内皮素A受体拮抗剂BQ123对前列腺癌PC-3M细胞增殖与凋亡的影响

目的:观察内皮素A受体拮抗剂BQ123对转移性前列腺癌(PCa)PC-3M细胞株增殖与凋亡的影响,初步探讨内皮素A受体拮抗剂对转移性PCa细胞的体外抗肿瘤效应。方法:实验分为两组,对照组为PC-3M细胞及含灭活小牛血清的F12/RMPI1640培养液;实验组为PC-3M细胞加入等量的1μmol/LBQ123。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、划痕损伤实验、细胞迁移实验观察BQ123对人PCaPC-3M细胞株增殖的抑制效应,利用Annexin V-FITC/PI染色和流式细胞术检测BQ123诱导PC-3M细胞凋亡的作用及其与细胞周期的关系。结果:MTT比色法结果显示BQ123随着作用时间的增加,对PC-3M的抑制率分别为24h22.32%、48h44.88%和72h64.47%,表现出良好的时效关系(P<0.05),划痕损伤实验结果提示:实验组PC-3M细胞的迁移距离分别为12h(103.42±75.63)μm、24h(243.75±121.53)μm和48h(422.07±36.01)μm,均低于对照组的12h(162.93±19.87)μm、24h(317.19±43.19)μm和48h(692.74±40.84)μm(P<0.05)。细胞迁移实验中实验组穿入下室的PC-3M细胞为(79.2±9.58)个,亦明显少于对照组的(92.6±5.94)个(P<0.05);Annexin V-FITC/PI双染色法的结果显示对照组PC-3M细胞凋亡率为(9.38±1.37)%,实验组PC-3M细胞凋亡率为(15.03±0.93)%,差异有统计学意义(P<0.05),细胞周期实验的结果显示实验组各期细胞比例与对照组相比差异不显著(P>0.05)。结论:BQ123对PCaPC-3M细胞株的生长、迁移和侵袭能力均有明显的抑制作用,且可以诱导PC-3M细胞凋亡,可为PCa治疗的研究提供一种新的思路。

BQ123与L-arginine在肝脏缺血再灌注损伤中的作用研究

目的 探讨肝脏缺血再灌注损伤的机制及 BQ12 3或 (和 ) L -arginine能否有效改善肝脏缺血再灌注损伤。方法 在大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型基础上 ,对组织形态学、肝脏酶学、透明质酸、血浆内皮素及免疫组织化学染色情况进行观测。结果 肝脏缺血再灌注损伤时 ,血肝酶、透明质酶、血浆内皮素水平均显著增高 ,再灌注前使用 BQ12 3或 (和 ) L-arginine的肝脏 ,其组织结构及功能损伤均显著减轻。结论 肝脏缺血再灌注损伤与肝脏微循环改善有关 ,若能在肝脏再灌注前使用BQ12 3或 (和 ) L -arginine,可有效改善肝脏微循环 。

内皮素A受体拮抗剂BQ123对肉仔鸡股动脉压和肺动脉压的影响

为探讨内源性内皮素-1（ET-1）是否参与肉鸡血压的维持等生理调节活动，采用急慢性给予内皮素ETA受体的特异性拮抗剂BQ123，研究内源性ET-1对正常肉鸡股动脉压和肺动脉压的影响。结果表明：1）放免法检测2～6周龄正常肉仔鸡血浆（从（40．82±1.90）升高到（93．70±11．19）pg／mL）和肺匀浆内皮素（从（503．84±27．40）升高到（701．04±16．18）pg／g）的含量随日龄的增加有升高的趋势；2）急性翼静脉注射BQ123（0．4和2．0μg/kg）能够极显著降低肉鸡的股动脉收缩压、舒张压和肺动脉收缩压、舒张压（P〈0．01），注射2．0μg/kgBQ123压力下降程度比注射0．4μg／kg大，肺动脉压达到最低点的时间比股动脉早；3）慢性给予BQ123能够使肉鸡肺动脉收缩压极显著下降（对照组（3．37±0．47）kPa，BQ123组（2．46±0．50）kPa，P〈0．01），股动脉收缩压显著下降（对照组（20．95±1．17）kPa，BQ123组（18．85±2．05）kPa，P〈0．05）。试验结果显示：急性和慢性注射ETA受体的特异性拮抗剂BQ123都能降低肉鸡股动脉压和肺动脉压，推测内源性ET-1参与了肉鸡血压的维持等生理调节活动。

