实硅烷和BMP-2成功固定在纳米多孔钛表面,细胞评价证实制备表面不但显著增强成骨细胞的黏附和增殖,而且大幅提升成骨细胞的成骨活性。结论该修饰方法构建的表面对成骨细胞具有更好的相容性,有望改善钛基种植体的骨整合能力。

藤黄健骨丸调控BMP-2/Smad信号通路治疗绝经后骨质疏松症

目的观察藤黄健骨丸对绝经后骨质疏松症模型大鼠的治疗作用。方法将72只雌性大鼠随机分为6组,分别为假手术组(SHAM)、模型组(OVX)、仙灵骨葆胶囊组(XLGB)、藤黄健骨丸低剂量组(THJGW-L)、藤黄健骨丸中剂量组(THJGW-M)及藤黄健骨丸高剂量组(THJGW-H)。手术造模3 d后给药,除假手术组、模型组灌胃蒸馏水外,其余4组均按照相应剂量灌胃药物。连续灌胃8周后,分别检测大鼠术后各阶段体质量、子宫和肾脏重量、骨强度值,观察股骨病理变化。Western-blot法检测大鼠股骨中Runx2、BMP-2和Smad1蛋白表达水平。结果实验结果显示,藤黄健骨丸可以增加去卵巢大鼠的子宫和肾脏重量,能够提高去卵巢大鼠的股骨荷载力,改善骨微结构,增加钙离子沉积,增加骨细胞数量。Western-blot结果显示去势大鼠骨组织中Runx2、BMP-2和Smad1相对蛋白水平降低,经过藤黄健骨丸治疗后,Runx2、BMP-2和Smad1相对蛋白水平显著升高。结论藤黄健骨丸可以提高去势大鼠骨强度,改善骨组织形态,其作用机制可能与调控BMP-2/Smad信号通路来促进骨形成,对绝经后骨质疏松症有一定的治疗作用。

壳聚糖/BMP-2质粒温敏水凝胶复合体生物相容性及修复大鼠颅骨缺损的研究

目的 构建壳聚糖(CS)/骨形态发生蛋白2(BMP2)质粒温敏水凝胶复合体CS/壳聚糖纳米粒(CSn)(pDNA-BMP2)-GP,研究其生物相容性及其在大鼠颅骨缺损再生中的作用。方法 将1 mL CS/CSn-GP复合体注入18只SD大鼠左、右后肢大腿肌袋内,于第3天、第1、2、4、6、9周随机处死3只大鼠,取注射部位及邻近组织,苏木精和伊红染色后观察其炎症反应。将32只SD大鼠按照随机数字表法分为两组:CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP组、CS/CSn-GP组,各16只。在大鼠颅骨人字缝的左右两侧,各做一直径为5 mm的骨缺损,在每只实验鼠左侧的颅骨缺损区不放入任何材料,作为空白组,右侧分别植入各组材料。术后分别于第4、8周时随机处死6只大鼠,取出样本进行CT测量颅骨缺损面积及苏木精和伊红染色评价骨再生情况。结果 苏木精和伊红切片显示,复合体注入肌袋后,未见明显炎症反应;术后第4、8周,在骨修复质量及速度上,CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP组明显优于空白组和CS/CSn-GP组。术后第4、8周,颅骨缺损面积CT结果显示:CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP组骨缺损面积分别为(0.06683±0.00248)、(0.02017±0.00816)S/cm^(2),均明显低于空白组[(0.15033±0.01748)、(0.05150±0.01183)S/cm^(2)]和CS/CSn-GP组[(0.12650±0.00706)、(0.03883±0.00422)S/cm^(2)],差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CS/CSn-GP复合修复体系组织相容性良好,可作为良好的组织工程支架。壳聚糖/BMP-2质粒温敏水凝胶复合修复体系CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP可以诱导大鼠颅骨临界尺寸骨缺损内的新骨形成,骨质量优于其他组。

