加味小柴胡汤对顺铂诱导的BRL细胞相关凋亡蛋白表达的影响

目的:探讨加味小柴胡汤对顺铂诱导的大鼠肝BRL细胞凋亡蛋白表达的调控作用。方法:将培养的BRL细胞分为空白组、顺铂组、实验1组(加味小柴胡汤大剂量)、实验2组(小剂量)4组。采用MTT、TUNEL、DNA琼脂糖凝胶电泳、免疫组化、完整细胞蛋白质斑点印迹等方法,检测各组细胞存活率、凋亡率及细胞相关凋亡蛋白的变化。结果:顺铂组细胞凋亡率比空白组明显升高,Rb、p21、Caspase-3、Bax、wp53蛋白表达上调;存活率显著降低,Bcl-2、mp53表达下调;实验1组、2组凋亡率明显较顺铂组降低,存活率升高,其他各指标皆与顺铂组有明显差异,1组作用更明显。结论:加味小柴胡汤可使顺铂诱导的BRL细胞存活率升高,凋亡率降低,对顺铂诱导BRL细胞凋亡蛋白的异常表达有调控作用。

加味小柴胡汤对顺铂诱导BRL细胞核转录因子和热休克蛋白70表达的影响

目的观察加味小柴胡汤对顺铂诱导的大鼠肝BRL细胞核转录因子-kB(NF-kB)、热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法将BRL细胞分为4组:空白组、顺铂组及加味小柴胡汤大、小剂量组。采用完整细胞蛋白质斑点印迹、免疫组织化学等方法,检测各组细胞NF-kB、HSP70变化。结果顺铂组NF-kB表达明显较空白组升高,HSP70表达降低,组间比较差异有统计学意义;加味小柴胡汤大、小剂量组NF-kB明显较顺铂组低,差异有统计学意义;加味小柴胡汤大、小剂量组HSP70表达均升高,但仅加味小柴胡汤大剂量组差异明显。结论加味小柴胡汤可下调顺铂诱导的BRL细胞NF-kB表达,上调HSP70表达,此作用可能是该方减轻细胞氧化损伤、抑制细胞凋亡重要机理之一。

N-acetylserotonin对H_2O_2诱导大鼠肝BRL细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨N-acetylserotonin(NAS)对H2O2诱导正常大鼠肝BRL细胞氧化损伤的保护作用。方法:选择正常大鼠肝细胞株BRL,采用H2O2诱导法制备BRL细胞氧化应激损伤模型,HE染色和台盼蓝染色观察细胞形态及细胞存活率的变化;比色法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的变化。结果:对照组BRL细胞贴壁生长良好,排列紧密,胞膜完整,细胞界限清晰。H2O2诱导后细胞膜皱缩,形态不规则,细胞界限模糊,贴壁能力下降,出现大片细胞缺失;细胞存活率下降;SOD活性降低,而MDA含量升高。NAS可明显改善H2O2引起的细胞形态变化,使细胞存活率升高,增加SOD活性并降低MDA含量。结论:NAS可通过增强抗氧化系统的激活、减轻抗氧化系统受抑制的程度,发挥对H2O2诱导的BRL细胞氧化损伤的保护作用。

载BRL细胞聚鸟氨酸微胶囊的制备与功能

为了研究新型膜材聚鸟氨酸对微囊化细胞功能的影响,制备了包埋有BRL细胞的聚鸟氨酸-海藻酸盐微胶囊并考察了微囊化肝细胞的生物学活性以及细胞功能。结果表明,载BRL细胞的PLO微胶囊形态完整,表面光滑,细胞在PLO微胶囊内的三维立体环境中能够维持活性,且具有维持分泌尿素和蛋白质的功能,从而为该新型膜材在细胞微囊化的应用方面提供了实验依据。

芒果苷对H_2O_2诱导的BRL细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨芒果苷对过氧化氢诱导的正常大鼠肝BRL细胞氧化损伤的保护作用。方法选取正常大鼠肝细胞株BRL,通过过氧化氢诱导法制备细胞氧化损伤模型,实验设对照组、H_2O_2组、芒果苷组。HE染色、台盼蓝染色观察细胞形态变化和存活率变化;比色法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量;Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达变化。结果对照组BRL细胞贴壁生长良好,排列紧密。H_2O_2诱导后细胞形态不规则,胞膜皱缩,贴壁能力下降;细胞存活率降低;抗氧化酶SOD、GSH-Px活性降低,MDA含量升高(P<0.05);Bax和Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。与H_2O_2组相比,芒果苷可显著改善H_2O_2引起的细胞形态变化,提高细胞存活率;提高SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量(P<0.05);抑制Bax和Caspase-3蛋白表达(P<0.05),上调Bcl-2蛋白表达(P<0.05)。结论芒果苷对BRL细胞氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与其提高细胞清除氧自由基能力和抑制细胞凋亡有关。

