RNA干扰BNIP3表达对LoVo细胞5-氟脲嘧啶化疗敏感性的影响

目的:观察RNA干扰介导BNIP3基因表达抑制对结肠癌细胞5-氟脲嘧啶(5-Fu)化疗敏感性的影响。方法:构建靶向BNIP3基因的siRNA的质粒表达载体,转染结肠癌LoVo细胞并筛选稳定表达细胞,用RT-PCR和Western blotting检测BNIP3基因表达,MTT法检测5-Fu的化疗敏感性,流式细胞仪检测5-Fu诱导的细胞凋亡,细胞生长曲线检测细胞增殖。结果:酶切和测序证实靶向BNIP3基因的siRNA的质粒表达载体(pGCsi3.O-BNIP3)构建成功;重组质粒转染的LoVo细胞BNIP3表达被有效抑制,其mRNA水平和蛋白水平表达抑制率分别为73.1%和75.4%;与对照组比较,转染重组质粒pGCsi3.O-BNIP3的Lovo细胞5-Fu的IC_(50)值显著升高(108.4±4.69μg/ml vs.50.08±2.85μg/ml,P<0.05),5-Fu诱导的细胞凋亡率显著减少(8.35±0.46% v 19.75±2.37%,P<0.05),细胞增殖速度增加。结论:BNIP3表达下调导致结肠癌LOW细胞对5-Fu化疗敏感性降低; BNIP3可能成为逆转结肠癌耐药的潜在治疗靶点。

人BNIP3基因真核表达载体的构建及其对HT-29细胞化疗敏感性的影响

目的构建人BNIP3真核表达载体,观察BNIP3高表达对人结肠癌细胞HT-29化疗敏感性的影响。方法PCR法扩增BNIP3基因,酶切后插入质粒pEGFP-C3,构建重组真核表达载体pEGFP-C3/BNIP3。脂质体转染人结肠癌细胞HT-29,Western blot检测BNIP3蛋白表达。MTT法检测5-氟尿嘧啶(5-Fu)的化疗敏感性和细胞增殖,AnnexinV-APC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡。结果酶切电泳分析和DNA序列测定证实,重组质粒pEGFP-C3/BNIP3构建成功;转染重组质粒的HT-29细胞BNIP3蛋白明显高表达。与未转染组和转染空质粒pEGFP-C3组比较,转染pEGFP-C3/BNIP3组5-Fu的IC50值显著降低[(120.11±5.45)、(113.40±4.72)μg/mL vs(19.08±2.62)μg/mL,P<0.05],细胞凋亡率显著增加[(5.51±0.32)%、(7.19±0.47)%vs(41.72±1.48)%,P<0.05],细胞克隆形成显著减少[(52±6)、(49±5)vs(11±3),P<0.05],细胞增殖速度减慢。结论成功构建了人BNIP3真核表达载体,BNIP3高表达可增加HT-29细胞对5-Fu的化疗敏感性。

胃癌细胞中BNIP3基因CpG岛甲基化及其调控作用

目的观察胃癌细胞株MKN1中BNIP3基因启动子区的甲基化状态,探讨DNA甲基化调控BNIP3表达的机制。方法应用亚硫酸氢盐修饰后克隆测序法检测MKN1细胞中BNIP3基因启动子区的甲基化状态,应用甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-Cd R)处理MKN1细胞,观察给药前后BNIP3 m RNA表达及启动子区Cp G岛甲基化状态的改变。应用染色质免疫沉淀技术检测BNIP3基因与DNA甲基化转移酶1(DNMT1)的结合。结果 MKN1细胞中BNIP3基因启动子区呈高甲基化状态。应用5-Aza-Cd R处理细胞后,药物处理组(5-Aza-Cd R浓度为10μmol/L)和对照组甲基化率和BNIP3 m RNA表达的差异均有统计学意义(P<0.05)。5-Aza-Cd R抑制MKN1细胞中DNMT1与BNIP3基因的结合。结论 MKN1细胞中BNIP3基因表达受启动子区Cp G岛甲基化调控,DNA甲基化的发生与DNMT1和BNIP3基因结合有关。

