6株副猪嗜血杆菌基因组DNA的PCR指纹图谱研究

根据肠道菌基因间重复一致序列,设计了一对特异性引物,采用ERIC-PCR和RAPD技术,研究了副猪嗜血杆菌6个分离菌株的指纹图谱和DNA多态性。结果表明,6个分离株的PCR指纹图谱与15个标准血清型指纹图谱相比较可分辨出4种血清型;6个分离株的RAPD研究结果均表现出多态性。有意义的是,6个菌株的多态性DNA片段也能明显将其分为4种类型的副猪嗜血杆菌,与特异性引物PCR结果相一致。该研究可作为流行病学调查和该菌的分子分型快速诊断方法的基础。

龙眼ISSR-PCR反应体系的优化及指纹图谱初探

以立冬本龙眼DNA为模板研究了龙眼ISSR-PCR反应体系的主要成分对ISSR扩增结果的影响,并探讨了构建龙眼指纹图谱的可行性。结果表明:在25μL的PCR反应体系中Mg2+的最适浓度为2.0 mmol.L-1;dNTP最适浓度为0.2 mmol.L-1;引物的最适浓度为0.7μmol.L-1;模板20 ng;Taq DNA聚合酶用量为1.5 U。利用优化后的反应体系对福建不同地区龙眼基因型进行了ISSR扩增,扩增产物在250 bp^2 kb;利用丰富的多态性DNA谱带构建了12个基因型龙眼的指纹图谱。

厚朴的任意引物PCR指纹图谱分析

目的 鉴别中药材厚朴、凹叶厚朴及其常见的伪品和混淆品。方法 采用任意引物 PCR (arbitrarilyprim ed PCR,AP- PCR)技术扩增植物基因组 DNA样品。结果 AP- PCR技术获得清晰可靠的 DNA指纹图谱 ,根据琼脂糖凝胶上显示的 DNA带型差异可迅捷地区分厚朴、凹叶厚朴及其伪品、混淆品。结论 为应用 AP- PCR技术在分子水平上鉴别中药材厚朴 ,保证引种的准确性奠定了基础。

吉林西北部草原鼠疫菌染色体PCR指纹图谱分析

本文通过ＰＣＲ指纹图谱，分析了吉林西部草原鼠疫菌染色体ＮＤＡ特征，结果显示该地区鼠疫菌染色体可产生８条非常明显的扩增区带，其他对照的菌株只产生６条扩增区带。分析认为这种差别可能是该地菌株的一特征。

苏铁珊瑚状根及根周围土壤中蓝细菌的PCR指纹图谱

以福建苏铁(Cycas revoluta)珊瑚状根及根周围土壤的蓝细菌分离物的悬浮液作为PCR反应的模板,用引物STRRmod、STRRspecial和Hip TG对分离物进行PCR扩增,比较其指纹图谱。结果表明,苏铁珊瑚状根内蓝细菌的指纹图谱不同于其周围土壤中蓝细菌的指纹图谱;也证实了同一地方不同株苏铁根周围的土壤蓝细菌具有多态性,苏铁珊瑚状根的不同分支的蓝细菌也具有多态性。

广西地区仔猪致病性大肠杆菌的菌毛基因多重PCR检测及质粒DNA指纹图谱分析

对广西地区56株仔猪致病性大肠杆菌进行菌毛基因的多重PCR检测及质粒DNA指纹图谱分析。多重PCR检测结果证实该方法可用于各大肠杆菌野生菌株的检测,且适用于仔猪大肠杆菌性腹泻病的快速诊断和流行病学调查。质粒DNA指纹图谱分析发现这56个菌株质粒的获得率为100%,来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱,来源不同的菌株的质粒图谱一般不同。所有菌株都含有1条大小相同的质粒带,表明广西流行的猪大肠杆菌性腹泻病主要是由携带相同质粒的大肠杆菌引起。试验结果表明,质粒DNA指纹图谱法可作为大肠埃希氏菌分型的分子生物学方法。

PCR微流控芯片的制备及其在凤丹皮DNA指纹图谱研究中的初步应用

采用商品化的毛细管柱直接制备了PCR微流控芯片,与常规方法比较该方法制备的芯片成本低廉价格便宜,可在普通实验室制作,将该方法制备的PCR微流控芯片和微流控-热电极系统联用,对凤丹皮的扩增产物进行了初步研究。