BQ123对肉鸡腹水综合征的预防作用研究

通过动态观察肺动脉压、红细胞压积、腹水心脏指数、肺小动脉中膜厚度占外径百分值(mMTPA)及管壁面积/管总面积(WA/TA)的变化,探讨高选择性内皮素A受体拮抗剂BQ123对低温诱发肉鸡腹水综合征的预防作用。结果显示,BQ123能显著降低低温诱发肉鸡的肺动脉压、红细胞压积及腹水心脏指数(P<0.05或P<0.01);BQ123能显著减小低温诱发肉鸡的mMTPA及WA/TA(P<0.05或P<0.01)。结果表明,BQ123明显抑制了低温诱发肉鸡的肺动脉高压和肺血管重塑的形成和发展,对肉鸡腹水综合征具有明显的预防作用。

BQ123对大鼠肢体缺血-再灌注后肺损伤的影响

目的观察BQ123对大鼠肢体缺血-再灌注(I-R)后肺损伤的影响。方法雄性SD大鼠30只,随机分为对照组、I-R组和BQ123组,各10只。于缺血4 h再灌注4 h后,采用放射免疫法测定肺组织中内皮素(ET)-1的含量,用生物化学法测定髓过氧化物酶(MPO)活性和丙二醛(MDA)含量,采用酶联免疫吸附法检测P-选择素的浓度,免疫组织化学方法检测肺组织中凋亡相关因子Fas、Bcl-2和凋亡蛋白酶(caspase-3)的表达情况,利用原位末端标记法检测肺细胞凋亡情况。结果与对照组比较,I-R组肺组织ET-1、MPO、MDA和P-选择素均明显增加。肺组织Fas、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达明显上调,其吸光度值分别为0.294±0.003,0.108±0.005,0.174±0.003,凋亡细胞百分率明显增高[(18.83±2.86)%](P<0.01);与I-R组比较,BQ123组ET-1、MPO、MDA、P-选择素含量明显下降。Bcl-2表达明显升高(0.128±0.005),Fas和Caspase-3的表达明显减弱,分别为0.115±0.007,0.159±0.006,细胞凋亡率下降[(10.67±2.16)%](P<0.01)。结论 BQ123可能通过抑制肺细胞凋亡相关蛋白的表达对肢体I-R后肺损伤产生保护作用。

内皮素-1在大鼠肢体缺血再灌注致脑损伤中的作用及BQ123的保护效应

①目的探讨内皮素A(ETA)受体拮抗剂BQ123对其病理过程的保护机制。②方法实验用W istar大鼠,随机分为8组:对照组,缺血组(I),缺血再灌组(IR):包括IR 0.5、IR2、IR4、IR6、IR10小时5组,BQ123+IR4小时组。分别测定各组动物血浆内皮素-1(ET-1)、丙二醛(MDA)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CK)及脑组织ET-1、MDA、XOD、SOD、髓过氧化物酶(MPO)的变化。③结果LIR后血浆及脑组织ET-1含量增加,在IR4小时组达到最高,以后有所下降。脂质过氧化物MDA及LDH、CK和组织MPO增加,SOD活性降低,ET-1变化趋势能较好地反映组织的损伤性变化。给予ETA受体阻断剂BQ123后,血浆及脑组织中ET-1水平均下降,脑损伤减轻。④结论LIR后ET-1的增加可能是导致脑损伤发生重要因素,应用BQ123阻断其作用,可有效地减轻LIR所致的脑损伤。

肢体缺血预处理和BQ123药物后处理对大鼠肢体缺血再灌注后肝损伤的影响

目的探讨肢体缺血预处理(IPC)和BQ123药物后处理对大鼠肢体缺血再灌注(IR)后肝损伤的影响及机制。方法雄性Wistar大鼠随机分为对照组、肢体缺血再灌注组(LIR组)、缺血预适应组(IPC组)和BQ123缺血后处理组(BQ123组),每组8只。测定各组血浆内皮素-1(ET-1)、丙二醛(MDA)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及肝组织ET-1、MDA、髓过氧化物酶(MPO)含量,测定各组肝组织DNA双链百分率。结果 LIR组与对照组比较,血浆ET-1、MDA、ALT、AST含量和肝组织ET-1、MDA、MPO含量均明显升高(P<0.05),DNA双链百分率明显下降(P<0.05);IPC组与LIR组比较,血浆ET-1、MDA、ALT、AST含量和肝组织ET-1、MDA、MPO含量均显著下降(P<0.05),DNA双链百分率显著上升(P<0.05);BQ123组与LIR组比较,血浆ET-1、MDA、ALT、AST含量和肝组织ET-1、MDA、MPO含量均显著下降(P<0.05),DNA双链百分率显著上升(P<0.05);IPC组与BQ123组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论肢体IPC和BQ123药物后处理均对大鼠肢体IR后肝损伤有一定的保护作用,抑制ET-1的作用、减弱脂质过氧化和减少中性粒细胞过度活化聚集可能参与了二者的保护作用。