壳聚糖/BMP-2质粒温敏水凝胶复合体促犬牙槽骨再生的研究

目的 进行壳聚糖/BMP-2质粒温敏水凝胶复合体系CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP的构建,对犬牙槽骨再生中此复合体系的作用进行分析。方法 将4只比格犬第2、3前磨牙建立牙周炎模型,实验牙齿随机划分为3组:CS/CSn-GP组、CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP组、空白对照组。CS/CSn-GP组注入不含BMP-2的壳聚糖水凝胶复合体(CS/CSn-GP);CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP组注入壳聚糖/BMP-2质粒温敏水凝胶复合体CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP,空白对照组不注入任何材料。8周后处死,采用Masson染色法观察牙周炎部位牙槽骨再生状况;钙钴法观察骨缺损部位碱性磷酸酶(ALP)表达状况。结果 Masson染色显示CS/CSn-GP组与CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP组,均有不同程度的牙槽骨再生,CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP组再生显著;钙钴法显示CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP组ALP强阳性,CS/CSn-GP组ALP弱阳性,空白对照组为阴性。3组ALP阳性部位着色的平均光密度值比较,CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP组> CS/CSn-GP组>空白对照组,两两比较P均﹤0.05。结论 CS/CSn-GP复合修复体系对牙槽骨再生有着积极影响,包载pDNA-BMP-2后,有着更显著的促牙槽骨再生作用。

BMP-2/Smads/Osterix信号在氟化钠诱导大鼠成骨细胞增殖分化中的作用研究

目的探讨氟化钠对大鼠颅骨成骨细胞增殖分化的影响,并进一步研究BMP-2/Smads/Osterix信号的调控机制。方法选择新生SD大鼠(24 h以内)颅骨,分离大鼠颅骨中的成骨细胞,进行体外原代培养。分别用不同浓度的氟化钠作用于成骨细胞,用噻唑蓝(MTT)、碱性磷酸酶观察氟化钠对大鼠成骨细胞的影响,并用蛋白印迹法测定BMP-2蛋白、Smad1/5/9蛋白、Osterix蛋白的表达。结果与对照组相比,低剂量的氟化钠(0.25mmol/L、0.50 mmol/L)暴露于成骨细胞,成骨细胞增殖明显、碱性磷酸酶活性增强,而当高剂量的氟化钠(2.00mmol/L、4.00 mmol/L)刺激成骨细胞,成骨细胞的增殖明显受到抑制、碱性磷酸酶活性降低;与对照组比较,低剂量氟化钠浓度为0.50 mmol/L时,BMP-2蛋白、Smad1/5/9蛋白、Osterix蛋白的表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论低浓度氟化钠可通过BMP-2/Smads/Osterix信号促进大鼠成骨细胞的增殖和分化,高浓度氟化钠则抑制成骨细胞的增殖分化。

周期性牵张力通过调控BMP2对人牙周膜成纤维细胞成骨分化的初步研究

目的探究周期性牵张力对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)中骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)表达的影响及对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)成骨分化的作用。方法体外培养hPDLFs,分为3组(空白对照组、6 h组、12 h组),分别不加力、加力6 h和12 h。使用免疫荧光实验检测3组细胞骨架蛋白表达情况;使用Western Blot实验检测3组BMP-2表达情况;碱性磷酸酶染色试剂盒及茜素红染色实验分别用于检测3组碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性及骨钙结节形成情况。结果免疫荧光实验结果显示6 h组、12 h组hPDLFs骨架蛋白表达明显高于空白对照组;Western Blot实验结果显示6 h组、12 h组BMP-2蛋白表达明显高于空白对照组且具有统计学意义(P<0.05);ALP染色实验结果显示6 h组、12 h组中ALP活性明显高于空白对照组;茜素红染色实验结果显示6 h组、12 h组骨钙结节形成明显高于空白对照组。结论周期性牵张力的施加会促进hPDLFs中BMP-2的表达并促进hPDLFs成骨分化,可为临床口腔正畸进一步提供理论依据。