副猪嗜血杆菌的分离及ERIC-PCR指纹图谱分析

2016年12月份河南某猪场出现部分猪体温升高、呼吸困难、关节肿大和运动困难等症状,少数猪出现神经症状,剖检发现肺脏部位有明显病变,胸腔有大量积液,关节有黄色积液。无菌条件下取肺脏进行细菌分离,经鉴定为副猪嗜血杆菌,ERIC-PCR指纹图谱分析初步判定为5型副猪嗜血杆菌,现将结果报道如下。

23个云南八角品种的指纹图谱构建

运用RAPD-PCR分子标记技术从22条扩增效果好的RAPD引物中筛选出两条具有扩增效果好、多态性高、条带清晰的特征引物:G11(TGC CCG TCGT)和M18(CAC CAT CCGT)。这两条特征引物能够将23个云南八角品种完全区分开,从而建立了23个云南八角品种的指纹图谱,为云南八角的物种亲缘关系鉴定和遗传多样性分析提供科学参考。

冬虫夏草DNA指纹图谱技术应用研究进展

1概述 冬虫夏草[Cordyceps sinensis（Berk）Sacc]具有很高的药用价值,是珍贵的中药材。它是由虫草属（Cordyceps）真菌寄生在鳞翅目（Lepidoptera）昆虫蝙蝠蛾科（Hepialidae）幼虫体上而形成的一种虫生真菌,它与人参、鹿茸齐名并誉为中国的三大补药。

常见水稻品种的DNA指纹图谱构建及其遗传

通过筛选的10条引物对供试的18种水稻材料进行PCR扩增。共扩增出清晰、重复性好的谱带144个,其中多态性带为138条,多态性比率高达95.8%;应用引物808、809、810、816及其组合获得了每个品种的ISSR特征带,有效区分出所有供试材料,并建立18个水稻品种的ISSR指纹图谱;统计10条ISSR引物的标记信息,对18个水稻样品的遗传相似性进行计算,得出遗传相似性系数在0.42-0.94之间存在显著的遗传变异,平均相似性系数为0.680。通过UPGMA法构建的树状聚类图,在相似性系数为0.719时可以将18个供试样本以粳、籼稻严格地划分为2个大类群。

指纹图谱技术可用于副鸡禽杆菌分型

河北工程大学王雪敏等为探索副鸡禽杆菌的分型新方法，以肠杆菌基因间共有重复序列（ERIC）和随机核苷酸多态性片段（RAPD）为靶序列进行PCR扩增，对所得指纹图谱用POPGENE和MEGA4．0软件进行遗传距离的计算和聚类分析。

深海沉积物中产淀粉酶细菌的rep-PCR基因指纹分析

利用淀粉酶筛选培养基平板从27个深海沉积物样品中筛选得到30个具有胞外淀粉酶活性的菌株.其中革兰氏阴性细菌有22株,阳性细菌有8株.对这些细菌的基因组DNA进行ERICPCR和BOXPCR扩增,指纹图谱显示大部分菌株均存在数目不等的各自独特的带型,各特异性扩增的主带型能重复稳定出现.比较两种引物的指纹图谱,显示ERICPCR比BOXPCR具有较丰富的图谱多态性.对产生的指纹图谱进行聚类学分析,30株细菌可分为10组,其中5株细菌分别独立成组,最多的第Ⅱ组包含有8株细菌,而在同一聚类组内的细菌可能是处于进化上亲缘关系较近的位置.研究显示,30株菌具有丰富的种属多样性,揭示了深海微生物资源的丰富和潜力.ERICPCR和BOXPCR技术可用于对深海微生物群落组成和多样性的研究.

DNA指纹谱与HPLC指纹谱对中药地榆质量评价研究

目的 为充分利用药源 ,对中药地榆内在质量全面评价的方法进行研究 ,以使地榆药材质量标准进一步规范化。方法 采用分子生物学技术随机扩增多态性DNA(RAPD)技术和HPLC技术对地榆属的 4个品种及其混淆品进行分析。结果 可提供清晰RAPD指纹谱 ;不同品种的黄酮类成分的HPLC指纹谱具有差异性。结论 表明这两种方法均可以做为