抑癌基因XAF1和BNIP3表达及其异常甲基化与宫颈病变相关性研究

目的探讨抑癌基因XAF1和BNIP3表达及其异常甲基化与宫颈病变的关系。方法选择140例手术切除并经病理证实的标本,其中宫颈癌组48例,宫颈上皮内瘤样病变2~3级组织(CIN2-3组)32例,宫颈皮内瘤样病变1级组织(CIN1组)30例,正常宫颈组织(对照组)30例,采用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)法及免疫组化(SP)法,检测上述各组中XAF1和BNIP3启动子区甲基化状态及蛋白表达水平。结果正常宫颈组、CIN1组、CIN2-3组、宫颈癌组XAF1基因启动子甲基化阳性率分别为3.3%、6.6%、37.5%、60.4%,正常宫颈组与CIN1组甲基化阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);CIN1组与CIN2-3及宫颈癌组甲基化阳性率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);正常宫颈组、CIN1组、CIN2-3组、宫颈癌组BNIP3基因甲基化阳性率分别为16.7%、20.0%、43.8%、68.8%,正常宫颈组与CIN1组甲基化阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);CIN1组与CIN2-3及宫颈癌组甲基化阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05);正常宫颈组、CIN1组、CIN2-3组、宫颈癌组XAF1蛋白的阳性表达率分别为73.3%、76.7%、40.6%、10.4%,宫颈组与CIN1组XAF1蛋白表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05);CIN2-3组及宫颈癌组XAF1蛋白表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);正常宫颈组、CIN1组、CIN2-3组、宫颈癌组的BNIP3蛋白表达率分别为63.3%、70.0%、43.8%、14.6%,正常宫颈组与CIN1组BNIP3蛋白表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05);CIN1组与CIN2-3组、宫颈癌组比较,BNIP3蛋白表达率逐渐下降,差异均有统计学意义(P<0.05);宫颈癌组织中XAF1蛋白与BNIP3蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论XAF1及BNIP3基因启动子甲基化所致的XAF1及BNIP3表达失活,可能在宫颈病变的发生及发展过程中起着重要作用。

糖尿病性心肌病变凋亡相关新基因2ass-bnip3的电子克隆及其功能预测

对应用荧光标记的mRNA差异显示分析技术筛选获得的 2型糖尿病性心肌病变凋亡相关新基因 2ass bnip3 ,进行全长克隆及其结构 /功能预测 ,获得 15 94bp的新基因全长及其编码的具 187个氨基酸的蛋白 2ass bnip3 p ,它可能通过钙调 凋亡调节通路而在糖尿病心肌病变的发生中发挥重要作用。

BNIP3基因甲基化与早期结直肠癌患者临床病理特征的关系

目的分析早期结直肠癌组织中BNIP3基因启动子区CpG岛甲基化与患者临床病理特征的关系,评价其在结直肠癌发生发展中的作用。方法用甲基化特异性PCR技术分析107例早期结直肠癌患者肿瘤组织中BNIP3基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果本组结直肠癌组织标本中BNIP3基因启动子区CpG岛甲基化阳性率为58.9%(63/107)。右半结肠组肿瘤组织中BNIP3基因甲基化明显高于左半结肠组(P<0.001);低分化组明显高于高中分化组(P=0.002)。BNIP3基因甲基化在患者性别、年龄、肿瘤大小和分期等分组间无明显差异。结论早期结直肠癌组织中存在BNIP3基因启动子区CpG岛甲基化。BNIP3基因高甲基化与早期结直肠癌部位和分化程度密切相关。

Bnip3基因的表达调控及其与肿瘤的关系

Bnip3基因属于Bcl-2基因家族BH3-only亚家族，是一种线粒体促凋亡基因，是缺氧诱导因子（HIF）的下游应答基因之一。在缺氧条件下，Bnip3可诱导细胞发生凋亡或自噬，目前研究发现Bnip3与多种肿瘤发生发展及治疗密切相关，针对Bnip3基因的分子靶向治疗与放化疗联合，在肿瘤治疗上有较好的应用前景。