乳腺癌易感蛋白BRCA1的BRCT2结构域染色质伸展活性的定位

40 %～ 5 0 %的遗传性乳腺癌和至少 80 %的既有乳腺癌又有卵巢癌家族史的患者是由BRCA1突变引起的 .BRCA1C末端含有 2个BRCT结构域 (BRCT1和BRCT2 ) ,它们与BRCA1的重要功能密切相关 .许多乳腺癌易感突变发生在BRCA1的BRCT结构域中 .利用染色质结构检测技术表明 ,BRCT结构域具有染色质伸展活性 .利用缺失突变技术构建了 6种BRCT2结构域 (175 6～ 185 2位氨基酸残基 )缺失突变体并将BRCT2结构域中与染色质伸展相关的重要区域定位到 175 6～ 180 8之间的氨基酸残基 ;用丙氨酸扫描技术构建了 6种BRCT2结构域丙氨酸扫描突变体并将重要氨基酸残基序列定位到 1784～ 1788之间的VQLCG .BRCT2结构域的定位有助于预测BRCT2结构域突变后发生乳腺癌的风险 ,也为进一步研究BRCT2结构域的功能机制提供了有用的材料 .

BRCA1相互作用蛋白的分离及鉴定

乳腺癌易感基因 (breastcancersusceptibilitygene 1,BRCA1)在DNA损伤修复、细胞周期调控、染色质的稳定、基因转录激活以及细胞凋亡等方面起着重要作用。BRCA1C 末端是富含酸性氨基酸的转录激活结构域 (AD) ,AD核心结构为两个串联的BRCT结构域 (BRCT1和BRCT2 )。应用酵母双杂交技术 ,以BRCT2为诱饵蛋白 ,从卵巢文库中筛选到了与BRCT2结构域相互作用蛋白FHL2 (fourandhalfLIMdomains)。利用酵母交配的方法证明FHL2与BRCA1BRCT2特异结合 ,而不与BRCA1BRCT1、Rap1BRCT结构域结合。GST沉淀实验表明 ,FHL2在体外特异地与BRCT2结构域相结合 ;免疫共沉淀实验表明 ,FHL2在体内特异地与BRCT2结构域结合 ;FHL2可与全长BRCA1结合。BRCA1与FHL2相互作用的发现为研究BRCA1以及FHL2在肿瘤发生、发展中的作用打下了坚实的基础。