BRCAl基因多态性与宫颈癌发生关系的研究

目的对BRCAl基因的多态性与人类宫颈癌的相关性进行研究。方法选取在西安交通大学医学院第一附属医院就诊的123例宫颈癌患者做为研究对象，同时选取63例健康女性为对照研究，对两组均进行多聚酶链式反应、限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）法检测，对各组基因型及其等位基因的频率分布差异进行测量记录并进行分析。结果BRCAl871T／T，C／T及C／C中，与C／C相比，C／T（χ^2=4．164，P〈0．05）、T／T（χ^2=4．458，P〈0．05），C／T＋T／T（χ^2=16．184，P〈0．01）的基因型宫颈癌发生的风险降低，等位基因的突变与宫颈癌的发生具有密切相关性。结论BRCAl基因多态性使BRCAl基因发生了突变，其与宫颈癌的发生有著密切关系．当BRCAl 871 C〉T则能够降低官鲕癌的发生率．

非家族性乳腺癌DNA含量与BRCAl蛋白表达的关系及意义

目的：研究非家族性乳腺癌DNA含量与BRCAl蛋白表达的关系，探讨其在非家族性乳腺癌发生发展中的作用。方法：应用图像分析仪及免疫组织化学技术检测25例乳腺癌旁正常上皮、不典型增生上皮及50例他腺癌组织DNA含量：和BRCAl蛋白表达情况。结果：(1)乳腺癌旁正常上皮、Ⅰ、Ⅱ级不典型增生上皮主要为2C、3—4C，DI总体值1．01—1．54，双峰DNA直方图，主峰在2C、3C。BRCAl均呈阳性显色，染色深度(+++)细胞占100％。阳性细胞数(++++)占100％，全部定位于细胞核；癌旁Ⅲ级不典型增生及癌组织主要为≥5C的高倍异倍体细胞，DI总体值2．75—3．64，单峰DNA直方图，主峰在≥5C(71．2％)，峰值右移。BRCAl阳性反应率为80％(40／50)，染色深度(+++)只占20％(10／50)，阳性细胞数(++++)只占18％(9／50)，其阳性颗粒定位除细胞核外，也定位于胞浆，甚至胞核和胞浆同时存在。(2)乳腺癌旁正常上皮、不典型增生上皮、癌与DNA含量及BRCAl表达呈等级负相关(P≤0．005)；DNA含量与BRCAl表达呈负相关(P≤0．01)，BRCAl阴性表达者，DNA指数高，DNA2C检出率低，5C检出率高。结论：乳腺上皮中DNA含量增高，BRCAl表达下降，阳性颗粒定位异常，对非家族性乳腺癌的发生发展具有潜在作用。检测DNA含量及BRCAl蛋白表达情况，有利于非家族性乳腺癌的早期诊断、判断生物学行为及预后。

联合运用基因芯片和反义寡核苷酸技术筛选骨肉瘤转移相关基因

目的 探讨联合运用基因芯片和反义寡核苷酸技术筛选转移相关基因。方法 分别提取两种具有不同转移能力的骨肉瘤细胞总RNA ,反转录cDNA ,用基因芯片筛选差异表达基因 ;从基因芯片筛选结果中选择适当基因 ,设计相应的反义寡核甘酸进行体外实验 ,观测其对细胞生长特性的影响。结果 基因芯片筛选出 11个差异表达基因 ,多与肿瘤发生发展有关。BRCA1和BLCAP基因反义寡核苷酸均可引起骨肉瘤细胞生长速度变快、克隆形成率增高、增殖活性增强。结论 联合运用基因芯片和反义寡核苷酸技术可以有效地筛选转移相关基因 ,为进一步研究提供有益的参考。

Gadd45介导抑癌基因BRCA1诱导的G_2/M期阻滞

背景与目的:目前已经肯定,抑癌基因BRCA1是细胞周期监测点调控的重要因子,但BRCA1在细胞周期阻滞中的作用机制尚不完全清楚。本研究的目的是探讨Gadd45在BRCA1诱导的细胞周期阻滞中所起的作用。方法:应用转染、流式细胞仪细胞筛选(分选)、Westernblot检测分析BRCA1诱导Gadd45的表达;利用CAT酶活性测定的方法检测外源BRCA1对Gadd45启动子所起作用;以流式细胞周期分析方法检测反义Gadd45转染对BRCA1诱导的细胞G2/M期阻滞的影响;采用细胞生长集落形成分析反义Gadd45转染HeLa、HCT116细胞在BRCA1诱导的细胞生长抑制过程所起的作用。结果:外源转染BRCA1可诱导Gadd45蛋白的表达;BRCA1激活Gadd45启动子的转录;反义Gadd45可显著阻遏BRCA1诱导细胞G2/M期阻滞;反义Gadd45转染可明显降低BRCA1对HeLa、HCT116细胞集落形成的抑制作用。结论:Gadd45作为BRCA1的下游调控基因,在BRCA1诱导的细胞G2/M期阻滞过程和生长抑制中起介导作用。