BMP-2和FGF-2对小鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响

目的：观察骨形成蛋白（BMP-2）和成纤维细胞生长因子2（FGF-2）对小鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）向成骨细胞分化的影响。方法：取3-18月雄性C57BL/6J小鼠（共50只）的骨髓细胞,分离贴壁培养后,用免疫磁珠法纯化,并鉴定为MSCs后,再进行贴壁培养24h后,分别在成骨细胞诱导培养液中加入100μg/LBMP-2和0.5nmol/LFGF-2持续诱导7、14、21d后,进行碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性检测,Vonkossa染色以及茜素红染色,并用递转录荧光定量PCR法检测向成骨细胞分化的标志性基因（Runx2/cbfa1、Alp、collagen-1、osteocalcin）的表达情况。结果：BMP-2刺激组的ALP活性以及钙化结节明显高于对照组,Runx2/cbfa1,ALP,collage-1,osteocalcin的mRNA呈高表达;FGF-2刺激组的ALP活性以及钙化结节也高于对照组,Runx2/cbfa1、Alp、collagen-1、osteocalcin的mRNA表达量也高于对照组,但不如BMP-2明显。结论：BMP-2和FGF-2在不同程度上促进体外培养的小鼠MSCs向成骨细胞方向分化。

川芎嗪对膝骨性关节炎大鼠软骨BMP-2、Smad1及BMP-2mRNA、Smad1mRNA表达的影响

目的观察川芎嗪治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠模型关节软骨中骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、Smad1表达的变化,并探讨川芎嗪治疗KOA的作用机制。方法制作大鼠膝关节炎模型,将建模成功的大鼠纳入模型对照组,常规饲养,川芎嗪高剂量组、川芎嗪低剂量组、阳性对照组行灌,正常组和模型组行等量生理盐水治疗6 w,实验结束后,各组大鼠分别行HE切片软骨Mankin评分、Western Blot检测软骨组织BMP-2、Smad1及实时荧光定量PCR检查BMP-2mRNA、Smad1mRNA的变化。结果各组软骨Mankin评分中,川芎嗪各剂量组和阳性对照组均较空白组高(P<0.05),均较模型组低(P<0.05),且川芎嗪高剂量组<阳性对照组<川芎嗪低剂量组(P<0.05)。正常组、川芎嗪各剂量组及阳性对照组中软骨BMP-2、Smad1及BMP-2mRNA、Smad1mRNA相对表达量较模型组均高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);与阳性对照组相比,川芎嗪高剂量组BMP-2、Smad1及BMP-2mRNA、Smad1mRNA表达量明显高于阳性对照组(P<0.05),而川芎嗪低剂量组其表达则均低于阳性对照组。结论川芎嗪可能通过上调早期KOA大鼠BMP-2mRNA及Smad1mRNA基因的表达,从而促进BMP-2及Smad1蛋白的表达,这可能是在某种程度上减轻关节软骨退变、修复软骨损伤作用的机制之一。

尿毒症血液透析患者Treg/Th17功能失衡影响血管钙化因子BMP-2表达的研究

目的探讨尿毒症血液透析患者Treg/Th17细胞功能是否发生失衡及其对血管钙化因子BMP-2表达的影响。方法选取66例尿毒症血液透析患者(MHD组)、30例尿毒症未并发心血管疾病且未透析患者(WHD组)和20例健康志愿者,将MHD组患者分为并发心血管疾病(MHD1,n=36)和未并发心血管疾病(MHD2,n=30)。流式细胞术测单个核细胞中Treg和Th17细胞比例,实时荧光定量PCR测Foxp3和ROR-γt mRNA表达,ELISA测单个核细胞上清液中炎症因子IL-17、IL-10和血管钙化因子BMP-2水平。结果与健康者相比,尿毒症患者出现Treg/Th17细胞功能失衡和BMP-2分泌异常,主要表现为Treg和Th17细胞比例、Foxp3和ROR-γt表达、IL-17和BMP-2水平均增高(P<0.05),而IL-10水平减低(P<0.05),这一失衡亦表现在WHD与MHD组、MHD1与MHD2组间。透析者IL-17、BMP-2水平均与Treg细胞比例呈负相关(P<0.05),而与Th17细胞比例呈正相关(P<0.05),其中BMP-2与IL-17、IL-10水平分别呈正相关和负相关(P<0.05)。结论尿毒症血液透析患者Treg/Th17细胞失衡使微炎症因子分泌异常,进而加剧血管钙化,导致加速性动脉粥样硬化和心血管疾病发生。

