siRNA封闭BRCAA1基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖和Rb基因表达的影响

目的:研究siRNA封闭乳腺癌抗原相关基因1(BRCAA1)对乳腺癌细胞MCF-7增殖和Rb基因表达的影响。方法:采用RNAi技术对乳腺癌细胞MCF-7细胞BRCAA1基因进行特异性抑制,用阳离子脂质体与化学合成的Pre-designedan-ti-BRCAA1 siRNA构建转染复合体,反转染MCF-7细胞株48h后提取总RNA,分为未处理(NT)组、阴性对照组、阳性对照组和BRCAA1组,经反转录荧光实时PCR检测BRCAA1和Rb基因mRNA表达情况;检测细胞增殖抑制率。结果:与阴性对照组相比,siRNA转染MCF-7细胞后实验组BRCAA1基因mRNA水平降低了42.3%;Rb基因表达较之阴性对照组上升了11.1%;实验组MCF-7细胞增殖抑制率为(81.9±6.1)%,抑制作用明显强于对照组(P<0.05)。结论:BRCAA1基因的封闭明显抑制了MCF-7细胞的增殖,BRCAA1基因与Rb基因可能存在有某种相互拮抗的作用。

BRCAA1蛋白在胃癌组织与不同分化细胞株中的表达及其临床意义

背景:BRCAA1蛋白是一个新蛋白,其在胃癌发生、发展中的作用尚不明确。目的:探讨BRCAA1蛋白在胃癌组织与不同分化细胞株中的表达水平及其临床意义。方法:收集60例胃腺癌患者,分别取胃癌和癌旁组织,应用免疫组化SP法检测BRCAA1蛋白的表达水平,并分析其与胃癌分级的关系。蛋白质印迹分析检测BRCAA1蛋白在胃癌高分化(MKN-1和MKN-74)、中分化(SGC-7901)和低分化(KATO-Ⅲ和MGC80-3)细胞株中的表达水平。结果:胃癌组织中BRCAA1蛋白的表达阳性率(23/60,38.3%)显著高于癌旁组织(0/60,0%)(P<0.01);BRCAA1蛋白在高分化(2/17,11.8%)、中分化(11/26,42.3%)和低分化胃癌组织中(10/17,58.8%)的表达阳性率存在显著差异(P<0.05)。蛋白质印迹分析结果表明BRCAA1蛋白在胃癌高、中、低分化细胞株中的表达水平逐渐增强。结论:BRCAA1蛋白参与了胃癌的发生、发展,其表达水平与胃癌低分化程度密切相关,BRCAA1蛋白可能是一个胃癌不良预后的标志物。

brcaa1基因新抗原表位片段的扩增、快速表达和活性鉴定

目的制备包含乳腺癌新抗原表位的BRCAA1部分肽段。方法根据brcaa1基因序列与RTS技术要求,设计并合成带有His尾巴的PCR引物,利用brcaa1基因质粒作模板,利用PCR技术扩增获取相应基因片段并测序证实,然后采用RTS系统试剂盒与配套设备,快速翻译合成蛋白,利用PAGE电泳与Western Blot技术,鉴定表达蛋白的活性。结果PCR获取包含乳腺癌新抗原表位的BRCAA1基因片段;测序证实所获片段是所需的目的片段;Western Blot分析证实表达的肽段具有抗原活性。结论制备了具有活性包含乳腺癌新抗原表位的BRCAA1肽段,为进一步制备单克隆抗体与建立诊断方法奠定了基础。

沉默BRCAA1基因对胃癌MGC-803细胞的抑制作用及其可能的机制

目的:研究沉默乳腺癌相关抗原1(breast cancer-associated antigen 1,BRCAA1)基因对胃癌细胞株MGC-803的抑制作用及其可能的机制。方法:构建BRCAA1基因shRNA载体,将构建的shRNA-BRCAA1质粒与阴性对照质粒shRNA-N转染胃癌MGC-803细胞,24 h后用荧光显微镜观察转染效率,实时定量PCR检测BRCAA1和GAPDH基因mRNA表达水平MTT法检测转染后24、48与72 h的细胞增殖水平,Annxin-V PE/7AAD检测转染24 h后的细胞凋亡水平,Western blotting检测转染48 h后细胞的凋亡相关蛋白表达水平。结果:BRCAA1 siRNA表达质粒转染MGC-803细胞24 h的转染效率为(81.2±2.6)%。转染后48 h MGC-803细胞的BRCAA1 mRNA水平下降了61.4%,MGC-803细胞增殖的抑制率达45.0%,转染siRNA细胞的凋亡率明显高于未转染细胞和对照质粒转染细胞[(14.4±1.6)%vs(5.4±2.0)%,(4.4±2.5)5,P<0.05]。转染siRNA细胞的凋亡相关蛋白Rb与Bax的表达量显著增加(P<0.05),Bcl-2的表达量显著减少(P<0.05)。结论: BRCAA1基因的沉默可有效抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖和诱导细胞凋亡,其机制与其促进Rb和Bax蛋白表达、抑制Bcl- 2蛋白表达有关。