BRE-AS启动子负调控区变异与启动子活性、母猪繁殖力的关系

[目的]本试验旨在研究BRE反义lncRNA(BRE antisense lncRNA,BRE-AS)基因启动子负调控区(PNRR)序列特征,以及变异位点多态性与母猪繁殖性状、启动子活性的关系。[方法]采用DNA测序法获得大白猪BRE-AS基因PNRR序列;利用池DNA测序筛选大白猪BRE-AS基因PNRR上的变异位点,DNA测序法进行基因分型;利用GLM模型进行变异位点多态性、单倍型与母猪繁殖性状的关联分析;利用荧光素酶报告系统分析变异对BRE-AS基因启动子活性的影响。[结果]大白猪BRE-AS基因的PNRR位于-952~-161 nt,长度792 bp。在大白猪BRE-AS基因PNRR的-794和-756 nt处发现了2个变异位点,分别将其命名为g.-794T>G和g.-756A>C。在大白猪群体中BRE-AS基因g.-794T>G位点有3种基因型,其中TT型为优势基因型(0.752),T为优势等位基因(0.863);在g.-756A>C位点有3种基因型,其中AA型为优势基因型(0.759),A为优势等位基因(0.868);2个变异位点形成3种合并基因型,其中TT/AA型为优势基因型(0.760),T-A为优势单倍型(0.869)。关联分析发现2个位点及其合并基因型均与母猪总产仔数(TNB)、产活仔数(NBA)和健仔数(NSP)等3个繁殖性状间显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)关联。荧光素酶活性分析发现G-C单倍型启动子活性极显著高于T-A单倍型(P<0.01)。[结论]BRE-AS是大白猪繁殖性状的候选基因,其PNRR上2个变异位点(g.-794T>G和g.-756A>C)通过影响启动子活性影响其母猪繁殖力。

Bre1与Rad6形成的复合物的表达、纯化和结晶

目的:建立Bre1及Rad6的表达和纯化方法,构建Bre1-Rad6的复合物,寻找复合物的结晶条件,为使用X射线晶体学的方法解析复合物的结构奠定基础。方法:使用大肠杆菌表达系统表达蛋白质;使用共纯化的方法组装复合物;使用气象扩散的方法结晶复合物。结果:建立了来源于Lodderomyces elongisporus的Bre1(LeBre1)氮端与Rad6相互作用的结构域(RBD)和Rad6(LeRad6)在大肠杆菌中大量表达的方法;通过使用共纯化的方法,成功组装了LeBre1 RBD-Rad6复合物,并进一步通过两步凝胶过滤层析纯化的方法精细纯化,获得了纯度超过95%的蛋白复合物;使用气象扩散的方法结晶复合物,在18℃通过对1 000多个结晶条件的筛选,确定了复合物的两种结晶条件,进一步对该条件优化,获得了质量相对较好的晶体。结论:成功的构建了LeBre1 RBD-Rad6复合物的表达、纯化和结晶的方法,为使用X射线晶体学方法解析复合物的结构奠定了基础。

核小体泛素连接酶Bre1的eRING结构域与泛素转移酶Rad6的相互作用研究

目的:探究乳酸克鲁维酵母核小体泛素连接酶Bre1的eRING结构域与泛素转移酶Rad6的相互作用,解析Bre1的RBD结构域对该相互作用的影响。方法:在大肠杆菌中表达乳酸克鲁维酵母的GST-Rad6、Rad6、Bre1 eRING等蛋白并将它们纯化至纯度>95%,通过GST-Rad6下拉实验,结合蛋白免疫印迹实验研究GST-Rad6和Bre1的eRING结构域的相互作用及Bre1的RBD结构域对其相互作用的影响;通过SPR实验研究Rad6与Bre1的eRING结构域之间的相互作用。结果:乳酸克鲁维酵母的GST-Rad6与Bre1的e RING结构域存在相互作用,该相互作用可以被Bre1 RBD所抑制;GST蛋白与乳酸克鲁维酵母Bre1的eRING存在相互作用,不可作为该蛋白的下拉标签使用。结论:Rad6与Bre1的eRING结构域存在相互作用,该相互作用可以被RBD所抑制,GST标签不适于乳酸克鲁维酵母的eRING相互作用研究。