富血小板血浆联合骨髓间充质干细胞对兔股骨头坏死BMP-2/Smads通路的影响

目的研究富血小板血浆联合骨髓间充质干细胞对兔股骨头坏死BMP-2/Smads通路的影响。方法随机将40只新西兰兔随机分为模型组、富血小板血浆(3%)组、骨髓间充质干细胞(1×106/m L)组、富血小板血浆(3%)+骨髓间充质干细胞(1×106/m L)组。建立兔股骨头坏死模型,术后4w分别向各组股骨头内髓芯减压后注射富血小板血浆、骨髓间充质干细胞。另设空白组10只新西兰兔。空白组与模型组不注射任何物质作为对照。造模后第14周,取材。通过HE染色观察兔股骨头骨髓腔内的病理学及骨陷窝空缺率变化情况。酶联免疫(ELISA)法检测血清中血管内皮生长因子(VEGF)的含量。蛋白免疫印迹(Western blot)法检测股骨头中BMP-2、Smad1、Smad5、Runx2的蛋白水平的变化。结果与模型组相比,各治疗组骨髓腔内骨小梁变粗,脂肪细胞减少,骨细胞增多,骨陷窝空缺率降低(P<0.05);各治疗组兔血清VEGF的含量增加,股骨头中BMP-2、Smad1、Smad5、Runx2的蛋白水平提高。结论富血小板血浆与骨髓间充质干细胞可调节BMP-2/Smads信号通路,促进股骨头骨细胞增殖,减少骨陷窝空缺率。

BMP-2活性多肽体外定向诱导大鼠BMSCs向成骨方向分化的实验研究

[目的]骨形成蛋白-2（BMP-2）具有较强的诱导大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）向成骨方向定向分化的能力。天然的BMP-2数量有限，结构复杂，限制了其广泛应用。本实验设计合成了BMP-2活性多肽，体外试验探讨其对BMSCs向成骨方向定向诱导成骨分化的能力，评价BMP-2活性多肽的诱导成骨效应。[方法]实验分2组，诱导组和非诱导组。取4周的Wistar大鼠分离培养BMSCs，传至第3代时，实验组，改用成骨诱导培养基（DMEM完全培养基＋BMP-2活性多肽200μg／ml）。非诱导组，仍采用DMEM完全培养基。继续培养2～4周，采用细胞爬片培养、碱性磷酸酶活性和钙含量测定、实时定量PCR检测Ⅰ型胶原（Col—Ⅰ）及骨桥蛋白（OPN）mRNA的表达，评价BMP-2活性多肽的体外诱导成骨能力。[结果]诱导组BMSCs生长良好，表现出与典型的成骨细胞相似的形态特征和生物学特性，ALP活性上升，钙含量增加，Col-Ⅰ和OPN的mRNA呈高表达。非诱导组，成骨特性不明显。[结论]合成的BMP-2活性多肽能有效地促进BMSCs向成骨方向分化，是组织工程化骨中理想的诱导成骨的细胞因子。具有与天然BMP-2类似的骨诱导活性，具有广阔的应用前景。

