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Brevican基因敲除小鼠的制备
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作者 韩晞 董艳 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期818-821,共4页
目的制备brevican基因敲除小鼠。方法采用ET克隆方法,构建brevican打靶载体。线性化打靶载体,电转化胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES),将正确同源重组的ES细胞注射入囊胚腔,生育嵌合体,再交配繁育杂合子及纯合子。PCR法鉴定小鼠的基... 目的制备brevican基因敲除小鼠。方法采用ET克隆方法,构建brevican打靶载体。线性化打靶载体,电转化胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES),将正确同源重组的ES细胞注射入囊胚腔,生育嵌合体,再交配繁育杂合子及纯合子。PCR法鉴定小鼠的基因型。结果将PGK启动子指导的NEO表达框敲进Bcan第3外显子,敲除第3~8外显子序列,得到打靶载体,上游臂为2.4 kb,下游臂为4.8 kb。基因打靶后,得到双臂均发生正确同源重组的克隆数14个。利用阳性ES细胞克隆注射入囊胚,得到3只嵌合率大于50%的雄鼠,繁育得到6只Brevican-/-纯合子小鼠。结论利用同源重组方法,成功敲除干细胞靶基因,建立Brevican-/-建系小鼠。 展开更多
关键词 brevican 基因敲除小鼠 胚胎干细胞 同源重组
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BEHAB/brevican与神经胶质瘤侵袭性关系的研究进展
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作者 尹丽梅 竺可青 《现代实用医学》 2004年第3期169-171,共3页
关键词 BEHAB brevican 神经胶质瘤 肿瘤 中枢神经系统 瘤细胞
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Cloning of human brevican cDNA and expression of its mRNA in human glioma
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作者 韩晞 董艳 +2 位作者 由振东 何成 卢亦成 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 2003年第6期388-392,共5页
Objective: To clone the cDNA of human brevican secreting isoform and to investigate its mRNA expression in human glioma. Methods: The full-length cDNA of human brevican secreted isoform was cloned from a human anaplas... Objective: To clone the cDNA of human brevican secreting isoform and to investigate its mRNA expression in human glioma. Methods: The full-length cDNA of human brevican secreted isoform was cloned from a human anaplastic astrocytoma by RT-PCR, and the expression of human brevican mRNA in 22 cases of human glioma and 13 cases of non-glial brain tumors were investigated by in situ hybridization. Results: The cDNA which including the whole open reading frame of human brevican secreted isoform was obtained. In situ hybridization showed that brevican positive cells were present in all of the 22 cases of gliomas (100%), whereas none were found in the 13 cases of non-glial and metastasis brain tumors examined. Conclusion: The results suggest that brevican mRNA is highly and specifically expressed in human glioma. 展开更多
关键词 神经胶质瘤 MRNA CDNA 克隆 RT-PCR brevican 同步杂交技术
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Lesion-induced changes of brevican expression in the perineuronal net of the superior vestibular nucleus
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作者 Agnes Magyar Eva Racz +3 位作者 Clara Matesz Ervin Wolf Peter Kiss Botond Gaal 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2022年第3期649-654,共6页