BQ123抑制低温诱发肺动脉高压肉鸡的肺小动脉肌型化

本试验用高选择性内皮素A受体拮抗剂BQ123处理低温肉鸡的方法,通过动态观察肺动脉压及肌型、部分肌型及非肌型肺小动脉数量的变化,探讨内源性内皮素在肺血管重塑中的作用。结果显示:30日龄时,低温组平均肺动脉压极显著高于常温组、低BQ123组及高BQ123组(P<0.01);低温组肌型及部分肌型肺小动脉的占位比均极显著高于常温组、低BQ123组及高BQ123组(P<0.01);低温组非肌型肺小动脉占位比极显著低于常温组、低BQ123组和高BQ123组(P<0.01),高BQ123组显著高于低BQ123组(P<0.05)。结果表明,BQ123可明显抑制低温肉鸡肺动脉高压和非肌型肺小动脉的肌型化的发生发展,因此认为内源性ET在低温诱发肺动脉高压肉鸡肺血管重塑的发生发展过程中起重要作用。

脑室注射ET－1拮抗剂BQ123和ET抗血清使主动脉狭窄──高盐型高血压大鼠血压下降

侧脑室注射ＥＴ－１受体阻断剂ＢＱ１２３可明显降低腹主动脉狭窄──高盐摄入型实验性高血压大鼠的血压，并呈剂量效应关系。大剂量的ＢＱ１２３还可以使该型高血压大鼠心率减慢。侧脑室注射血管内皮素抗血清也可使该型高血压大鼠血压下降。以上结果表明中枢内皮素在高血压发生的病理生理中可能起一定作用。另外ＥＴ－１的拮抗剂ＢＱ１２３与ＥＴ－抗血清的抗高血压作用可能具有一定的临床意义。

BQ123对低温诱发的肉鸡肺血管重塑的影响

动态观察了肺小动脉中膜平滑肌的增殖及管腔面积的改变,探讨内皮素受体拮抗剂BQ123对低温诱发的肉鸡肺血管重塑的影响.200只16日龄AA肉鸡随机均分为4组: 常温(20 ℃)对照组、低温(7～9 ℃)组、低温低剂量BQ123组和低温高剂量BQ123组.23日龄、30日龄时测定肺动脉压,并取肺组织做石蜡切片, 以Weigert间苯二酚复红染色,形态学计算机图象分析法测定肺细小动脉外径和内径、管总面积和管腔面积,计算中膜厚度占外径百分值(%)mMTPA及管壁面积/管总面积WA/TA(%).结果显示:(1)BQ123抑制低温肉鸡平均肺动脉压的升高,23日龄时低温高剂量BQ123组显著低于低温组(P＜0.05),30日龄时低温低剂量BQ123组和低温高剂量BQ123组均极显著低于低温组(P＜0.01);(2)BQ123抑制低温肉鸡肺小动脉WA/TA(%)的升高,30～50 μm的肺小动脉,低温组极显著高于低温低剂量BQ123组及低温高剂量BQ123组(P＜0.01),其它分级的肺小动脉组间差异性与此类似;(3) BQ123抑制低温肉鸡肺小动脉的mMTPA的升高,30～50 μm的肺小动脉,23日龄时低温组极显著高于低温低剂量BQ123组和低温高剂量BQ123组(P＜0.01),30日龄时低温组显著高于低温低剂量BQ123组(P＜0.05)、极显著高于低温高剂量BQ123组(P＜0.01),30 μm以下的肺小动脉组间差异性与此类似,50～120 μm的差异不显著.这些结果提示,内皮素受体拮抗剂BQ123明显抑制了低温诱发的肉鸡肺动脉高压和肺血管重塑,因此推测内源性内皮素(ET)在低温诱发的肉鸡肺动脉高压和肺血管重塑中起重要作用.