加味小柴胡汤对顺铂诱导大鼠肝BRL细胞过氧化损伤的保护作用

目的:探讨加味小柴胡汤对顺铂诱导大鼠肝BRL细胞氧化损伤的保护作用。方法:采用体外细胞培养方法,观察加味小柴胡汤对顺铂诱导的BRL细胞生长、SOD、GSH-px、NOS活性、MDA、GSH、T-AOC含量的影响。结果:顺铂各剂量处理细胞OD值皆显著下降,且随剂量而加重;加味小柴胡汤大小剂量细胞OD值皆明显升高;顺铂组SOD、GSH-px、T-AOC活性、GSH含量均明显降低;MDA含量及NOS活性明显升高;两实验组SOD、GSH-px、T-AOC及GSH均较顺铂组升高,MDA及NOS降低,而以1组效果更显著。结论:顺铂可明显抑制肝细胞生长,诱致细胞过氧化损伤,加味小柴胡汤可提高细胞生长率,其作用与其明显的抗氧化能力有关,且有一定的量效关系。

lncRNA NONRATT021477.2对氧化应激条件下BRL细胞增殖和凋亡的影响

以H_(2)O_(2)诱导BRL细胞建立氧化应激型模,通过ROS和MDA试剂盒检测氧化应激的发生状态。过表达和干扰表达lncRNA 77.2后,通过流式细胞术检测细胞凋亡,CCK-8法检测细胞增殖情况。结果显示,过表达lncRNA77.2后,BRL细胞内ROS和MDA含量均极显著下降(P<0.01),细胞增殖能力增强(P<0.01),细胞凋亡率下降(P<0.01);而干扰表达lncRNA77.2后,细胞内ROS显著升高(P<0.05),MDA含量极显著升高(P<0.01),细胞增殖能力下降(P<0.01),细胞凋亡率上升(P<0.01)。结果表明,lncRNA 77.2可作为抗氧化调控因子通过抑制凋亡和氧化损伤对大鼠肝细胞起到一定的保护作用。

过氧化氢诱导BRL细胞凋亡损伤模型的建立

动物冷应激过程中肝脏因发生氧化应激而受损。本试验采用过氧化氢(H2O2)诱导buffalo大鼠肝细胞(BRL)凋亡,建立体外氧化应激的凋亡损伤模型,为深入研究冷应激对肝脏损伤的机理奠定基础。试验采用不同浓度H2O2刺激BRL细胞2h,运用WST-1法检测细胞生长活力、Annexin-V/FITC-PI双染技术检测细胞凋亡率及Western blot方法检测Caspase-3的表达量来筛选BRL细胞凋亡的H2O2作用浓度。结果显示,与空白对照组相比,150μmol/L H2O2作用后,细胞增殖率明显下降,Caspase-3的蛋白表达量增加,流式细胞仪检测的凋亡率升高,同时细胞坏死较其他H2O2处理组低。结果表明,150μmol/L H2O2作用BRL细胞2h可模拟氧化应激造成的凋亡损伤。

分泌型rIL-10基因在正常大鼠肝细胞系BRL中的稳定表达

目的:建立稳定表达分泌型大鼠白细胞介素10(rIL-10)基因的正常大鼠肝细胞系(BRL细胞),为研究IL-10抗纤维化的基因治疗打下基础。方法:通过RT-巢式PCR技术从大鼠外周血单核细胞(PBMC)中扩增出rIL-10全长基因,克隆入pcDNA3真核表达载体构建重组表达载体pcDNA3-rIL-10。鉴定正确后,用受体介导的脂质体转染试剂将pcDNA3-rIL-10转染BRL细胞,高浓度G418筛选,RT-PCR及ELISA法证实rIL-10在BRL细胞中的稳定表达。结果:构建的真核表达载体pcDNA3-rIL-10经质粒双酶切及测序鉴定证实载体构建的正确性。RT-PCR及ELISA法检测出经G418筛选的BRL细胞稳定表达IL-10。结论:成功构建分泌型pcDNA3-rIL-10真核表达质粒及筛选出稳定表达分泌型rIL-10的BRL细胞株,为进一步研究IL-10抗纤维化的基因治疗打下基础。

