用2种偶联比率偶联蛋白质制备猪抗克伦特罗血清的比较

将同窝断奶 1周左右的仔猪分为 2组 ,用偶联比率为 1∶14和 1∶18的 2种BSA CL偶联蛋白BSA14 和BSA18分别免疫 3次后 ,采用间接ELISA、间接抑制ELISA测定抗血清效价和血清阻断率。结果表明 ,虽然BSA18组血清的稀释度(1∶2 0 0 0 0 )低于BSA14 组血清的稀释度 (1∶40 0 0 0 ) ,但血清阻断率明显高于BSA14 组。提示以BSA为载体蛋白制备抗CL血清时 ,偶联比率在 1∶2

脂质体与蛋白质共价偶联的碳二亚胺法

报道脂质体与蛋白类物质胰岛素共价偶联的碳二亚胺（ＥＤＣＩ）法，取一定量脂质体、ＥＤＣＩ及胰岛素液，ｐＨ７．４、２４°Ｃ条件下充分反应２ｈ，用低温高速离心使脂质体－胰岛素复合物与游离胰岛素分开，并将本法与戊二醛法作了比较。结果：碳二亚胺首先与胰岛素上的羧基反应生成一加成中间产物，然后再与脂质体上的氨基反应生成酰胺键，实现两者的交联。ＥＤＣＩ法高效、方便，是一种较好的将蛋白类物质偶联于脂质体上的化学方法。

用于放射性砹(碘)标记蛋白质的偶联剂SPC的合成及表征

以5-溴烟酸为起始物,通过3步主要反应合成了一种适用于蛋白质放射性砹(碘)标记的偶联剂——5-(三正丁基锡)-3-吡啶甲酸 N-琥珀酰亚胺酯(SPC),并用核磁共振(NMR)、质谱(MS)、高效液相色谱(HPLC)等进行了表征。以该试剂为双功能偶联剂,实现了IgG的^(125)I标记,标记率达30％以上。标记产物在体外具有较高的稳定性。

液相色谱与串联质谱偶联在蛋白质序列分析中的应用

本文对液相色谱与电喷雾电离串联质谱仪偶联 (LC ESI MS MS)技术分析蛋白质序列的方法进行了详细介绍。并以尿激酶原的一个酶解片段的LC ESI MS MS图谱为例 。

改性蛋白质锚定钯催化剂对有机锡烷偶联反应的催化性能研究

制备了以超细二氧化硅为载体的氰乙基化可溶性蛋白质 -钯催化剂 ,研究了它在有机锡烷和酰氯化合物的偶联反应中的催化行为。结果表明 ,该催化剂对偶联反应具有较高的催化活性和化学选择性 ,分离容易 ,可重复使用 ,用 XPS、XRD等方法对催化剂进行了表征 。

蛋白质N端豆蔻酰化修饰的基因工程表达偶联加工系统

对酵母ＮＭＴ基因在大肠杆菌中表达进行较详细的研究，进而构建了复制子为ｐ１５Ａ并含卡那霉素抗性基因的相容性表达质粒ｐＫＺＭＴ，将其与表达质粒ｐＣＺｍＣα１共转化进大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）Ｆ′，进行双质粒表达偶联加工修饰研究，其中ｐＣＺｍＣα１表达底物蛋白小鼠ｃＡＭＰ依赖的蛋白激酶催化亚基α（ＰＫＡｍＣα）。ＳＤＳＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明，双质粒表达系统中，ＰＫＡｍＣα都得到了稳定的高表达，尤其在２３℃低温诱导表达时，表达产物的可溶性部分明显增多；而酵母ＮＭＴ被控制在有利于活性功能的可溶性低水平表达。［３Ｈ］ｍｙｒｉｓｔｉｃａｃｉｄ标记测定及放射自显影的结果显示，在大肠杆菌中表达的重组ＰＫＡｍＣα被豆蔻酰化修饰。

三丁基硅异硫氰酸酯作偶联试剂进行蛋白质和多肽C端序列分析

报道了一种新的用于化学降解法蛋白质C 端序列分析的偶联试剂三丁基硅异硫氰酸酯 (tributylsilylisothiocyanate,TBuS ITC) .用氯化三丁基硅和硫氰酸钾反应生成三丁基硅异硫氰酸酯 ,然后以乙酸酐作活化试剂 ,TBuS ITC乙腈溶液作偶联试剂 ,以合成的 10肽为模型肽 ,在低纳摩尔的水平上测到了该肽的C端 4个氨基酸 .其初始产率为 5 3 .1% ,重复产率为 5 7.6% .