内皮素A受体拮抗剂BQ123对低温诱发肉鸡肺动脉高压的预防作用

为研究验证内皮素-1(endothelin1,ET-1)是否参与肉鸡腹水肺动脉高压的发病过程,用低温环境下饲养的肉鸡,腹腔注射ET1受体拮抗剂BQ123,检测几项肺动脉高压指标。结果表明:在处理后7和15d,低温空白对照组和低温生理盐水对照组肉鸡肺动脉压和右心室内压显著低于常温空白对照组(P<0.05),低温+BQ123组与常温对照组相比没有显著差异,而显著低于2个未注射BQ123的低温组(P<0.05);各组之间的红细胞压积(PCV)和腹水心脏指数(AHI)在处理后7d都没有显著性差异,而到14d,低温对照组的PCV和AHI显著高于BQ123处理组和常温对照组(P<0.05)。结果说明ETAR特异性受体拮抗剂BQ123能够预防低温诱发的肉鸡肺动脉高压,保护了肺动脉和右心正常的生理功能。本试验用反证法证明了ET-1参与了肉鸡腹水肺动脉高压的发病过程,而且为肉鸡肺动脉高压综合征提供了新的治疗途径。

内皮素A受体拮抗剂BQ123对腺嘌呤诱导慢性肾贫血模型大鼠的肾保护作用及机制研究

目的研究内皮素A受体拮抗剂BQ123对腺嘌呤诱导慢性肾贫血模型大鼠肾功能的保护作用并探讨其作用机制。方法采用腺嘌呤诱导法制备慢性肾贫血模型大鼠,随机分为空白对照组、模型组、西他生坦组(50 mg/kg)、BQ123低(5μg/kg)、中(25μg/kg)、高(75μg/kg)剂量组,模型组及空白对照组给予等量生理盐水灌胃。连续用药10周,检测各组大鼠肾功能,苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织病理学变化,透射电子显微镜观察肾组织中细胞自噬小体数量,蛋白印迹(WB)法检测肾组织中微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ)、自噬相关蛋白Beclin1、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)、雷帕霉素(mTOR)、p-Akt、p-mTOR蛋白表达情况。结果与空白对照组比较,模型组大鼠肾组织出现水肿、纤维化、萎缩等病理损伤,组织病理评分明显升高,肾功能显著下降,血液中血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平显著升高,自噬小体数目明显减少,LC3-Ⅱ、Beclin蛋白表达显著下调,p-Akt、p-mTOR蛋白表达明显上调;与模型组比较,BQ123低、中、高剂量组大鼠肾组织病理变化均显著改善,组织病理评分明显降低,肾功能显著恢复,自噬小体数目显著增多,LC3-Ⅱ、Beclin蛋白表达显著上调,p-Akt、p-mTOR蛋白表达显著下调,均呈剂量依赖效应。结论 BQ123可能通过抑制Akt/mTOR信号通路激活促进自噬小体的形成,发挥对腺嘌呤诱导的慢性肾贫血大鼠肾功能的保护作用。

BQ123对肺移植早期缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的 研究内源性内皮素（ Ｅ Ｔ）１ 对肺移植早期缺血再灌注损伤的影响及 Ｅ Ｔ Ａ 受体阻断剂 Ｂ Ｑ１２３ 对其病理过程的保护作用。方法 以家犬（ 保存８ 小时） 左肺移植模型观察缺血再灌注。损伤过程中内源性 Ｅ Ｔ１ 产生及 Ｂ Ｑ１２３ 对其血流动力学、肺功能的作用。结果 Ｂ Ｑ１２３ 组和对照组的平均动脉压、左房压、中心静脉压及组织形态学差异无显著性； Ｂ Ｑ１２３ 组平均肺动脉压、肺血管阻力指数及血清 Ｅ Ｔ１ 浓度明显低于对照组（ Ｐ ＜ ０ ．０１） ，心脏指数、动脉血氧分压明显高于对照组（ Ｐ ＜ ０ ．０１） ，而动脉二氧化碳分压明显低于对照组（ Ｐ ＜ ０ ．０１） ； Ｂ Ｑ１２３ 组肺组织含水百分比明显低于对照组（ Ｐ ＜０ ．０１） 。结论 Ｂ Ｑ１２３ 对肺移植早期出现的缺血再灌注损伤具有保护作用。

BQ123对体外循环缺血再灌注心肌胰岛素抵抗干预作用的实验研究

目的:探讨内皮素受体拮抗剂BQ123对体外循环缺血再灌注心肌胰岛素抵抗(IR)的干预作用。方法:将18条杂种犬分为3组(n=6),Ⅰ组主动脉阻断30min,Ⅱ组主动脉阻断120min,Ⅲ组主动脉阻断120min且心脏停博液中加入BQ123。分别于体外循环转流前、主动脉开放后第15、45、75min4个时点,采集动脉、冠状静脉窦血液标本并进行右房心肌活检,测定各相关指标。结果:与Ⅱ组比较,Ⅲ组的动脉血糖、胰岛素、IR指数、应急激素、血浆内皮素-1及血浆肿瘤坏死因子-α水平升高幅度较小,心肌对葡萄糖的摄取和利用提前至再灌注45min,恢复至正常值更快(P<0.05或P<0.01)。结论:BQ123可以减轻体外循环缺血再灌注过程中的心肌IR,对其引起的损伤具有保护作用。