热休克蛋白70过表达对过氧化氢诱导BRL细胞caspase 3表达的影响

目的探讨热休克蛋白（heat shock protein,Hsp）70过表达对过氧化氢（hydrogen peroxide,H_2O_2）诱导Buffalo大鼠肝细胞（BRL细胞）cleaved caspase 3表达的影响。方法将BRL细胞分为6组：空白对照组、Ad-CMV-Null组、Ad-CMV-Hsp70组、H_2O_2组、Ad-CMV-Null＋H_2O_2组和Ad-CMV-Hsp70＋H_2O_2组,Ad-CMV-Null、Ad-CMV-Hsp70、AdCMV-Null＋H_2O_2、Ad-CMV-Hsp70＋H_2O_2组分别加入1×10~7 PFU/ml的Ad-CMV-Null或Ad-CMV-Hsp70培养48 h后,H_2O_2、Ad-CMV-Null＋H_2O_2和Ad-CMV-Hsp70＋H_2O_2组分别加入150μmol/L H_2O_2处理2 h,空白对照、Ad-CMVNull和Ad-CMV-Hsp70组分别加入培养液培养。分别采用实时荧光定量PCR检测细胞中Hsp70基因mRNA的转录水平,Western blot法检测细胞中Hsp70及cleaved caspase 3蛋白的表达水平。结果与H_2O_2组相比,Ad-CMVHsp70＋H_2O_2组细胞中Hsp70基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平均显著升高（P〈0.01）,cleaved caspase 3蛋白表达水平显著下降（P〈0.01）。结论Hsp70可抑制caspase 3的激活最终保护BRL细胞,减少凋亡损伤。

胱硫醚β-合酶/胱硫醚γ-裂解酶-硫化氢体系小干扰RNA对大鼠正常肝细胞株BRL凋亡的影响

目的：探讨内源性胱硫醚β-合酶（CBS）/胱硫醚γ-裂解酶（CSE）-硫化氢（H2S）体系在生理状态肝细胞凋亡中的作用及其机制。方法培养大鼠正常肝细胞株BRL。小干扰RNA（siRNA）序列筛选：设阴性siRNA序列转染组（对照组）、CBS siRNA序列转染组（CBS 1~3序列组）和CSE siRNA序列转染组（CSE 1~3序列组），转染24、48 h；siRNA转染后检测细胞凋亡：设阴性对照组、溶剂对照组、CBS siRNA组、CSE siRNA组、（CBS＋CSE）siRNA组，作用时间为转染后0、4、8、12、24 h；凋亡机制探讨：设阴性对照组、CBS siRNA组、CSE siRNA组、（CBS＋CSE）siRNA组，作用时间为转染后4、8、12、24 h；每组均4个平行样。RT-PCR、Western blot检测BRL细胞中CBS、CSE mRNA和蛋白的表达，siRNA基因静默CBS、CSE，去蛋白法检测H2S生成，Hoechst荧光染色、流式细胞术检测BRL细胞凋亡，荧光染色检测线粒体膜电位（MMP）变化，Western blot 检测胞浆内细胞色素 C（Cyt C）和激活型 caspase 3（cleaved-caspase 3）蛋白表达变化。结果 BRL细胞株存在CBS、CSE表达。CBS/CSE siRNA转染后，细胞内源性H2S生成降低，凋亡细胞数量和细胞凋亡率随时间延长而逐渐增加，BRL细胞上清乳酸脱氢酶（LDH）活性均未见明显变化，MMP下降，胞浆内Cyt C蛋白表达上调，cleaved-caspase3蛋白表达上调。结论抑制内源性H2S体系可引起生理状态肝细胞凋亡，机制可能部分涉及凋亡线粒体途径。

脂多糖对BRL大鼠肝细胞的损伤研究

目的研究脂多糖(LPS)对BRL大鼠肝细胞的损伤作用。方法体外培养BRL大鼠肝细胞,经不同浓度LPS处理细胞后,检测BRL大鼠肝细胞的增殖能力和凋亡率,以及谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性,肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素10(IL-10)细胞因子含量。结果脂多糖在一定程度上能抑制BRL大鼠肝细胞增殖,并且呈浓度依赖性,高浓度脂多糖(200mg/L)能够升高细胞培养上清液中AST、ALT活性,提高TNF-α含量及降低IL-10含量。结论高浓度脂多糖(200mg/L)能造成BRL大鼠肝细胞的损伤,损伤作用可能与打破促坏死因子与保肝因子之间的平衡有关。