Damage to the vestibular sense organs evokes static and dynamic deficits in the eye movements,posture and vegetative functions.After a shorter or longer period of time,the vestibular function is partially or completel... Damage to the vestibular sense organs evokes static and dynamic deficits in the eye movements,posture and vegetative functions.After a shorter or longer period of time,the vestibular function is partially or completely restored via a series of processes such as modification in the efficacy of synaptic inputs.As the plasticity of adult central nervous system is associated with the alteration of extracellular matrix,including its condensed form,the perineuronal net,we studied the changes of brevican expression in the perineuronal nets of the superior vestibular nucleus after unilateral labyrinth lesion.Our results demonstrated that the unilateral labyrinth lesion and subsequent compensation are accompanied by the changing of brevican staining pattern in the perineuronal nets of superior vestibular nucleus of the rat.The reduction of brevican in the perineuronal nets of superior vestibular nucleus may contribute to the vestibular plasticity by suspending the non-permissive role of brevican in the restoration of perineuronal net assembly.After a transitory decrease,the brevican expression restored to the control level parallel to the partial restoration of impaired vestibular function.The bilateral changing in the brevican expression supports the involvement of commissural vestibular fibers in the vestibular compensation.All experimental procedures were approved by the 'University of Debrecen–Committee of Animal Welfare'(approval No.6/2017/DEMAB) and the 'Scientific Ethics Committee of Animal Experimentation'(approval No.HB/06/éLB/2270-10/2017;approved on June 6,2017). 展开更多
关键词 BRAINSTEM brevican chondroitin sulfate proteoglycan extracellular matrix labyrinth lesion neural plasticity perineuronal net perisynaptic matrix vestibular compensation vestibular system
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Brevican在脑胶质瘤中表达上调的研究进展 被引量:1
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作者 赵鹏 刘方军 李新钢 《国外医学(神经病学.神经外科学分册)》 2004年第6期578-582,共5页
Brevican 是近年来新发现的中枢神经系统细胞外基质中的硫酸软骨素蛋白聚糖,其表达仅限于中枢神经系统。近年来的研究表明,Brevican 在正常成年动物及人脑中均有表达但其水平均较低,而在脑胶质瘤中具有相当高的表达并与其侵袭性有关... Brevican 是近年来新发现的中枢神经系统细胞外基质中的硫酸软骨素蛋白聚糖,其表达仅限于中枢神经系统。近年来的研究表明,Brevican 在正常成年动物及人脑中均有表达但其水平均较低,而在脑胶质瘤中具有相当高的表达并与其侵袭性有关,且在中枢神经系统其他肿瘤中均未发现其表达异常增高的现象。因此,研究其分子结构、在脑中的表达及在胶质瘤中的表达,能够为胶质瘤的诊断与治疗提供一条新途径。 展开更多
关键词 brevican 胶质瘤 表达 研究进展
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分泌型短蛋白聚糖髓芯蛋白的mRNA在大鼠垂体中的表达
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作者 韩晞 董艳 +2 位作者 薛亚军 蔡如珏 卢亦成 《中国神经科学杂志》 CSCD 2003年第4期251-254,共4页
目的 :研究分泌型短蛋白聚糖 (brevican)髓芯蛋白的mRNA在大鼠垂体组织中的表达。 方法 :采用RT PCR和原位杂交方法。结果 :RT PCR反应得到一段约 4 0 0bp的DNA片段 ;原位杂交结果显示 ,腺垂体和神经垂体均可见分泌型brevican髓芯蛋白m... 目的 :研究分泌型短蛋白聚糖 (brevican)髓芯蛋白的mRNA在大鼠垂体组织中的表达。 方法 :采用RT PCR和原位杂交方法。结果 :RT PCR反应得到一段约 4 0 0bp的DNA片段 ;原位杂交结果显示 ,腺垂体和神经垂体均可见分泌型brevican髓芯蛋白mRNA阳性细胞 ,胞质中可见杂交信号。腺垂体中分泌型brevican髓芯蛋白mRNA阳性细胞大小不一。 结论 :神经垂体和腺垂体均有分泌型brevican髓芯蛋白mRNA表达 ,brevican可能不是中枢神经系统特有的细胞外基质成分。 展开更多
关键词 分泌型短蛋白聚糖髓芯蛋白 MRNA 大鼠 垂体 原位杂交方法 RT-PCR
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细胞周期依赖激酶抑制剂Olomoucine对活化星形胶质细胞神经蛋白聚糖、短蛋白聚糖表达的抑制作用
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作者 易善清 侯超 +1 位作者 刘珍 武衡 《中风与神经疾病杂志》 北大核心 2017年第6期504-507,共4页