蛋白质统计偶联分析平台的构建

蛋白质中氨基酸位点之间的偶联对其功能和结构非常重要,如果采用生物信息学的方法进行氨基酸位点的偶联分析,可以克服传统生物学实验方法难以从宏观角度进行系统的功能分析的局限性。本文详细介绍了统计偶联分析平台的构建。基于该平台,可以分析蛋白质中各氨基酸位点之间的偶联性。

蛋白质药物的聚乙二醇修饰

蛋白质药物经聚乙二醇修饰后其性质会发生多种变化。本文综述了该项技术的国内外研究现状 ,包括聚乙二醇修饰的原理与方法 ,修饰对蛋白质性质的影响 ,修饰方法的生物优化 ,有关的鉴定与检测方法及修饰产品的开发与临床应用状况。

SPDP蛋白偶联技术在抗原构建中的应用

为了制备多功能复合避孕疫苗，利用异型双功能试剂N-琥珀酰胺-3-（2-吡啶二硫）-丙酸酯（SPDP）对复合抗原的构建进行了试验。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）结果表明抗原的偶联是成功的。葡萄球菌A蛋白（SPA）和牛血清白蛋白（BSA）被偶联到同一载体破伤风类毒素（TT）上，复合抗原的平均表观相对分子质量为3.4×105。该法有可能用于制备多功能复合抗原。

基于支持向量机预测G蛋白偶联功能类

G蛋白偶联受体，又称为七α螺旋跨膜蛋白质受体，因能结合和调节G蛋白活性而得名。现有研究表明，该类蛋白质的功能失调能够导致包括阿尔茨海默氏症、帕金森症、侏儒症、色盲症以及哮喘等在内的多种疾病的发生，并且通过调节有关G蛋白偶联受体介导的信号转导还可以治疗抑郁症、精神分裂症、失眠、高血压、肾功能衰竭甚至心脑血管等疾病。

蛋白质碘化汞代烟酸-N-丁二酰亚胺酯的合成

By virtue of nicotinic acid as precursor compound,N saccinimidylnicotinizute has been synthesized through eletrophilic reaction and then esterified,one kind of conjugate reagent adapted to all kinds of protein can be obtained.Moreover,a quick and convenient way of labell antibody has been established,combining this conjugate reagent with the technique of the fixed phrase separation.The rate of its protein labell thus reached could be over 30% averagely.

基于序列的G蛋白偶联受体-药物相互作用预测研究

准确预测G蛋白质偶联受体(GPCR)是否与药物(Drug)相互作用是新药开发的关键步骤之一。从时间和费用方面来说,通过生物实验的方法来确定GPCR-Drug是否相互作用的代价是昂贵的。因此,直接从蛋白质序列出发预测GPCR-Drug的相互作用具有重要的意义。提出了一种基于序列的GPCR-Drug相互作用预测方法:从蛋白质序列抽取进化信息特征;对药物抽取指纹特征;基于上述两种特征,使用基于证据理论的K近邻算法进行分类预测。在标准数据集上的实验结果表明了所述方法的有效性。

雄激素非基因组效应相关的G蛋白偶联受体

雄激素主要是由睾丸间质细胞分泌的性类固醇激素，其在蛋白质合成、性腺发育及男性第二性征的维持等方面起到十分重要的作用。经典的雄激素基因组效应由特异的胞内受体介导。近来研究显示，雄激素可以与细胞膜上的G蛋白偶联受体（Gprotein coupled receptors，GPCRs）相互作用，影响细胞质内的信号转导分子，进而产生相应的快速作用，并且某些性类固醇激素的细胞膜特异性GPCRs已经得到证实，

单颗粒冷冻电镜揭开G蛋白偶联受体结构生物学研究的新篇章

G蛋白偶联受体(GPCR)是生物体内一类庞大而又多样的细胞膜蛋白。GPCR可以应细胞外信号发生构象变化,进而结合不同效应蛋白激活下游多种信号转导通路,调控众多生命活动过程,参与几乎所有病理过程的发生和发展。近年来,冷冻电镜技术在研究生物大分子结构方面取得了突飞猛进的发展,基于冷冻电镜的GPCR信号转导复合物的高分辨率三维结构不断出现。本文阐述了GPCR和G蛋白复合物相互作用的共性结构特征——受体第六个跨膜螺旋的构象变化,也展示了GPCR识别不同G蛋白亚型选择性的结构基础。单颗粒冷冻电镜提供了更加高效地鉴定受体与配体相互作用分子机制的方法,为GPCR信号通路的机制研究以及基于结构的药物理性设计提供了重要信息。