Cry1Ac敏感和抗性小菜蛾bre-3和bre-5基因mRNA的表达差异研究

在室内选用Cry1Ac对小菜蛾Plutella xylostella 3龄幼虫进行抗性选育,获得相对抗性为356倍的抗性种群DBM1Ac-R品系。应用实时定量基因扩增荧光检测(real time quantitative PCR,real-time qPCR)技术检测敏感小菜蛾DBM1Ac-S和抗性小菜蛾DBM1Ac-R品系鞘糖脂(Glycosphingolipids,GSLs)合成酶基因bre-3和bre-5 mRNA在2龄、3龄、4龄和老熟幼虫、蛹及4龄中肠的表达情况。结果显示:bre-3和bre-5在两个品系的5个时期和4龄中肠均有表达,其中DBM1Ac-S品系的bre-3 mRNA在3龄、4龄和老熟幼虫的相对表达量显著高于DBM1Ac-R品系(P<0.05),分别为DBM1Ac-R品系的2.36、5.54和2.68倍;DBM1Ac-S品系的bre-5 mRNA在2龄至蛹期的相对表达量分别为DBM1Ac-R品系的1.19、3.13、1.78、1.75和1.65倍,其中由3龄到蛹期差异显著(P<0.05)。DBM1Ac-R品系3龄至老熟幼虫的bre-3和bre-5 mRNA相对表达量降低可能与小菜蛾长期的Cry1Ac汰选有一定的关系。比较同一种群、同一龄期(包括4龄中肠)的bre-3和bre-5 mRNA相对表达量差异时,发现bre-5相对表达量均高于bre-3。研究结果为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫晶体蛋白受体之一GSLs的进一步研究提供了一定的基础。

LncRNA BRE-AS1在急性心肌梗死患者血清中表达及对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响

目的探究lncRNA BRE-AS1在急性心肌梗死(AMI)患者血清中表达和对缺氧/复氧(H/R)诱导心肌细胞AC16损伤的影响。方法QPCR检测AMI患者血清和H/R处理12 h、24 h、48 h后AC16细胞中lncRNA BRE-AS1表达;将lncRNA BRE-AS1 siRNA和对照siRNA转染至AC16细胞中,qPCR检测检测转染后细胞中lncRNA BRE-AS1表达;利用试剂盒检测细胞中氧化应激指标MDA、SOD和GSH-PX含量,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中p38/MAPK信号通路蛋白表达。结果与健康志愿者和常氧组AC16细胞相比,AMI患者血清和H/R处理12 h、24 h、48 h后细胞中lncRNA BRE-AS1表达显著增加(P<0.01)。与沉默对照组比较,沉默BRE-AS1组AC16细胞中lncRNA BRE-AS1表达显著降低(P<0.01)。与常氧组比较,H/R组AC16细胞中MDA含量、细胞凋亡率、p38/MAPK信号通路蛋白p-p38、p-ERK1/2表达显著增加,SOD和GSH-PX含量及细胞增殖能力显著降低(P<0.01);与H/R+沉默对照组比较,H/R+沉默BRE-AS1组AC16细胞中MDA含量、细胞凋亡率、p38/MAPK信号通路蛋白p-p38、p-ERK1/2表达显著降低,SOD和GSH-PX含量及细胞增殖能力显著增加(P<0.01)。结论LncRNA BRE-AS1在AMI患者血清中高表达,沉默lncRNA BRE-AS1能够抑制H/R诱导的心肌细胞损伤,其机制可能与抑制p38/MAPK信号通路有关。