胰岛素样生长因子1对成骨细胞中BMP-2、BMP-7基因表达的影响

目的 研究胰岛素样生长因子1(IGF-1)对成骨细胞中BMP-2、BMP-7基因表达的影响,探讨IGF-1促进成骨细胞增殖、分化的分子机理。方法 以不同浓度的IGF-1刺激分离培养的大鼠成骨细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR扩增BMP-2及BMP-7基因cDNA,同时扩增管家基因β-actin作为内对照。扫描PCR产物电泳照片,计算BMP-2/β-actin及BMP-7/β-actin的积分光密度比值,推算BMP-2及BMP-7基因的相对表达水平。结果 IGF-1可以在转录水平增加大鼠成骨细胞中BMP-2及BMP-7基因的表达,并呈明显的剂量依赖关系。结论IGF-1促进成骨细胞增殖、分化的作用可能是通过增加BMP-2及BMP-7基因的表达来实现的。

慢性肾脏病5期患者血清BMP-2及BMP-7与颈动脉钙化的相关性研究

选取慢性肾脏病5期(CKD5期)住院患者52例,予以颈动脉多普勒检查,并记录颈动脉中膜厚度以评估血管钙化情况,同期健康体检人员40例为对照组。参加者均检测血清骨形态蛋白2(BMP-2)、骨形态蛋白7(BMP-7)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、钙(Ca)、磷(P)、全段PTH(iPTH)指标。结果显示病例组血清BMP-7低于对照组,BMP-2高于对照组。病例组中颈动脉钙化发生率高于对照组,与高BMP-2、低BMP-7相关;血清BMP-2与BMP-7呈负相关性。

BMP-2、bFGF在牵引成骨中的表达及意义

目的 :通过两种不同术式的比较 ,研究骨形态发生蛋白 - 2 (BMP - 2 )、碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)的表达水平和成骨的关系 ,探讨牵引成骨的成骨机制。方法 :2 8只狗随机分为牵引成骨组和直接延长组各 12只及正常对照组 4只 ,用免疫组化染色方法观察比较BMP - 2、bFGF在两组牵引第 6天、固定 2周、固定 8周时的表达情况。结果 :两组在牵引第 6天骨断端附近的新生编织骨边缘基质及周缘的活跃的成骨细胞、骨膜下及牵开区增生活跃的间充质细胞、成纤维细胞、胶原纤维基质均可见BMP - 2、bFGF强阳性的染色 ,染色平均灰度比较均无统计学差异 (P >0 .0 5 ) ;牵引后固定 2周 ,牵引组新生编织骨边缘的成骨细胞、软骨细胞、牵开区纤维结缔组织仍可见BMP - 2、bFGF阳性染色 ,而直接延长组的BMP - 2、bFGF在牵开区的染色强度明显降低 (P <0 .0 5 ) ;牵引后固定8周 ,BMP - 2、bFGF在牵引组和直接延长组的组织中的染色强度均明显减弱 ,染色灰度比较均无统计学差异 (P >0 .0 5 )。结论 :在下颌骨牵引成骨过程中 ,在机械的牵引力和微创伤等多种因素刺激下 ,局部牵开区BMP - 2和bFGF持续高表达。两种生长因子可能共同参与促进了牵开区大量新骨的形成。

阿仑膦酸钠对成骨细胞BMP-2信号通路的影响

二膦酸盐不仅特异性抑制破骨细胞,同时对成骨细胞也起一定的作用.用酶消化法取乳鼠颅盖骨进行成骨细胞培养,分为空白对照组、阿仑膦酸钠高、中、低剂量组.从BMP-2/Smads/Runx2/Osterix信号通路角度观察二膦酸盐对成骨细胞分化的作用.结果显示:比色法结果显示干预2和4d后各剂量阿仑膦酸钠组的碱性膦酸酶(AKP)显著增加,其中中剂量组表达最高,各组明显高于空白对照组(p<0.05),第6天各剂量阿仑膦酸钠组AKP逐渐下降,与空白对照组比较,无统计学意义(p>0.05);ELISA结果显示随着天数增加各剂量阿仑膦酸钠组的BMP-2逐渐增加,其中中剂量组表达最高,各组明显高于空白对照组(p<0.05),干预2和4d后各剂量阿仑膦酸钠组的I型胶原(Collagen Type I)显著增加,其中中剂量组表达最高,各组明显高于空白对照组(p<0.05),第6天各剂量阿仑膦酸钠组Collagen Type I逐渐下降,空白对照组随着天数逐渐增加,但均低于同时期用药组(p<0.05);荧光定量PCR(qPCR)检测结果显示BMP-2、Smad1/5、Runx2和Osterix mRNA表达在干预后,随着时间的延长,逐渐上升;阿仑膦酸钠组的含量高于同期的空白对照组.提示阿伦膦酸钠能刺激成骨细胞增殖,增强BMP、AKP活性,通过BMP-2/Smads/Runx2/Osterix通路上调相关基因表达,促进成骨细胞分化.