BRCA1基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞的影响

目的 探索抑癌基因BRCA1基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞SOSP 96 0 7的影响。方法 通过细胞培养 ,测量细胞生长曲线、计算细胞集落形成率、检测细胞周期等 ,观察BRCA1基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞系SOSP 96 0 7的影响。结果 BRCA1基因反义寡核苷酸浓度为 1 0 μmol/L时 ,骨肉瘤细胞的生长速度变快 ,集落形成率明显增高 ;流式细胞仪检测发现其引起细胞周期变化 ,细胞增殖活性提高。结论 BRCA1基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞SOSP 96 0 7有明显的影响 ,使得骨肉瘤细胞恶性生物学特性更加显著 。

9例家族性乳腺癌患者BRCA1基因序列突变分析

目的 :研究中国汉族家族性乳腺癌 (familiarbreastcancer ,FBC)患者BRCA1的突变情况。方法 :选取中国汉族 9个乳腺癌家系中各 1例乳腺癌患者 ,1例无肿瘤家族史的正常人 ,32例散发性乳腺癌患者和 33例正常献血者。从外周血淋巴细胞中提取DNA ,经PCR扩增后 ,以变性高效液相色谱 (denaturinghighperformanceliquidchromatography ,DHPLC)初筛BRCA1所有编码外显子及部分内含子的多态性 ,对异常峰型者直接测序。 结果 :在9例家族性乳腺癌患者中 ,1例患者在外显子 11上发现一处致病性突变 (3870delTGTC) ,该突变因缺失 4个碱基导致框架移位。 1例患者发现尚未见报道的密码子 86 7单个碱基替换导致编码氨基酸的变异 (E86 7R)。 8例患者在内含子 18(IVS18+6 5 )上检出已知的G→A变异 ,变异率为 88.9% (8/ 9)。该位点变异在散发性乳腺癌和一般人群中的检出率分别为 37.5 % (12 / 32 )和 33.3% (11/ 33)。该 8例患者同时检出密码子 871已知的错义变异(P871L)与内含子 9(IVS8 5 7delT)的变异 ,且有 1例患者在此 3处的变异为纯合变异。这 8例患者的检测结果提示 ,IVS18+6 5G→A、IVS8 5 7delT与 2 731C→T这 3个位点存在连锁。该连锁情况尚未见报道。 2例患者在密码子 14 36发现已知为多态的改变 (S14 36S)。 1例患?

BRCA1相互作用蛋白的分离及鉴定

乳腺癌易感基因 (breastcancersusceptibilitygene 1,BRCA1)在DNA损伤修复、细胞周期调控、染色质的稳定、基因转录激活以及细胞凋亡等方面起着重要作用。BRCA1C 末端是富含酸性氨基酸的转录激活结构域 (AD) ,AD核心结构为两个串联的BRCT结构域 (BRCT1和BRCT2 )。应用酵母双杂交技术 ,以BRCT2为诱饵蛋白 ,从卵巢文库中筛选到了与BRCT2结构域相互作用蛋白FHL2 (fourandhalfLIMdomains)。利用酵母交配的方法证明FHL2与BRCA1BRCT2特异结合 ,而不与BRCA1BRCT1、Rap1BRCT结构域结合。GST沉淀实验表明 ,FHL2在体外特异地与BRCT2结构域相结合 ;免疫共沉淀实验表明 ,FHL2在体内特异地与BRCT2结构域结合 ;FHL2可与全长BRCA1结合。BRCA1与FHL2相互作用的发现为研究BRCA1以及FHL2在肿瘤发生、发展中的作用打下了坚实的基础。