线粒体解偶联蛋白2在肝癌组织中的表达及其与紫杉醇化疗耐药的关系

目的研究线粒体解偶联蛋白2(uncoupling protein2,UCP2)在肝癌组织中表达的临床意义及其与紫杉醇化疗耐药的关系。方法选取2012年2月至2013年2月在仪陇县人民医院住院的肝癌病人120例,比较不同病理资料的UCP2水平,通过对病人展开为期5年的随访,比较不同预后及紫杉醇的耐药情况。结果肝癌组织UCP2阳性表达72例,表达率60.00%,高于癌旁组织的12例,表达率10.00%,不同组织分化、淋巴结转移、TNM分期、生存情况的UCP2水平及紫杉醇耐药情况比较,均差异有统计学意义(P<0.05);不同组织分化、淋巴结转移、TNM分期、生存情况及UCP2水平均为紫杉醇耐药的独立危险因素,UCP2水平与紫杉醇耐药情况呈正相关(P<0.05)。结论 UCP2阳性肝癌病人紫杉醇耐药性较高,生存情况较差,可作为病人预后评估的依据。

G蛋白偶联受体激酶5在大肠杆菌中的表达纯化

通过RT-PCR扩增得到了人G蛋白偶联受体激酶5(GProtein-coupledreceptorki-nase,GPK5)的基因,将其克隆到表达载体pET-28a中,并将该质粒转入大肠杆菌BL21(DE3),在10μmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPIG)诱导培养下表达,通过分离纯化,得到部分纯化的GRK5蛋白。体外活性测定表明,纯化后的GPK5能够特异性地磷酸化视紫红质。动力学常数Km=4.3μmol/L,Vmax=25nmol/(mg·min),与文献报道的从真核表达系统中纯化得到的GRK5相近。

α-酮戊二酸对肌肉蛋白质合成的影响

酮戊二酸(α-KG)是戊二酸的两种带酮基衍生物中的一种,是三羧酸循环的中间产物及谷氨酸脱氨基的酮酸产物。因此,其在葡萄糖代谢及氨基酸代谢的调控方面具有特殊的生物学功能。近年来研究表明,其参与肌肉蛋白质代谢主要与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及G-蛋白偶联受体(GPR)的激活密切相关。本文就α-KG的生理功能及其在体内的基本代谢过程,调控肌肉代谢及其信号通路的研究进展进行综述,为进一步推广α-KG在饲料生产中的使用及深入研究α-KG的分子机制提供参考。

恶性疟原虫合子/动合子表面25蛋白自身偶联条件的优化及其聚体蛋白的制备

目的探讨影响恶性疟原虫合子/动合子表面25蛋白(25 k Da Plasmodium falciparum sexual stage protein,Pfs25)偶联的因素,优化Pfs25蛋白的偶联反应条件,制备具有免疫原性的Pfs25纯化聚体蛋白。方法通过对偶联反应时Pfs25蛋白浓度、偶联反应的酸碱度、不同的缓冲液及偶联试剂添加方式的探索,考察不同反应条件对Pfs25蛋白偶联的影响。凝胶过滤层析纯化Pfs25偶联反应产物,双抗体夹心ELISA和SDS-PAGE对凝胶柱洗脱液进行检测,Western blot检测纯化的Pfs25聚体蛋白。结果 Pfs25蛋白偶联反应选择1/15 mol/L Na_2HPO_4-KH_2PO_4为偶联缓冲液,反应体系在pH 5.6～6.0时偶联效果更好,而Pfs25蛋白反应质量浓度为25 mg/m L时可获得最佳的Pfs25偶联效率(68.67%),凝胶过滤层析法获得Pfs25聚体蛋白,经双抗体夹心ELISA和Western blot检测,形成的Pfs25聚体蛋白保持了与Pfs25蛋白相同的抗体结合能力。结论优化了Pfs25蛋白最佳偶联反应条件,获得具有免疫原性的Pfs25纯化聚体蛋白。在形成Pfs25聚体中,以二聚体(Pfs25)2为主要形式,兼有少量三聚体(Pfs25)3和四聚体(Pfs25)4。

人体最大蛋白质家族研究获重要成果

5月18日,国际学术期刊《Nature》同时在线发表两篇两项G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptor,GPCR）重大科研成果,分别由中国科学院上海药物研究所、上海科技大学领衔,联合复旦大学药学院共同完成。