苜蓿皂苷提取物对BRL细胞Ldlr、LXRα和FXR mRNA表达的影响（英文）

目的:分析苜蓿皂苷提取物对正常和脂变Buffalo大鼠肝细胞(BRL细胞)中Ldlr、LXRα和FXR m RNA表达的影响,进而初步探讨苜蓿皂苷调节脂质代谢及降低机体胆固醇含量的机制。创新点:苜蓿皂苷具有调节脂质代谢,降低机体胆固醇含量的作用,但是目前对其机理研究并不多,特别是在细胞水平上。本试验以BRL细胞为对象,研究苜蓿皂苷对胆固醇代谢相关基因表达的影响,从而探究苜蓿皂苷在细胞水平上对胆固醇代谢的调节作用。方法:通过50%胎牛血清诱导BRL细胞48 h建立细胞脂肪变性模型,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)检测正常和脂变BRL细胞Ldlr、LXRα和FXR m RNA的表达,从而得出各处理组BRL细胞内Ldlr、LXRα和FXR m RNA表达的变化。结论:(1)添加苜蓿皂苷后,正常BRL细胞中Ldlr m RNA的表达量显著上调,脂变BRL细胞Ldlr m RNA的表达有增加的趋势;(2)苜蓿皂苷可以显著下调正常和脂变BRL细胞中LXRα和FXR m RNA的表达。因此,在细胞水平上,苜蓿皂苷可能通过促进Ldlr的表达,抑制LXRα和FXR的表达,从而调节BRL细胞胆固醇的代谢。

咖啡酸对CCl_(4)诱导BRL大鼠肝细胞损伤的保护作用

采用体外四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl_(4))诱导BRL大鼠肝细胞损伤模型,研究咖啡酸(caffeic acid,CA)对CCl;诱导BRL大鼠肝细胞损伤的保护作用。实验分为对照组、CCl;模型组(100 mmol/L CCl_(4)损伤3 h)和CA干预组(含0.2、0.4和0.8 mg/mL CA的DMEM溶液预处理4 h,再行CCl_(4)暴露3 h),采用全自动生化分析仪检测天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力,试剂盒测定胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)、细胞质中细胞色素C(cytochrome C,Cyt c)和8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHdG)水平,qRT-PCR检测核因子E2相关因子2(nuclearfactor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)、谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GSR)、醌氧化还原酶1(quinine oxidoreductase,NQO1)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的表达水平。结果显示,CA对CCl_(4)所致细胞培养液中AST、ALT和LDH活力以及胞内ROS、细胞质中Cyt c和8-OHdG水平的异常升高均具有显著的抑制作用(P<0.05);与对照组相比,模型组细胞中Nrf2、GSR、NQO1和SOD基因的mRNA表达水平无显著差异(P>0.05),而CA干预组中各检测基因的mRNA表达水平显著升高(P<0.05),且具有剂量依赖效应。结果表明,CCl_(4)暴露可使BRL大鼠肝细胞发生氧化应激,而CA可激活Nrf2/ARE信号通路、上调抗氧化基因的mRNA水平,从而有效抑制CCl_(4)对肝细胞的损伤。