纵纹腹小鸮DNA指纹谱探针的筛选和初步应用

以人工合成的微卫星序列 (GTG) 5,(GT) 8,(CAC) 5和人源小卫星 33 1 5作引物 ,扩增纵纹腹小的基因组DNA ,产生多态性DNA片段 ,回收了 8个表现个体特异性的片段。当用小的基因组总DNA探针与它们杂交时 ,其中 2个表现阳性 ,说明PCR方法扩增出的高变异产物含有重复序列。用含重复序列的个体特异性PCR产物作探针 ,与无关个体小基因组DNA的HaeⅢ酶切产物进行DNA印迹 ,获得了变异性较高的DNA指纹图谱。且通过对京白鸡家系分析表明 ,用小基因组DNA的PCR产物分离制备的探针所获得的DNA指纹图带能够稳定的遗传。因此 ,高变异的PCR产物可以有效地用作DNA指纹探针。

ERIC-PCR技术在李斯特氏菌种、菌株鉴定中的应用

应用肠杆菌基因间重复一致序列聚合酶链反应技术(ERIC-PCR)对李斯特氏菌基因组DNA进行分析,结果显示,李斯特氏菌种间DNA指纹图谱带型差异较大;单核细胞增生性李斯特氏菌株间及相同血清型不同来源的菌株,其DNA指纹图谱带型也有明显差异。在单核细胞增生性李斯特氏菌各株的DNA指纹图谱中发现1600bp的种专一性扩增带。结果表明,ERIC-PCR技术可用于李斯特氏菌种、菌株的鉴定及进一步分型研究。

基于PCR技术的中药DNA分子标记鉴别

综述基于 PCR技术的中药 DNA分子鉴别研究 ,重点论述了 RAPD法和 DNA直接测序法的应用 ,提出了DNA分子鉴别研究的思路与实验设计。

大熊猫粪便菌群ERIC-PCR指纹图谱的分析及优势菌群的鉴定

探讨1只野生大熊猫和不同年龄段圈养大熊猫粪便菌群的多样性和相似性,并鉴定野生大熊猫圈养之后,其粪便中的优势菌群。对来自3个年龄段9只(3只亚成体、3只成年体、3只老年体)圈养大熊猫及1只野生大熊猫圈养前、后的11份粪便细菌的DNA进行ERIC-PCR指纹图谱分析,并利用16S rRNA基因序列分析对优势菌条带进行鉴定。结果显示:该只野生大熊猫粪便菌群多样性比圈养大熊猫丰富;圈养大熊猫粪便菌群多样性:成年体>亚成体>老年体;16s rRNA和ERIC-PCR指纹图谱优势条带鉴定的优势菌结果有差异性。结果表明:大熊猫的肠道菌群多样性易受生长环境、年龄因素的影响;其次,不同年龄段的圈养大熊猫,其肠道菌群的相似性与年龄因素不相关;利用ERIC-PCR指纹图谱优势条带鉴定优势菌的方法有一定的局限性。

2012～2014年江西地区副猪嗜血杆菌分离株ERIC-PCR指纹图谱分析

在对15种副猪嗜血杆菌血清型参考株鉴定获得15种不同ERIC-PCR指纹的基础上,对2012 - 2014年分离自江西地区41株副猪嗜血杆菌临床分离菌株进行指纹鉴定.结果表明,41株副猪嗜血杆菌产生20种不同的指纹图谱,相同血清型的菌株表现出不同的指纹图谱,无法进行血清分型的副猪嗜血杆菌应用该方法可得到充分区分.该方法证实副猪嗜血杆菌ERIC-PCR指纹图谱存在丰富的多样性,可适用于副猪嗜血杆菌的快速基因分型及分子流行病学调查.

DNA指纹用于杂交水稻种子纯度和真伪鉴定的研究进展

本文简要阐述了RAPD、RFLP、AFLP、SSR等几种主要的建立DNA指纹图谱的分子标记技术及其在杂交水稻种子纯度和真伪鉴定中的研究和应用情况,同时评述了这几种分子标记技术各自的优缺点,并就水稻DNA提取方法的改进、PCR扩增反应程序和反应体系的优化、扩增产物的检测以及DNA指纹在杂交稻种子纯度和真伪鉴定中的准确性等问题进行了讨论。DNA指纹在杂交水稻种子纯度和真伪鉴定中具有广阔的应用前景,关键是要建立一套完善的、标准化的技术体系,进一步简化实验操作程序,降低成本,真正做到简单快速、准确可靠,使DNA指纹能用于规模化、商业化的种子质量鉴定之中。