长链非编码RNA BRE-AS1慢病毒表达载体的构建与鉴定

目的构建长链非编码RNA BRE-AS1的慢病毒表达载体。方法利用重叠延伸PCR法构建出BRE-AS1的全长目的片段,将全长目的片段及慢病毒载体质粒pCDH-CMV-MCSEF1分别双酶切后进行连接,转化到感受态大肠杆菌后,通过DNA测序鉴定筛选出阳性菌落,提取目的质粒。利用目的质粒制备包装慢病毒,并感染肾细胞癌细胞系OS-RC-2,分别利用荧光显微镜和荧光实时定量PCR检测细胞中BRE-AS1是否过表达。结果重叠延伸PCR得到正确的BRE-AS1全长序列,经过双酶切、连接、转化、筛选及DNA测序,成功构建重组慢病毒载体质粒pCDHBRE-AS1。通过荧光显微镜检测,几乎所有经过嘌呤霉素筛选的OS-RC-2细胞均具有绿色荧光,显示其被重组慢病毒感染;荧光实时定量PCR显示,感染了pCDH-BRE-AS1慢病毒的OS-RC-2细胞中,BRE-AS1的表达水平上升了38.5倍。EdU插入实验显示BRE-AS1抑制肾癌细胞的增殖。结论本研究成功构建了BRE-AS1的慢病毒表达载体,并证明BRE-AS1能抑制肾癌细胞增殖。

抗凋亡蛋白BRE、TNFR1和自体吞噬蛋白Beclin1在小鼠肝纤维化的表达及Reversine对其的影响

目的研究抗凋亡蛋白BRE、TNFR1蛋白和自体吞噬蛋白Beclin1在小鼠肝纤维化的表达,并观察Reversine对其表达的影响。方法 24只昆明小鼠随机分为6组:第1组不作任何处理;第2组皮下注射0.1 mLCCl4/oil2,4 h后处死取肝组织;第3组皮下注射0.1 mL CCl4/oil4,8 h后处死;第4组皮下注射0.1 mL CCl4/oil,每周2次,连续注射6周,停止用药后15 d处死;第56、组方法同第4组,停止注射CCl4后分别用Reversine 501、00mg/(kg.d)皮下注射15 d,15 d后进行免疫组织化学检测,对BRE、TNFR1和Beclin1 3种蛋白的表达进行分析。结果免疫组化结果发现BRE、TNFR1和Beclin1 3种蛋白在CCl4诱肝纤维化过程中的表达明显上升,而经过纤维化抑制剂Reversine的处理后3种蛋白的表达下降至正常小鼠肝的水平。结论 BRE、TNFR1和Beclin1 3种应激反应分子可能在肝纤维化与肝炎发病中起重要作用,它们有可能成为肝病诊断标志物和治疗肝脏疾病的重要靶点。

野生热带灵芝Ganoderma tropicum(Jungh.) Bres.菌种分离与驯化研究

以新鲜的野生热带灵芝子实体为材料,经过表面消毒后,分别接种到米饭培养基、CA培养基和PDA培养基上.结果表明,在这3种供试培养基上均能获得纯化的菌丝体.米饭培养基上的菌丝体的生长速度最快;其次为PDA培养基;CA培养基的菌丝体生长最慢.对子实体、担孢子和菌丝体的形态特征进行了系统的形态学观察,证实所分离和驯化的菌种为热带灵芝[Ganoderma tropicum(Jungh.) Bres.].用木屑作为主要原料制备培养料对热带灵芝进行了驯化栽培,实验结果表明,冬季较低温条件下形成的子实体多为鹿角状畸形芝;而在2月份中旬以后较高温度下形成的子实体多为正常的掌状子实体.笔者据此认为,在海口地区,热带灵芝宜在春末至秋末气温较高的季节栽培.

神经管过表达BRE基因促进体节形成和分化

目的探讨BRE基因对鸡胚胎早期体节发育的作用。方法显微注射法将含有BRE基因的质粒注射入HH10期鸡胚神经管,活体胚胎细胞电穿孔方法转染半侧神经管,以另一侧为正常对照侧,原位杂交及免疫荧光法观察过表达BRE基因后体节的发育。结果 BRE基因在鸡胚表达始于神经板,而后高表达在脑泡、神经管及体节。过表达BRE基因后,神经管形态及PAX7和FGF8表达与对照侧相比无明显异常,而实验侧体节PAX7标记发现生皮肌节较大,FGF8表达与对照侧相比无明显异常。结论过表达BRE基因对体节的形成和分化有促进作用,其机制可能与PAX7相关。