携带rIL-10基因的大鼠肝细胞及肝星状细胞对TGF-β1表达的影响

目的:观察携带大鼠白介素10(rIL-10)基因的正常大鼠肝细胞(BRL)及大鼠肝星状细胞(HSC-T6)是否可通过旁分泌作用或自分泌作用减少肝星状细胞分泌转化生长因子β1(TGF-β1),进一步探讨rIL-10抗纤维化的作用机制。方法:IL-10基因通过尾静脉高压注射干预猪血清诱导肝纤维化大鼠,造模结束时收集各实验组大鼠血浆;通过半乳糖受体介导的脂质体转染试剂及阳离子脂质体转染试剂将携带rIL-10基因的pCDNA3-rIL-10质粒与pCDNA3空质粒转染大鼠BRL细胞及HSC-T6细胞,收集转染后24及48小时细胞培养上清;另将携带pCDNA3-rIL-10质粒与pCDNA3空质粒的大鼠BRL细胞与HSC-T6细胞共培养,收集共培养24及48小时后细胞培养上清液;ELISA法检测各实验组细胞培养上清液中TGF-β1的表达。结果:rIL-10基因干预后的肝纤维化大鼠血浆中TGF-β1表达下降,携带rIL-10基因的BRL细胞及HSC-T6细胞可表达高浓度细胞因子rIL-10,HSC-T6分泌的rIL-10能减少自身表达TGF-β1水平,BRL细胞表达rIL-10通过旁分泌作用可抑制与之共培养HSC-T6上清中TGF-β1的表达。结论:rIL-10基因可通过旁分泌或自分泌作用抑制肝星状细胞分泌转化生长因子β1,进一步阐明rIL-10基因的抗纤维化作用机理。

铜对大鼠肝细胞凋亡的影响以及姜黄素的保护作用

目的探讨铜对大鼠肝细胞(BRL细胞)凋亡的诱导作用及其机制,研究姜黄素对BRL细胞铜损伤时的影响。方法对硫酸铜(CuSO4)和姜黄素干预培养的BRL细胞,采用荧光探针DCFH-DA进行活性氧(ROS)测定,MTT法检测细胞活力,Hoechst染色和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡。Western blot法检测磷酸化应激激活的蛋白激酶(JNK/SAPK)蛋白水平。结果铜处理后6h BRL细胞ROS和凋亡率达到高峰,分别为711.70±68.33,(45.08±1.87)%,铜处理后24hJNK磷酸化率上升至(63.36±2.24)%,与正常对照组相比差异有显著性(P<0.01);姜黄素组ROS、凋亡百分率和JNK磷酸化率均较相应对照组下降(P<0.01)。结论一定浓度的铜可以诱导BRL细胞的凋亡且与活性氧的产生有关;姜黄素对铜损伤BRL的保护作用与抗氧化和抑制磷酸化JNK的表达有关。

MAPKs抑制剂对大鼠肝细胞GSH代谢相关酶的影响

目的:观察丝裂原活化的蛋白激酶(MAPKs)抑制剂对大鼠肝细胞谷胱甘肽(GSH)代谢的影响,确定哪条途径与GSH代谢相关。方法:体外培养BRL大鼠肝细胞,以c-Jun NH2-末端激酶(JNK)途径抑制剂SP600125、p38途径抑制剂SB203580、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)途径抑制剂PD98659处理24 h,采用MTT法测定细胞活力,高效液相色谱法测定细胞内GSH含量,Luminex法测定JNK和磷酸化JNK(p-JNK)的蛋白表达,采用试剂盒测定GSH代谢酶活性。结果:SP600125浓度>5μmol/L,SB203580浓度>20μmol/L,PD98659浓度>40μmol/L时,细胞活力受抑制;SP600125能显著减少大鼠肝细胞内还原型GSH的含量,SB203580和PD98659作用不明显;SP600125显著减少磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达,显著增强谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力。结论:JNK MAPK途径参与了大鼠肝细胞GSH的代谢。

C-sis基因对过氧化氢诱导大鼠肝细胞凋亡的抑制作用

目的探讨大鼠C-sis基因对过氧化氢(H_2O_2)诱导肝细胞凋亡的影响。方法使用脂质体转染法把重组质粒pc DNA3.1/C-sis和空载质粒pc DNA3.1转染进入正常大鼠肝细胞株BRL细胞,转染后的6~8 h用浓度为200μmol/L的H_2O_2处理细胞,作用48 h后收获细胞。细胞分为正常对照组、空载质粒组、C-sis质粒组、H_2O_2组、空载质粒+H_2O_2组、C-sis质粒+H_2O_2组。利用荧光定量PCR检测C-sis的m RNA表达;利用Western blot检测C-sis的蛋白表达和Caspase3活性;利用CCK8检测细胞活力;利用TUNEL检测细胞凋亡;利用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果与正常对照组和空载质粒组相比,C-sis质粒组的C-sis m RNA和蛋白表达水平显著升高(P均<0.01)。与正常对照组相比,H_2O_2组的细胞活力明显下降(P<0.01),激活型Caspase3蛋白明显升高(P<0.01);与空载质粒+H_2O_2组相比,C-sis质粒+H_2O_2组的细胞活力升高(P<0.01),激活型Caspase3蛋白降低(P<0.05)。TUNEL结果显示,与正常对照组相比,H_2O_2组的细胞凋亡明显升高(P<0.01);与空载质粒+H_2O_2组相比,C-sis质粒+H_2O_2组的细胞凋亡明显降低(P<0.01)。流式细胞术结果显示,与正常对照组相比,H_2O_2组的细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与空载质粒+H_2O_2组相比,C-sis质粒+H_2O_2组的细胞凋亡明显降低(P<0.01)。各组之间的细胞周期没有明显区别(P>0.05)。结论 C-sis基因能抑制H_2O_2诱导的肝细胞凋亡,并促进其生长。