乳腺癌患者BRCA1基因外显子11突变研究

目的:检测乳腺癌患者(breast and ovarian cancer susceptibility gene1,BRCA1)基因exon11突变情况及突变位置,探讨BRCA1突变与乳腺癌的关系。方法:采取105例乳腺癌标本为实验组,30例非癌乳腺组织为对照组。应用PCR-SSCP技术和DNA直接测序法检测所有标本BRCA1基因外显子11全部序列的突变情况。结果:30例非癌乳腺组织BRCA1基因外显子11未检出突变,105例乳腺癌中有10例发生基因突变,占总例数的9.5%。10例中2例为同义突变:2430T→C,2630T→G;8例为错义突变:2532T→G,2685T→C(2例),3191C→G,3232A→G,3667A→G(2例),3876C→A。结论:BRCA1基因外显子11突变与乳腺癌的发生关系密切,对其进行检测可能对乳腺癌的患病风险评估及早期诊断具有重要意义。

散发性卵巢上皮性癌BRCA1基因表达的研究

目的 :探讨在散发性卵巢上皮性癌中BRCA1基因的mRNA及蛋白表达是否改变 ,并研究其与临床病理的关系。方法 :应用RT PCR、S -P免疫组织化学法检测 50例卵巢上皮性癌、1 1例良性卵巢肿瘤组织、1 0例正常卵巢组织中BRCA1基因mRNA和蛋白的表达水平。结果 :卵巢癌组织、良性肿瘤组织及正常组织中BRCA1mRNA的表达相对水平分别为 0 .6688± 0 .2 2 32、0 .92 64± 0 .1 398和 1 .0 4 4 0± 0 .2 1 82 ,而BRCA1蛋白的表达率分别为 30 0 % ,90 .9% ,1 0 0 % ;卵巢癌组织中BRCA1基因的表达水平显著低于良性肿瘤及正常卵巢组织 (P <0 .0 1 )。另外 ,随着卵巢癌恶性程度升高 ,BRCA1基因表达缺失明显增多 (P <0 .0 5) ;同时有淋巴结转移的癌组织 ,表达也明显减少甚至缺如。结论 :BRCA1基因转录及翻译水平的下调在散发性卵巢癌发生发展中有重要意义 ;同时其表达的减弱与卵巢上皮性癌病理学分级有关 ,提示预后较差。

乳腺癌易感基因BRCA1的BRCT结构域的融合表达及纯化

乳腺癌易感基因BRCA1在乳腺癌发生、发展中起着重要作用。在其C 末段有两个串联重复的BRCT(BRCT1和BRCT2 )结构域。它们与BRCA1的重要功能密切相关 ,BRCT结构域还存在于其它 5 0多种蛋白中。本文用PCR方法扩增了BRCT1和BRCT2结构域编码序列 ,并将其以正确相位与pGEX 2T载体中的GST编码序列融合 ,构建成重组质粒pGST BRCT1和pGST BRCT2。将这两种重组质粒分别转化E coliDH5α后 ,分别表达了GST BRCT1和GST BRCT2两种融合蛋白。Westernblot检测结果表明 ,两种融合蛋白均能与GST抗体反应。表达的GST BRCT1和GST BRCT2经GST Sepharose 4B亲和层析获得了纯化的融合蛋白 。

BRCA1和相关凋亡调控蛋白在人乳腺浸润性导管癌中的表达与相关性分析

目的:分析乳腺癌易感基因(BRCA1)和相关凋亡调控蛋白C-myc、Bcl-2和p53在乳腺浸润性导管癌中表达的相关性,与临床病理指标的关系,探讨BRCA1等蛋白表达对乳腺癌诊断和治疗的意义。方法:免疫组织化学SP法,检测24例乳腺良性病变和120例乳腺浸润性导管癌中BRCA1、C-myc、Bcl-2和p53的表达,收集患者临床资料,校正Pearsonχ2检验进行统计分析。结果:在良性乳腺病变,BRCA1、C-myc和p53蛋白在细胞核的阳性表达率分别为95.8%(23/24)、8.3%(2/24)和4.2%(1/24),Bcl-2在细胞质/膜阳性表达率为91.7%(22/24);在浸润性导管癌,BRCA1、C-myc和p53蛋白阳性表达率分别为60.0%(72/120)、38.3%(46/120)和36.7(44/120),Bcl-2阳性表达率为50.8%(61/120);与良性乳腺病变比较,浸润性导管癌中BRCA1、Bcl-2阳性表达率明显降低,C-myc和p53表达增加,均有显著性差异(P<0.05)。BRCA1表达与C-myc和p53过表达相关;C-myc表达与p53表达相关;BRCA1、p53、C-myc表达与Bcl-2表达均无显著相关性。BRCA1、C-myc和Bcl-2表达与组织分级和腋淋巴结转移相关。结论:乳腺浸润性导管癌中,BRCA1失表达与C-myc和p53过表达、组织学分级和腋淋巴结转移相关,凋亡调控基因的异常表达参与乳腺浸润性导管癌的发生。

