水牛BMP1基因对颗粒细胞增殖与凋亡的功能研究

本研究旨在探讨BMP1基因对体外培养水牛颗粒细胞增殖与凋亡的影响,采用qRT-PCR检测体外培养0、24、48、72和96h水牛颗粒细胞中BMP1基因的表达规律,通过在水牛颗粒细胞培养液中添加BMP1基因重组蛋白和抗BMP1抗体,观察其对体外培养水牛颗粒细胞增殖变化的影响,并应用qRT-PCR和Western blotting方法检测与细胞增殖和细胞凋亡相关因子表达的变化规律。结果显示,随着颗粒细胞体外培养时间的延长,BMP1基因的相对表达量显著上调(P<0.05),96h培养组BMP1表达最高。添加BMP1重组蛋白可显著促进水牛颗粒细胞的体外增殖(P<0.05),并能够显著上调细胞周期关键蛋白Cyclin D1、Cyclin D2和PCNA mRNA表达水平(P<0.05),同时显著抑制了细胞凋亡信号通路中促凋亡相关因子(Fas、FasL、TNFR1、TNF-α、Cytochrome C、Apaf1、Chop、Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9)mRNA表达(P<0.05)。Western blotting检测结果表明,BMP1重组蛋白能够抑制Fas、Bax和Caspase-9蛋白表达,蛋白与mRNA表达一致。而添加抗BMP1抗体的试验则得出相反的结果。综上表明,BMP1基因能通过调控相关基因的表达促进体外培养水牛颗粒细胞的增殖并抑制其凋亡,在水牛卵泡发生过程中具有重要的调控功能,为阐明BMP1基因参与家畜卵泡发生的分子机制奠定基础。

BMP1基因与声门上型喉癌临床分期相关性分析

目的:利用基因表达谱芯片,筛选声门上型喉鳞状细胞癌TNM分期相关的差异表达基因。方法:选取12例不同分期的声门上型喉癌患者的新鲜肿瘤标本(Ⅱ期3例、Ⅲ期3例、Ⅳ期6例),运用Illumina人类全基因组表达谱芯片检测三组的表达差异,筛选肿瘤TNM分期相关基因,并对各期均有统计学差异基因进行贝叶斯网络分析,探寻与肿瘤分期相关的分子标记物。结果:筛选出10个差异基因(BMP1、NPHP3、C21ORF57、DNAJB5、CT45A1和LOC100130562为mRNA,LOC100132673、LOC646294和MGC39821为miscRNA,OR7E91P为non-coding RNA),10个差异基因能较好判别肿瘤的TNM分期(ANOSIM分析,r=0.936 5,P=0.001);贝叶斯网络显示与肿瘤分期相关的关键基因是BMP1,且TGCA数据库显示BMP1与头颈肿瘤的分期呈正相关(P=0.034 9)。结论:BMP1的表达与肿瘤的TNM分期呈正相关,BMP1是声门上型喉癌临床晚期的分子标志物之一。

水牛骨形态发生蛋白1基因的克隆及其在不同组织中的表达研究

本研究克隆了水牛骨形态发生蛋白1(bone morphogenetic protein-1,BMP1)基因序列,并运用生物信息学方法对其核苷酸序列的保守性和氨基酸的理化性质、蛋白质结构进行了系统分析,此外还运用实时荧光定量PCR技术对BMP1基因在水牛不同组织中的表达差异进行了检测。结果表明,应用RT-PCR技术克隆得到水牛BMP1基因的cDNA序列长度为3 195bp,其中包含完整的2 967bp的开放读码框(ORF),编码988个氨基酸。经序列相似性分析显示,水牛BMP1基因与牛、猪、马、人和小鼠相应氨基酸序列相似性分别为99%、96%、96%、96%和95%,具有很强的保守性。结合系统进化树分析结果推测,BMP1基因在不同物种及进化的过程中具有高度的保守性。对水牛BMP1蛋白的结构域预测结果发现,其存在1个信号肽区、1个前肽区、1个金属蛋白酶区、5个CUB区和2个EGF-like功能区。定量表达分析结果显示,BMP1基因在水牛心脏组织中相对表达量最高,睾丸、卵巢和生殖嵴等性腺器官表达量次之,骨头等其他组织表达量较低,肝脏表达量最低。