稳定高效表达BRP 44的PC-3细胞系的建立

目的建立稳定高效表达BRP 44的PC-3细胞系。方法下载BRP 44的全长mRNA序列,用Oligo 6进行引物设计,在上下游引物的5’引入相应的HindⅢ、EcoR I限制性内切酶识别序列及保护碱基。提取LNCaP细胞的总RNA反转录成cDNA进行PCR扩增,产物连接到真核表达载体pcDNA 3．1／myc-His A中构建成重组体。重组载体经酶切和测序鉴定后,阳离子脂质体转染法转染PC-3细胞、G 418筛选、Northern杂交检测并挑选出表达最强的亚克隆。结果成功构建BRP 44的真核表达载体并获得高效稳定表达的BRP 44基因的PC-3细胞亚克隆。结论高效稳定表达BRP44的PC-3细胞亚克隆可用于下一步研究。

BRP44基因对前列腺癌生物学行为的影响

目的研究BRP44高表达的人前列腺癌细胞PC3细胞系(雄激素非依赖性前列腺癌细胞株)细胞的生物学性状的影响,以了解其在人前列腺癌发生发展中可能的机制和作用。方法将已转染BRP44的PC3细胞提取其RNA,进而行Northern Blot检测证明其高表达,用Alamar Blue检测BRP44高表达的阳性细胞生长情况,流式细胞仪检测其细胞周期变换,采用改良的Tr-answell侵袭小室方法检测细胞侵袭能力。结果BRP44高表达的PC3细胞增殖速度较转染空载体的PC3细胞和正常PC3细胞快,差异有统计学意义(P<0.05)。在体外细胞移动实验中,BRP44高表达的PC3细胞也较另两组细胞表现出更强的穿膜能力、侵袭力(P<0.01)。结论BRP44表达增高与人前列腺癌细胞的恶性表型具有密切相关性,BRP44可能在人前列腺癌的发生、发展中发挥重要作用。

前列腺癌上调表达基因BRP44的蛋白细胞定位及功能预测研究

目的了解GFP-BRP44融合蛋白的细胞定位,初步预测BRP44的功能。方法构建BRP44与GFP的融合表达真核载体,脂质体介导法转染高表达该基因的前列腺癌细胞株LNCaP,激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的细胞定位。生物信息学方法对基因BRP44进行序列分析及功能预测。结果成功构建GFP-BRP44融合蛋白的真核表达载体,pEG-FP-BRP44融和蛋白在LNCaP细胞核及细胞质均有表达。与单纯GFP相比,融合蛋白在细胞质的表达相比细胞核更强。功能预测提示基因BRP44可能是一个受oct-1等转录因子调控,主要在细胞线粒体发挥基因调节作用的可溶性蛋白。结论BRP44蛋白可能主要在细胞质发挥作用。