BRCA1在乳腺癌细胞系中负调控miR-146a并抑制其促癌功能

目的在乳腺癌细胞系中,研究BRCA1基因对miR-146a的调控,以及miR-146a的细胞学功能。方法采用Western blot和实时定量PCR检测BRCA1基因对miR-146a的调控;利用生物信息学分析软件对BRCA1以及miR-146a的相互调控进行分析;运用MTS、克隆形成、Transwell等实验技术检测miR-146a高表达及敲降对MCF-7细胞生长增殖、侵袭迁移等能力的影响。结果该研究发现BRCA1缺失的情况下,miR-146a表达显著表达升高。通过对miR-146a启动子区分析发现BRCA1可以与miR-146a启动子区结合并调控其表达,同时miR-146a可以与BRCA1 3'UTR不完全互补结合,这提示BRCA1对miR-146a的调控是一种负反馈作用机制。该研究还发现miR-146a高表达可以促进细胞生长增殖和侵袭迁移的能力,而miR-146a敲降后却可以抑制细胞这些表型。结论在乳腺癌细胞中,BRCA1通过负调控miR-146a的表达来抑制其促癌功能。

散发性乳腺浸润性导管癌中BRCA1表达及临床意义

目的：研究散发性乳腺浸润性导管癌（invasive ductal carcinoma，IDC）（breast cancer 1 BRCA1）基因的表达及其与其临床病理特征之间的关系。方法：采用免疫组化sP三步法检泖167例乳腺浸润性导管癌，53例乳腺腺病患者的石蜡标本BRCA1的表达。从病理科的档案提取患者的年龄，肿物大小，淋巴结转移情况，ER，PR，Her-2表达结果，分析BRCA1的表达和患者的年龄，肿物大小，淋巴结转移情况及ER，PR，Her－2表达的关系。结果：BRCA1蛋白在IDC组织表达率56．7％（38／67），癌旁组织表达率80．0％（36／45），乳腺腺病组织表达率92．5％（49，53）。阳性细胞定位除细胞核外，也见于胞浆。IDC癌组织与癌旁组织、乳腺腺病组织比较，BRCA1阳性表达率均下降，均有显著性差异（P〈0．05）。BRCAI的表达与淋巴结转移呈负相关（r=-0．137，P〈0．05），与ER、PR、Her－2的表达均呈负相关（r值分别为－0．439，－0．250，－0．363，P〈0．05），与年龄、肿物大小无明显相关性（P〉0，05）。结论：BRCA1蛋白可作为估计乳腺癌生物学行为和预后的潜在指标。

BRCA1基因与乳腺癌及化疗敏感性的关系

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，随着我国人民生活水平的提高，其发生率呈持续上升趋势，且呈现出发病年轻化的趋势，严重威胁着女性的健康。目前，改良根治术是治疗乳腺癌的主要手段，综合放化疗、内分泌治疗以及靶向治疗使乳腺癌的治疗效果有所提高，但乳腺癌患者的总体复发率仍达40％。

维吾尔族、汉族散发性乳腺癌BRCA1基因rs16941及rs16942位点多态性分析

目的探讨维吾尔族及汉族散发性乳腺癌BRCA1基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)是否存在差异,并分析SNPs位点与肿瘤易感性的关系。方法选取100例散发性乳腺癌(维吾尔族、汉族各50例)及100例乳腺腺病(维吾尔族、汉族各50例)作为分析对象,对BRCA1基因rs16941及rs16942进行DNA测序。结果 rs16941及rs16942的AA、AG、GG基因型在维吾尔族、汉族乳腺癌组之间的分布差异有统计学意义(P=0.009,P=0.017)。肿瘤易感性比较:维吾尔族rs16941位点中AG与AA基因型相比,其能够降低乳腺癌的发病风险(OR=0.964,95%CI:0.260~3.583,P=0.009);维吾尔族rs16942位点中AG与AA基因型相比,其能够增加乳腺癌的发病风险(OR=1.017,95%CI:0.293~3.916,P=0.017)。汉族rs16941位点中AG与AA基因型相比,其能够降低乳腺癌的发病风险(OR=0.824,95%CI:0.210~3.234,P=0.044)。结论 rs16941及rs16942的AA、AG、GG基因型在维吾尔族、汉族乳腺癌组的分布,差异有统计学意义;SNPs与肿瘤易感性有相关性。