苜蓿皂苷对大鼠肝脏及肝脏细胞低密度脂蛋白受体、三磷酸腺苷结合盒转运体mRNA表达的影响

本试验旨在研究苜蓿皂苷对大鼠肝脏及大鼠肝脏细胞(BRL细胞)胆固醇清除和转运途径中关键基因低密度脂蛋白受体(LDLR)、三磷酸腺苷结合盒转运体G5(ABCG5)、三磷酸腺苷结合盒转运体G8(ABCG8)mRNA表达量的影响,从个体和细胞水平初步探讨苜蓿皂苷调控胆固醇清除和转运的分子机制。采用高脂饲粮建立大鼠高脂模型,测定苜蓿皂苷对正常、高脂大鼠血清指标[总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量]和肝脏LDLR、ABCG5、ABCG8 mRNA表达量的影响;采用高糖DMEM培养液建立BRL细胞脂变模型,测定苜蓿皂苷浓度对BRL细胞活性的影响,测定苜蓿皂苷对正常、脂变细胞LDLR、ABCG5、ABCG8 mRNA表达量的影响。结果表明:1)苜蓿皂苷显著降低高脂大鼠血清中TG、TC和LDL-C的含量(P<0.05);2)苜蓿皂苷显著上调正常大鼠肝脏LDLR、ABCG5、ABCG8及高脂大鼠ABCG5、ABCG8 mRNA表达量(P<0.05);3)添加200、250μg/m L苜蓿皂苷显著提高了BRL细胞的活性(P<0.05);4)苜蓿皂苷显著上调正常BRL细胞LDLR、ABCG5、ABCG8 mRNA表达量(P<0.05),而对脂变BRL细胞各基因mRNA表达量无显著影响(P>0.05)。结果提示,苜蓿皂苷可通过调控LDLR、ABCG5、ABCG8 mRNA的表达来增加肝细胞内胆固醇的清除和转运,从而降低机体胆固醇的含量。

胱硫醚γ-裂解酶产生的内源性硫化氢对脂多糖诱导大鼠肝细胞凋亡的调节作用

目的探讨内源性胱硫醚γ-裂解酶（CSE）/硫化氢（H2S）体系在脂多糖（LPS）诱导的肝细胞凋亡中的调节作用。方法培养大鼠正常肝细胞系BRL。实验随机分组为溶剂对照组、siRNA阴性对照组、CSEsiRNA组、LPS组、CSEsiRNA＋LPS组。设立时间点为0h、4h、12h、24h；每组4个平行样。通过LPS孵育大鼠肝细胞系BRL不同时间，造成细胞损伤模型，以培养液上清中LDH活性反映细胞损伤程度。通过RT—PCR与Westernblot检测CSE基因、蛋白表达，用去蛋白法检测H2S生成情况；应用RNAi干扰技术，成功转染CSEsiRNA于肝细胞中，降低LPS引起的内源性H2S生成增多。通过荧光染色法检测BRL细胞线粒体膜电位（MMP）变化，通过Westernblot检测胞浆细胞色素c蛋白表达变化，应用流式细胞术检测BRL细胞凋亡率变化情况。结果LPS可显著提高CSE基因、蛋白的表达，并使H2S生成增多。同时也可使MMP降低并导致细胞凋亡率的增加。通过RNAi干扰技术，成功转染CSEsiRNA于肝细胞系BRL中，降低LPS引起的内源性H2S生成增多。与LPS单独作用BRL细胞相比，LPS作用转染后BRL细胞可导致MMP在短时间点降低，而在长时间点出现逐渐增加趋势；相应的细胞凋亡率则出现相反的趋势。结论在LPS诱导的细胞凋亡过程中，内源性CSE／H2S体系表现为早期抑制凋亡，晚期促进凋亡的特点。