补肾活血方对兔膝骨关节炎病变软骨BMP-2/gremlin表达的影响

目的观察家兔膝骨关节炎模型关节软骨BMP-2/gremlin的表达情况及补肾活血方的调节作用。方法 48只实验用家兔随机分为治疗组、阳性对照组和阴性对照组,每组16只。治疗组和阳性对照组行右膝关节前交叉韧带横断手术(ACLT)造模,阴性对照组行右膝模拟造模手术。治疗组造模后给予补肾活血方灌胃治疗,阳性对照组造模后给予制动干预,阴性对照组行模拟手术后给予生理盐水灌胃。在术后第4、8周各组各处死8只家兔,观察膝关节损伤软骨肉眼改变,取组织标本经石蜡包埋切片后行常规苏木精-伊红染色观察软骨组织的病理变化,Real time PCR法及免疫组化法检测BMP-2、gremlin的表达。结果补肾活血方可减轻兔膝骨关节炎模型关节软骨形态学损害。治疗组和阳性对照组第4、8周软骨中BMP-2及gremlin表达量明显高于阴性对照组(P<0.05),且阳性对照组较治疗组gremlin同期表达增多(P<0.05);第8周阳性对照组标本中BMP-2表达持续稳定,但gremlin表达水平较第4周明显上升(P<0.05)。结论补肾活血方对兔ACLT模型关节软骨中修复保护性细胞因子BMP-2的表达有上调作用,同时抑制BMP-2拮抗因子gremlin过度表达,对骨关节炎修复有良好的调节作用。

TGFβ_1和BMP_2对培养兔关节软骨细胞增殖和分化的作用

目的 :探讨TGFβ1和BMP2 对培养兔关节软骨细胞增殖和分化的影响 ,从而了解其在关节软骨损伤修复及骨关节炎 (OA)病理变化中的作用 ,方法 :采用光电镜、免疫细胞化学、液烁计数、流式细胞仪分析细胞周期等方法观察软骨细胞的超微结构和增殖、分化及其特异性的表达。结果 :TGFβ1显著增加了原代软骨细胞3 H TdR的掺入和使其进入S G2 /M期细胞比例增加。而BMP2 则对第 5代软骨细胞有明显的促增殖作用。结论 :TGFβ1能促进原代软骨细胞的增殖 ,但不能阻止其增殖能力随传代培养而减弱 ,而BMP2 则显著促进了第 5代软骨细胞的增殖 ,这可能与细胞的分化状态和细胞外基质 (ECM )。

竞争性RT-PCR测定法及BMP-2mRNA的定量检测

建立竞争性 PCR方法 ,以期用于转录水平基因表达的定量研究 .以检测大鼠颅骨骨细胞总RNA中骨形态发生蛋白 - 2 ( BMP- 2 ,bone morphogenetic protein- 2 ) m RNA含量为例 ,构建大鼠BMP- 2基因的竞争模板 ,以之为内对照进行竞争性 PCR.PCR反应结束后 ,电泳、拍照 ,扫描所扩增条带密度 ,作回归方程 .根据回归方程 ,计算出正常 7d Wistar大鼠颅骨总 RNA中 BMP- 2 m RNA含量为 1 .1 2 5amol/μg RNA.结果显示 ,成功构建了大鼠 BMP- 2基因的竞争模板 ,建立了可以测定大鼠颅骨骨细胞总 RNA中 BMP- 2 m RNA含量的竞争性 PCR方法 .