抗凋亡蛋白BRE和多功能受体ANX-Ⅱ在肝癌的高表达

目的研究抗凋亡蛋白BRE和多功能性受体annexinⅡ(ANX-Ⅱ)在人的正常肝组织、肝非肿瘤组织以及肝肿瘤组织中的表达情况。方法对5例正常肝组织、23例肝非肿瘤组织和56例肝肿瘤组织,使用免疫组化的方法检测BRE和ANX-Ⅱ抗体在肝组织中表达情况。结果 5例肝正常组织BRE和ANX-Ⅱ的表达为阴性,BRE的表达在肝非肿瘤组织中57%为弱阳性,43%为阳性;在肝肿瘤中,25%为弱阳性,64%为阳性,11%为强阳性。ANX-Ⅱ的表达在肝非肿瘤组织中,61%为弱阳性,35%为阳性,4%为阴性;在肝肿瘤中,21%为弱阳性,63%为阳性,16%为强阳性。结论 BRE在肝肿瘤中高表达是癌细胞抑制凋亡信号途径所产生的调节,ANX-Ⅱ的高表达是肝癌细胞入侵组织和转移的机制表现,因而BRE和ANX-Ⅱ不但可以成为新的肝肿瘤标志物,更有可能成为新的治疗靶点。

去泛素酶复合体Ubp3/Bre5的制备及与Cdc48作用（英文）

泛素化是一种存在于真核细胞中与生理功能密切相关的蛋白修饰,泛素化与去泛素化处于动态调节过程中.Ubp3是与人USP10同源的酵母去泛素化酶,结合辅引子Bre5在细胞内发挥广泛作用.为研究该复合体的工作机制,制备重组蛋白复合体,在大肠杆菌中成功表达并纯化重组Ubp3与Bre5单体及Ubp3/Bre5复合体,首次成功大规模制备重组Ubp3/Bre5复合体.通过一系列pulldown实验,检验Ubp3/Bre5与AAA家族中泛素选择性ATP酶Cdc48的相互作用模式,结果发现,Ubp3及Bre5无法单独与Cdc48结合,但Ubp3/Bre5复合体可以有效与Cdc48相互作用.提出了Ubp3/Bre5-Cdc48相互作用的新模式,制备了高质量重组Ubp3/Bre5复合体.该研究为通过生化及结构生物学进行分子机制探索奠定了基础.

lncRNA BRE-AS1调控Wnt/β-catenin信号通路影响宫颈癌SiHa细胞增殖、侵袭和凋亡的实验研究

目的:探讨lncRNA BRE-AS1对宫颈癌SiHa细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制。方法:采用实时荧光定量PCR检测人子宫颈上皮永生化细胞系H8和宫颈癌细胞系SiHa中lncRNA BRE-AS1的表达水平。将对数生长期的SiHa细胞分为未转染组(正常培养)、阴性对照组(转染空载体)和lncRNA BRE-AS1组(转染lncRNA BRE-AS1表达载体),采用实时荧光定量PCR检测各细胞中lncRNA BRE-AS1的表达水平,噻唑蓝法检测细胞增殖能力,平板克隆实验细胞克隆形成能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力,流式细胞仪检测细胞凋亡能力,免疫印迹法检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和c-Myc的表达。结果:与人子宫颈上皮永生化细胞系H8相比,宫颈癌细胞系SiHa中lncRNA BRE-AS1的表达水平明显降低(P<0.01)。与未转染组相比,lncRNA BRE-AS1组细胞中lncRNA BRE-AS1的表达水平和细胞凋亡率明显升高,且细胞增殖活力、克隆形成率、穿膜细胞数和细胞中β-catenin、c-Myc、Cyclin D1、MMP-2蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05);而阴性对照组和未转染组相比,上述指标均未见明显改变(P>0.05)。结论:lncRNA BRE-AS1可抑制宫颈癌SiHa细胞增殖、侵袭并促进其凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

BRE基因的研究进展

BRE基因是一种应激反应调节基因,其表达产物广泛分布于不同种属的各种生物以及生物体的多种器官中。它所编码的高度保守的蛋白产物,定位于细胞质与细胞核中,具有调控细胞周期、调节细胞凋亡的功能。因而BRE基因在细胞的生存、增殖、凋亡与分化过程中发挥极其重要的作用,可能与某些肿瘤的发生演进有关。

