敲低核糖体发生蛋白BRIX1能够抑制三阴乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨核糖体生物发生蛋白BRX1同源物(BRIX1)在三阴乳腺癌(TNBC)中的功能。方法通过GEPIA2数据库分析BRIX1在正常组织和三阴乳腺癌的表达差异;设计两条siRNA并分别转入三阴乳腺癌细胞系HS578T和MDA⁃MB⁃231细胞内沉默BRIX1的表达,利用Western Blot验证BRIX1的敲低效率;使用CCK⁃8和集落克隆形成实验检测敲低BRIX1后细胞的增殖情况,使用Transwell实验检测敲低BRIX1后细胞的侵袭迁移能力;使用MDA⁃MB⁃231细胞,分为三组分别转入siNC、siBRIX1#1、siBRIX1#2后提取细胞的total RNA进行RNA⁃seq检测,进行基因表达差异分析。结果GEPIA2数据库结果显示三阴乳腺癌中高表达BRIX1(P<0.05),在HS578T和MDA⁃MB⁃231细胞内敲低,克隆形成数目减少(P<0.05);cck⁃8检测OD值减弱,证明敲低BRIX1后细胞增殖活性下降;TranswellTM实验显示敲低BRIX1后,乳腺癌侵袭迁移能力减弱;RNA⁃Seq数据进行GO功能富集分析生物学过程(BP),分子功能(MF),细胞组成(CC),最终展示了top10相关性较高的信号通路,结果显示敲低BRIX1后,ERBB⁃ERK信号通路和WNT信号通路被激活,P53信号通路被抑制。结论BRIX1基因敲低后明显抑制三阴乳腺癌细胞的增殖能力和迁移侵袭,提示BRIX1基因具有成为三阴乳腺癌治疗的潜在分子靶点。

敲低BRIX1对三阴型乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的通过体外细胞实验观察BRIX1基因对三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞MDA-MB-231的增殖与凋亡的影响。方法将MDA-MB-231细胞株分为实验组(shBRIX1组)及对照组(shCtrl组)。shBRIX1组采用构建敲低BRIX1基因表达的慢病毒载体转染MDA-MB-231细胞,以敲低BRIX1表达;shCtrl组采用慢病毒空载体转染MDA-MB-231细胞。应用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)及Western Blot方法检测两组的转染效率;采用Celigo细胞成像技术、噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验连续5 d检测两组细胞的增殖情况;采用细胞克隆实验检测细胞克隆形成数;采用流式细胞仪荧光分选(fluorescence activated cell sorting,FACS)技术和Caspase3/7活性检测比较两组细胞的凋亡能力。结果与shCtrl组细胞相比,敲低BRIX1表达的慢病毒载体转染MDA-MB-231细胞72 h后,RT-qPCR检测shBRIX1组中细胞的BRIX1基因表达水平明显下降(P<0.05);Western Blot检测shBRIX1组细胞中的BRIX1蛋白表达水平下降。敲低BRIX1后,Celigo、MTT及细胞克隆实验结果显示从第二天开始MDA-MB-231细胞增殖能力较shCtrl组明显下降(P<0.01);FACS实验及Caspase3/7活性检测结果显示敲低BRIX1组的MDA-MB-231凋亡细胞数量增加(P<0.05)。结论下调BRIX1能抑制三阴型乳腺癌细胞增殖,促进凋亡,为寻找TNBC治疗新靶点提供实验依据。