山楂黄酮对BRL-3A肝细胞DNA损伤的修复作用及其机制

目的:探讨山楂黄酮对BRL-3A肝细胞DNA损伤的影响及其机制。方法:MTT法检测不同浓度的山楂黄酮对乙醇损伤肝细胞的影响;单细胞凝胶电泳分析细胞DNA的损伤程度并计算Olive尾距;试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等生理生化指标;实时定量PCR检测基因SOD的表达变化。结果:0.2,0.4和0.8 mg/mL的山楂黄酮能够显著修复乙醇诱导BRL-3A肝细胞的DNA损伤,这种修复作用与细胞抗氧化指标SOD、MDA和GSH-Px的改善密切相关。结论:山楂黄酮能够通过抗氧化修复肝细胞的DNA损伤,山楂黄酮具备潜在的肝损伤治疗价值。

流体切应力促永生化大鼠BRL-3A肝细胞增殖的研究

目的观察不同大小流体切应力对永生化大鼠BRL-3A肝细胞株增殖动力学的影响。方法构建流体切应力加载细胞培养装置，以永生化大鼠BRL-3A肝细胞株为研究对象，实验分为未添加肝细胞生长因子（HGF）的A组和添加HGF的B组，各组加载0、12、24dyn／cm^2大小的流体切应力，采用直接细胞计数和分光光度计测定细胞计数试剂盒（CCK-8）的方法检测12、24、48、168h细胞增殖动力学的变化。结果未加载流体切应力时，B组细胞增殖优于A组；加载流体切应力越大，A组和B组细胞均增殖更明显；在同一时间点加载同样大小切应力时，B组细胞增殖由于A组（P〈0．05）。加载大小为24dyn／cm^2的切应力培养细胞24h，A和B组的细胞计数和CCK-8分光光度计吸光度（A）值均达到最高值，细胞计数分别为A组（10．73±2．54）×10^6个和B组（15．93±2．00）×10^6个（P〈0．05），CCK-8分光光度计A值分别为A组（2．04±0．51）和B组（3．09±0．40，P〈0．05）；24—72h逐渐下降，但仍高于未加载应力组（P〈0．05），168h则接近或略高于未加载应力组。结论流体切应力对永生化大鼠BRL-3A肝细胞株增殖有促进作用，而且，理化因素（流体切应力联合HGF）共同作用下肝细胞增殖更明显。

MiR-199a-3p对大鼠肝细胞增殖的抑制作用

目的探讨miR-199a-3p对体外培养SD大鼠BRL-3A增殖的影响.方法人工合成miR-199a-3p模拟物、miR-199a-3p阻遏物及其各自阴性对照载体,分别转染BRL-3A肝细胞,转染后12 h、24 h、48 h和72h,应用定量PCR分析细胞中Cyclin D1和PCNA mRNA表达水平,免疫组化方法观测Cyclin D1和PCNA阳性细胞比率,流式细胞仪检测细胞各周期比例和CCK 8法检测细胞增殖.实验分4组:mimics组,mi-nc组,inhibitors组和in-nc组.结果转染后24 h、48 h、72 h,inhibitors组肝细胞Cyclin D1和PCNA mRNA表达水平较in-nc组显著增多(P<0.05),而mimics组肝细胞Cyclin D1和PCNA mRNA表达水平较mi-nc组显著降低(P<0.05).inhibitors组肝细胞Cyclin D1和PCNA阳性细胞比率均高于mi-nc组(P<0.05),而mimics组肝细胞Cyclin D1和PCNA阳性细胞比率均低于mi-nc组(P<0.05).inhibitorss组肝细胞G0/G1期细胞比例明显低于in-nc组(P<0.05),而mimics组肝细胞G0/G1期细胞比例明显高于mi-nc组(P<0.05).同时,inhibitors组肝细胞S期细胞比例明显低于mi-nc组(P<0.05)和in-nc组(P<0.05).inhibitors组肝细胞增殖能力明显高于in-nc组(P<0.05),mimics组肝细胞增殖能力明显低于mi-nc组(P<0.05).结论 miR-199a-3p能够延长大鼠BRL-3A肝细胞周期和抑制肝细胞增殖,其作用可能与抑制Cyclin D1和PCNA的表达有关.

NM23B对大鼠肝细胞体外增殖的影响

目的观察NM23B在体外培养大鼠肝细胞增殖中的作用。方法构建NM23B过表达载体和干扰载体及其阴性对照载体,分别转染SD大鼠BRL-3A肝细胞,并设空白对照组(CON)、干扰NC组(siRNA-NC)、干扰组(siRNA)、过表达组(OE)、过表达NC组(OE-NC),通过定量PCR分析各组细胞中Cyclin D1、NM23B和PCNA的mRNA变化;Western印迹分析比较各组细胞中Cyclin D1、NM23B和PCNA蛋白的变化;流式细胞仪检测各组细胞周期比例;用CCK 8法检测细胞增殖。结果 OE组Cyclin D1、NM23B和PCNA的mRNA及蛋白的表达量较CON组显著增多(P<0.05);另一方面,siRNA组的Cyclin D1、NM23B和PCNA的mRNA及蛋白的表达量较CON组显著降低(P<0.05),干扰NC组和OE-NC组与CON组相比无统计学差异(P>0.05)。OE组的G0/G1期细胞比例明显低于CON组(P<0.05),siRNA组的G_0/G_1期细胞比例明显高于CON组(P<0.05)。同时,OE组的S期细胞比例明显高于CON组(P<0.05),siRNA组的S期细胞比例明显低于CON组(P<0.05),siRNA-NC组和OE-NC组与CON组相比无统计学差异(P>0.05)。CCK-8检测细胞增殖表明OE组的增殖速度明显快于CON组(P<0.05),siRNA组的增殖速度明显慢于CON组(P<0.05),siRNA-NC组和OE-NC组与CON组相比无统计学差异(P>0.05)。结论过表达NM23B可以加强Cyclin D1、PCNA的表达,缩短细胞周期,从而促进肝细胞增殖;干扰NM23B表达则削弱了Cyclin D1、PCNA的表达,延长细胞周期,从而抑制肝细胞增殖。证实了NM23B在体外培养SD大鼠肝细胞增殖中的作用,为后续体内实验奠定了理论基础。