目的研究细胞周期依赖激酶抑制剂Olomoucine对星形胶质细胞活化后神经蛋白聚糖(Neurocan)、短蛋白聚糖(Brevican)表达的抑制作用。方法应用睫状神经营养因子(CNTF)刺激法建立体外培养星形胶质细胞的活化模型,实验分3组:对照组、活化组... 目的研究细胞周期依赖激酶抑制剂Olomoucine对星形胶质细胞活化后神经蛋白聚糖(Neurocan)、短蛋白聚糖(Brevican)表达的抑制作用。方法应用睫状神经营养因子(CNTF)刺激法建立体外培养星形胶质细胞的活化模型,实验分3组:对照组、活化组与抑制组。对照组:正常培养的星形胶质细胞;活化组:星形胶质细胞加入20 ng/ml睫状神经营养因子(CNTF)处理24 h;抑制组:星形胶质细胞用20 ng/ml睫状神经营养因子预处理24 h,加入100μmol/L Olomoucine。应用ELISA法检测不同时间点(12 h、24 h、48 h)各组细胞上清液中Neurocan、Brevican含量变化,半定量RT-PCR检测各组细胞GFAP mRNA及Neurocanm RNA、Brevican mRNA的表达变化。结果(1)活化组上清液中Neurocan、Brevican的含量在12 h、24 h、48 h随着时间的延长逐渐增加,与对照组比较差异有显著性(P<0.01);抑制组上清液中Neurocan、Brevican含量随着时间的延长较活化组明显降低,与对照组、活化组比较差异有显著性(P<0.01)。(2)活化组细胞GFAP mRNA、Neurocan mRNA、Brevican mRNA表达明显增加,与对照组比较差异有显著性(P<0.01);抑制组细胞GFAP mRNA、Neurocan mRNA、Brevican mRNA表达均明显下调,与活化组比较差异有显著性(P<0.01)。结论细胞周期依赖激酶抑制剂Olomoucine可抑制活化星形胶质细胞神经蛋白聚糖、短蛋白聚糖表达。 展开更多
关键词 星形胶质细胞 OLOMOUCINE 神经蛋白聚糖 短蛋白聚糖
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miR-34a-5p靶向BCAN对胶质瘤细胞增殖、迁移的影响 被引量:3
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作者 李华晓 麦浩坚 +3 位作者 宋同均 王士强 黎志迪 陈小凤 《临床神经外科杂志》 2022年第2期148-155,共8页
目的探究MicroRNA-34a-5p(miR-34a-5p)过表达对胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其与短蛋白聚糖(BCAN)的靶向关系。方法收集36例脑胶质瘤患者的脑胶质瘤组织和因脑外伤行内减压术的36例患者的正常脑组织。体外培养人胶质瘤细胞U373、... 目的探究MicroRNA-34a-5p(miR-34a-5p)过表达对胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其与短蛋白聚糖(BCAN)的靶向关系。方法收集36例脑胶质瘤患者的脑胶质瘤组织和因脑外伤行内减压术的36例患者的正常脑组织。体外培养人胶质瘤细胞U373、U251 MG、LN229、A172和人正常星形胶质细胞NHA,逆转录定量PCR(RT-qPCR)检测组织/细胞中miR-34a-5p、BCAN mRNA表达水平。取对数生长期的U251 MG细胞,分为对照组(NC组)、mimic-NC组(转染miR-34a-5p mimic阴性对照)、miR-34a-5p过表达组(转染miR-34a-5p mimic)、miR-34a-5p过表达+pc DNA3.1-NC组(miR-34a-5p mimic和pc DNA3.1-BCAN阴性对照空载体质粒共转染)、miR-34a-5p过表达+pc DNA3.1-BCAN组(miR-383-5p mimic和pc DNA3.1-BCAN共转染)。转染48 h后,收集各组细胞用RT-qPCR检测转染效率。MTT法检测细胞增殖活性;划痕实验和Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western Blot检测细胞中BCAN、G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测进一步验证miR-34a-5p与BCAN的靶向关系。结果胶质瘤组织中BCAN mRNA表达水平显著高于正常组织,而miR-34a-5p的表达水平显著低于正常组织,差异有统计学意义(均P<0.05);与人正常星形胶质细胞NHA相比,BCAN在人胶质瘤细胞中的表达显著升高(P<0.05),而miR-34a-5p呈低表达(P<0.05)。转染后,与NC组相比,miR-34a-5p过表达组细胞中miR-34a-5p水平显著升高(P<0.05),BCAN mRNA和蛋白水平、细胞增殖率、划痕愈合率、穿膜细胞数以及Cyclin D1、PCNA、MMP-2、MMP-9的表达均显著降低(均P<0.05);在过表达miR-34a-5p的基础上,上调BCAN的表达可显著减弱miR-34a-5p过表达对U251 MG细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测结果显示,miR-34a-5p的高表达可显著抑制BCAN-WT的荧光素酶活性(P<0.05)。结论miR-34a-5p是BCAN的上游调控因子,过表达miR-34a-5p可靶向下调BCAN的表达,进而抑制胶质瘤细胞的增殖和迁移侵袭。 展开更多
关键词 胶质瘤 短蛋白聚糖 MicroRNA-34a-5p 增殖 迁移 侵袭
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BCAN基因在肾透明细胞癌中的表达及临床意义 被引量:1
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作者 陈嘉炜 李琦 +2 位作者 殷海霞 孙景波 张辉见 《国际泌尿系统杂志》 2020年第1期21-26,共6页
目的以基因表达数据集资料为研究对象,分析BCAN基因在肾透明细胞癌中的表达情况以及对患者预后的影响。方法在Oncomine数据库中挖掘BCAN在肾透明细胞癌(ccRCC)中的表达情况。从TCGA数据库中获取ccRCC患者临床资料和目的基因的表达信息... 目的以基因表达数据集资料为研究对象,分析BCAN基因在肾透明细胞癌中的表达情况以及对患者预后的影响。方法在Oncomine数据库中挖掘BCAN在肾透明细胞癌(ccRCC)中的表达情况。从TCGA数据库中获取ccRCC患者临床资料和目的基因的表达信息并进行统计分析。利用GEO数据库中GSE73731数据集的ccRCC样本进行基因富集分析。利用String数据库分析与BCAN相关的蛋白。结果BCAN低表达组的ccRCC患者在病理分期及T分期方面低于高表达组(P<0.001;P=0.001);N分期及M分期差异无统计学意义(P>0.05)。BCAN低表达组患者的总生存期优于高表达组(P=0.033)。BCAN基因高表达组的样本主要富集在KRAS信号通路。结论BCAN可以通过多种途径来促进肿瘤细胞的侵袭能力,有望成为ccRCC不良预后的重要生物标志物之一。 展开更多
关键词 肾细胞 短蛋白聚糖
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