英国建筑研究院(BRE)开发防火门检查培训课程

英国建筑研究院(BRE)提供防火门检查课程培训(虚拟教室)。防火门检查员需要对自己的作用有充分而全面的认识,并对当前的标准有良好的认识,才能达到胜任的程度。英国建筑研究院与门五金联盟(DHF)联合开发了这一综合性和实践性培训课程,提供了在进行防火门检查时必须处理的重要细节。

人BRE1B基因对眼B16黑色素瘤细胞生长的影响

目的构建人BRE1B基因真核表达载体,并初步探讨该基因对眼B16黑色素瘤细胞生长的影响。方法将传代培养的眼B16黑色素瘤细胞随机分为实验组(转染p CMV-Tag-2B-BRE1B重组质粒)和对照组(转染p CMV质粒)。以乳腺癌文库为模板应用PCR技术扩增出人BRE1B基因的CDS编码区序列,构建p CMV-Tag-2B-BRE1B重组质粒,将p CMV-Tag-2B-BRE1B重组质粒和p CMV质粒瞬时转染眼B16黑色素瘤细胞后,应用Western blot法检测BRE1B蛋白的表达,应用CCK8法和克隆形成法检测该重组质粒对眼B16黑色素瘤细胞生长的影响。结果 PCR技术扩增出人BRE1B基因CDS编码区序列,且条带与预期大小一致;与对照组相比,菌液PCR鉴定结果为阳性,双酶切的条带长度分别为大约4000 bp和3050 bp,测序鉴定人BRE1B基因的编码序列与插入的DNA序列完全一致;Western blot结果表明p CMV-Tag-2B-BRE1B重组质粒在实验组眼B16黑色素瘤细胞成功表达,对照组则未检测到特异条带;CCK8法和克隆形成法结果表明p CMV-Tag-2B-BRE1B重组质粒能够抑制眼B16黑色素瘤细胞的生长。结论本研究成功构建了带有p CMV-Tag-2B标签的人BRE1B基因真核表达载体,并发现该基因抑制眼B16黑色素瘤细胞的生长。

BRE咨询香港的公寓情况

应香港住房司的要求,BRE(BuildingResearch Establishment)的结构鉴定部派出一个组对香港的六幢公寓大楼(见文中照片前景)进行了全面的评定。他们接受委托调查预制大板体系建筑的状况、耐久性和结构整体性,并预测其未来的使用性能,以便为拟订维修和改进工作的措施提供依据。其中的五幢大楼高为16层,它们相互连接起来,长度达100m;另一幢是7层的L形大楼。这些大楼都建于20年前,详细的图纸已无从查找。

AmE和BrE部分助动词用法比较

美国英语(American English, 下称AmE)和英国英语(British English, 下称BrE)是当今世界使用得最为广泛的两种英语变体。我国编写或引进的英语教材或读物,大都属于这两种变体之一。尽管同英语的其它变体一样,AmE和BrE包含着一个共同的内核,即有一套在所有英语变体中都存在的语法体系和其它特征;

广汽本田皓影(BREEZE)

广汽本田全新中级SUV皓影(BREEZE),于2019年11月29日带着令人惊喜的售价,正式宣告上市。作为"本色"的代表,全新皓影(BREEZE)的美是一种由内而外因为自信散发出的气质美,以SHARP x ELEGANT的都市锐雅设计,SPORT TURBO和SPORT HYBRID两种动力版本选择,搭载诸如Honda CONNECT 2.0智导互联系统、Honda SENSING安全超感系统等多项本田先进技术带来更有价值感的用车体验,成为兼具锐利sharp和优雅elegant的自我特征鲜明的SUV。

动静皆宜 玩转BREEZE ONE无线音箱

有朋友留言想我们推荐一款既能在家里听音乐,也适合拿到户外使用的蓝牙音箱,于是我们就找到这款来自德国品牌的蓝牙音箱——Quadral的BREEZE ONE。

BREITLING Chronomat机械计时 百年灵血脉中的传承

谈到计时表,我们一时间会联想到很多品牌,但是要是从他们之中找一个传承最久远的,我想,BREITLING百年灵一定会脱颖而出的。早在19世纪晚期,当闻名遐迩的制表师里昂·百年灵(Leon Breitling)准备在瑞士中部小镇圣伊米耶(St.lmier)开启其商业版图时,计时表似乎就是时代的大势所趋。