脂多糖对BRL大鼠肝细胞的损伤研究

目的研究脂多糖(LPS)对BRL大鼠肝细胞的损伤作用。方法体外培养BRL大鼠肝细胞,经不同浓度LPS处理细胞后,检测BRL大鼠肝细胞的增殖能力和凋亡率,以及谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性,肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素10(IL-10)细胞因子含量。结果脂多糖在一定程度上能抑制BRL大鼠肝细胞增殖,并且呈浓度依赖性,高浓度脂多糖(200mg/L)能够升高细胞培养上清液中AST、ALT活性,提高TNF-α含量及降低IL-10含量。结论高浓度脂多糖(200mg/L)能造成BRL大鼠肝细胞的损伤,损伤作用可能与打破促坏死因子与保肝因子之间的平衡有关。

咖啡酸对CCl_(4)诱导BRL大鼠肝细胞损伤的保护作用

采用体外四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl_(4))诱导BRL大鼠肝细胞损伤模型,研究咖啡酸(caffeic acid,CA)对CCl;诱导BRL大鼠肝细胞损伤的保护作用。实验分为对照组、CCl;模型组(100 mmol/L CCl_(4)损伤3 h)和CA干预组(含0.2、0.4和0.8 mg/mL CA的DMEM溶液预处理4 h,再行CCl_(4)暴露3 h),采用全自动生化分析仪检测天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力,试剂盒测定胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)、细胞质中细胞色素C(cytochrome C,Cyt c)和8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHdG)水平,qRT-PCR检测核因子E2相关因子2(nuclearfactor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)、谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GSR)、醌氧化还原酶1(quinine oxidoreductase,NQO1)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的表达水平。结果显示,CA对CCl_(4)所致细胞培养液中AST、ALT和LDH活力以及胞内ROS、细胞质中Cyt c和8-OHdG水平的异常升高均具有显著的抑制作用(P<0.05);与对照组相比,模型组细胞中Nrf2、GSR、NQO1和SOD基因的mRNA表达水平无显著差异(P>0.05),而CA干预组中各检测基因的mRNA表达水平显著升高(P<0.05),且具有剂量依赖效应。结果表明,CCl_(4)暴露可使BRL大鼠肝细胞发生氧化应激,而CA可激活Nrf2/ARE信号通路、上调抗氧化基因的mRNA水平,从而有效抑制CCl_(4)对肝细胞的损伤。

鲑鱼皮明胶水解物的抗氧化活性及其对细胞氧化损伤的保护作用

采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶水解鲑鱼皮明胶,得到水解度为4.7%到13.5%的7个明胶水解物,分别评价明胶水解物对自由基的清除能力。明胶水解物(0.5、1、2mg/mL)预先作用BRL大鼠肝细胞2h后,通过H2O2(5mmol/L)诱导氧化损伤,分别测定细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)等细胞内抗氧化产物的含量变化。结果表明,明胶水解物的抗氧化活性随着水解度的增大呈增强趋势。明胶水解物对细胞具有保护作用,可显著提高细胞存活率,降低LDH渗出量和MDA生成量,且存在一定的剂量关系,但细胞中GSH含量变化不显著;7个明胶水解物对H2O2诱导肝细胞损伤保护时,细胞存活率与水解物的体外抗氧化活性大小显著正相关,而LDH渗出量和MDA生成量与水解物的体外抗氧化活性大小负相关。