食管癌组织BRCA1和β-tubulin Ⅲ的表达与紫杉醇疗效的相关研究

目的:检测食管癌组织BRCA1、β-tubulin Ⅲ的表达水平,探讨其与紫杉醇疗效的关系。方法:用免疫组化检测肿瘤组织中BRCA1和β-tubulin Ⅲ的蛋白表达水平,分析表达与疗效之间的关系。结果:BRCA1的高表达率为47%,BRCA1高表达组化疗有效率为57%、低表达组的化疗有效率为63%,两者差异无统计学意义(P=0.673);β-tubulinⅢ的高表达率为57%,β-tubulin Ⅲ高表达组的化疗有效率41%、低表达组化疗有效率85%,差异有统计学意义(P=0.002)。结论:β-tubulin Ⅲ可以作为紫杉类在晚期食管癌中疗效的预测因子,β-tubulin Ⅲ低表达的食管癌患者是紫杉类化疗的最适人群。本研究未体现出BRCA1的预测作用。

联合检测ERCC1、BRCA1、RRM1表达在非小细胞肺癌选择化疗方案中的意义

目的:探讨检测非小细胞肺癌组织中ERCC1、BRCA1、RRM1的蛋白表达在化疗方案选择中的临床意义。方法:选取确诊非小细胞肺癌患者120例,随机分为两组。常规化疗组(60例)给予吉西他滨/紫杉醇+顺铂化疗;实验组(60例):化疗前检测ERCC1、RRM1、BRCA1蛋白的表达,选用敏感的化疗药物治疗。比较两组的疗效、无疾病进展时间和生存期。结果:实验组中ERCC1蛋白和BRCA1蛋白表达阳性率为28.33%,RRM1蛋白表达阳性率为51.67%。治疗两周期后评价常规化疗组和实验组的化疗客观缓解率分别是35.00%(21/60),43.33%(26/60),无统计学差异(P>0.05)。两组无疾病进展平均时间、中位时间分别为实验组6.653个月、4.8个月;常规化疗组4.35个月、3.5个月,有统计学意义(P<0.05)。生存分析两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:检测ERCC1蛋白、BRCA1蛋白、RRM1蛋白的表达选择化疗方案使非小细胞肺癌患者在临床化疗中获益,可以延长无疾病进展时间。

家族性和早发性乳腺癌BRCA1基因突变分析

目的 分析中国黑龙江省家族性和早发性乳腺癌中BRCA1基因的突变情况.方法 以黑龙江地区的92例家族性和早发性乳腺癌（发病年龄≤35岁）为研究对象.由静脉血提取基因组DNA,对BRCA1基因的全部编码序列（除外1,4号外显子）进行扩增.由聚丙烯酰胺凝胶电泳分析（SSCP）进行突变的初筛,之后进行DNA直接测序证实.结果 在92例乳腺癌患者中发现有5种致病性突变,其中3种为新发现的突变,发现的已报道的2种突变均为无义突变.结论 在中国黑龙江人群中,BRCA1基因的突变对于遗传性乳腺癌的发生可能具有较重要意义;新发现的3个突变位点可能是中国人群中的特有突变;黑龙江地区BRCA1在家族性乳腺癌中突变率明显低于国内外报道,但其中的移码突变3712insG分别在3个患者中检出,提示有可能成为该地区的基础突变.

brcaa1基因新抗原表位片段的扩增、快速表达和活性鉴定

目的制备包含乳腺癌新抗原表位的BRCAA1部分肽段。方法根据brcaa1基因序列与RTS技术要求,设计并合成带有His尾巴的PCR引物,利用brcaa1基因质粒作模板,利用PCR技术扩增获取相应基因片段并测序证实,然后采用RTS系统试剂盒与配套设备,快速翻译合成蛋白,利用PAGE电泳与Western Blot技术,鉴定表达蛋白的活性。结果PCR获取包含乳腺癌新抗原表位的BRCAA1基因片段;测序证实所获片段是所需的目的片段;Western Blot分析证实表达的肽段具有抗原活性。结论制备了具有活性包含乳腺癌新抗原表位的BRCAA1肽段,为进一步制备单克隆抗体与建立诊断方法奠定了基础。

乳腺癌的分子生物学发病机制

乳腺癌(mammary carcinoma)是人类最常见的一种恶性肿瘤,也是女性主要恶性肿瘤之一。关于乳腺癌的确切发病机制,尚无文献综合报道。本文就其分子学发病机制从癌基因与抑癌基因及细胞因子角度进行综述。