类鼻疽菌T3SS1 的BPSS1395 基因在番茄植株感染中的作用研究

目的研究类鼻疽菌T3SS1的BPSS1395基因在番茄植株感染中的作用。方法类鼻疽菌野生株BPC006感染番茄幼苗根部,以大肠杆菌感染组作为对照,通过PCR技术检测番茄幼苗叶片中细菌的存在,并通过透射电镜观察番茄幼苗叶片细胞中类鼻疽菌的定位。类鼻疽菌感染第3、7、10、14、17、21天后,随机选取幼苗叶片,通过胞内存活实验检测类鼻疽菌在叶片细胞中的增殖。采用同源重组技术构建BPSS1395基因的敲除株和回补株,分别以类鼻疽菌野生株BPC006、敲除株ΔBPSS1395、回补株c-ΔBPSS1395感染番茄幼苗根部后,首先直接观察叶片的病理变化;其次提取感染第14和21天各组植物叶片的基因组,通过PCR对细菌的定植进行鉴定;最后采用胞内存活实验检测各菌株在叶片细胞内的增殖情况。结果类鼻疽菌感染番茄植株后,在提取的番茄幼苗叶片基因组中,能扩增出BPSS1395基因条带,而对照组未扩增出大肠杆菌特异性条带;通过透射电镜观察到类鼻疽菌存在于叶片细胞中,且叶片细胞内的类鼻疽菌数量随着感染时间的延长而增加。敲除株ΔBPSS1395感染番茄幼苗后,叶片无任何疾病症状,而野生株BPC006和回补株c-ΔBPSS1395感染组的叶片有些许的萎蔫。此外,在敲除株ΔBPSS1395感染组提取的植物基因组中未检测到类鼻疽菌的存在,而回补株c-ΔBPSS1395表现出和野生株相似的叶片细胞内的增殖能力。结论类鼻疽菌T3SS1的BPSS1395基因有利于该菌在番茄幼苗感染中的定植和增殖。