内皮素-1引起热痛觉过敏的研究

目的研究内皮素-1(ET-1)在局部引起热痛觉过敏的表现及机制。方法小鼠分为生理盐水对照组(NS组)、ET-1组(ET组)、ETA受体拮抗剂BQ123加ET-1组(BE组),每组6例。NS足底注射生理盐水,ET组足底注射10pmolET-1,BE组注射3nmolBQ12320min后再注射ET-1。测量注药前后15min、30min、45min及60min热痛阈值。结果NS组热痛阈值无明显变化,ET组热痛阈值降低,60min时热痛阈值基本恢复,BE组热痛阈值无明显变化。结论ET-1可在局部通过与ETA受体结合引起动物的热痛觉过敏。

不同浓度ET-1引起心肌细胞[Ca^(2+)]_i升高作用的量效关系

目的：探讨内皮素－１（ＥＴ－１）对心肌细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）的作用以及不同浓度ＥＴ－１引起［Ｃａ２＋］ｉ升高作用的量效关系。方法：采用分离的Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠心室肌细胞，以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光指示剂负载，检测不同浓度ＥＴ－１引起［Ｃａ２＋］ｉ变化。结果：ＥＴ－１引起［Ｃａ２＋］ｉ升高呈双相反应，即起始的短暂快速相和随后的持续相。在１×１０－９～５×１０７ｍｏｌ／Ｌ范围内，随着ＥＴ－１浓度的增加，其升高［Ｃａ２＋］ｉ的作用亦增强；并且这种作用可被ＥＴＡ的特异性受体阻断剂ＢＱ１２３（２×１０６ｍｏｌ／Ｌ）所阻断。结论：ＥＴ－１升高［Ｃａ２＋］ｉ呈剂量依赖关系，其作用具有特异性，并且是通过ＥＴＡ受体介导的。

MN9202有抑制成纤维培养液引起心肌肥大的作用

目的：研究二氢吡啶类钙拈抗剂MN9202抑制成纤维条件培养液引起心肌肥大的作用。方法：在培养新生大鼠心肌细胞中，分别加入MN9202、拉西地平（larcidipine）、ETA受体拮抗剂BQ123、蛋白激酶c（proteinkinaseC，PKC）通路的阻断剂白屈菜季氨碱（chelerythrine，che）、AT。

BQ＿（123）－多聚赖氨酸携载β－半乳糖苷酶基因向血管平滑肌细胞的靶向导入

本研究连接合成了ＢＱ１２３－多聚赖氨酸（ＢＰ）利用ＢＱ１２３对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）膜表面内皮素Ａ型受体（ＥＴＡ）的高度选择性和多聚赖氨酸对ＤＮＡ的强吸附作用，以ＢＰ携载含有β－半乳糖苷酶（β－ＬａｃＺ）基因的表达质粒ｐＳＶ－β－Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ（ｐＳＶ－β－ＬａｃＺ）对培养的ＶＳＭＣ和内皮细胞（ＥＣ）转移基因。结果表明，ＢＰ具有向ＶＳＭＣ转基因性能，且依赖与靶细胞表面ＥＴＡ的结合。

内皮素及其A受体在兔颅脑创伤后脑血流量变化中的作用及意义

目的：了解内皮素（ＥＴ）及其Ａ受体在颅脑创伤后脑血流量变化中的作用及意义。方法：１３０只家兔致以左额顶叶为着力部位的加速性撞击伤，动态观察脑组织内皮素含量变化、内皮素Ａ受体ｍＲＮＡ表达和定位变化，内皮素Ａ受体拮抗剂ＢＱ１２３的作用及上述变化对脑血流量变化的影响。结果：脑创伤后血浆、脑脊液和局部脑组织内皮素含量显著升高；内皮素Ａ受体ｍＲＮＡ主要分布于脑血管内皮细胞，表达显著增强；创伤后局部脑血流量显著降低，应用ＢＱ１２３治疗的动物，血流量下降被明显抑制。结论：内皮素通过其Ａ受体的调节在颅脑创伤后脑缺血的形成中有重要作用；应用内皮素Ａ受体拮抗剂可以防治颅脑创伤后脑缺血。