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慢病毒介导SiRNA沉默SGMS2基因的单克隆细胞系构建中最佳MOI值及筛选抗生素浓度
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作者 金小花 秦高 《中国生化药物杂志》 CAS 2015年第9期51-53,56,共4页
目的探究慢病毒介导RNAi沉默SGMS2基因的单克隆细胞系构建中最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)及BSD基因筛选抗生素(blasticidin)浓度。方法荧光标记小鼠SGMS2干扰阴性对照慢病毒并按照MOI值0、10、30、60、120(TU number/ce... 目的探究慢病毒介导RNAi沉默SGMS2基因的单克隆细胞系构建中最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)及BSD基因筛选抗生素(blasticidin)浓度。方法荧光标记小鼠SGMS2干扰阴性对照慢病毒并按照MOI值0、10、30、60、120(TU number/cell)分别侵染INS-1空白细胞,培养72 h后使用荧光显微镜拍照并计算细胞的荧光比率(%)及死亡率(%),以确定最佳MOI值。小鼠胰岛素瘤INS-1空白细胞中加入0、1、2、3μg/m L blasticidin,第7天时采用MTT法检测细胞的死亡率,以确定细胞抗生素敏感浓度。使用SGMS2干扰阴性对照慢病毒及SGMS2干扰慢病毒(病毒滴度:1×108TU/m L)按照最佳MOI值侵染细胞,并用blasticidin敏感浓度进行阳性细胞筛选,获得混合系细胞。当细胞的荧光率达90%时,进行单克隆稳转细胞系的构建。结果最佳MOI值为60,此时细胞的荧光率达100%,但细胞的死亡率<0.5%,细胞保持原有的形态。当blasticidin敏感浓度为2μg/m L,此时空白细胞失去原有的贴壁性,全部死亡。INS-1-SEMS2细胞第2次检测的Ct值28.21大于第1次检测的Ct值27.58,且siRNA的干扰效率为77.78%,siRNA成功表达,混合稳转细胞系构建成功。成功构建小鼠胰岛素瘤INS-1-SEMS2单克隆细胞系。结论慢病毒介导RNAi沉默基因SGMS2的单克隆细胞系构建成功。 展开更多
关键词 小鼠胰岛素瘤INS-1细胞 感染复数 bsd基因筛选抗生素 细胞稳转株
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G418和氯霉素作为转基因盐藻的抗生素筛选标记 被引量:16
2
作者 李杰 刘颖 +2 位作者 黄洁虹 俞梅敏 茹炳根 《生物技术》 CAS CSCD 2003年第3期22-23,共2页
寻找可以作为筛选标记的抗生素是进行盐藻转基因的前提 ,尤其是分子更小、反应更灵敏的抗生素。通过降低培养液中NaCl浓度至 0 2 5mol l以后 ,进行抗生素筛选 ,得到了一种可以作为筛选标记的抗生素———G4 18,70 0 μg/mlG4 18在第 5... 寻找可以作为筛选标记的抗生素是进行盐藻转基因的前提 ,尤其是分子更小、反应更灵敏的抗生素。通过降低培养液中NaCl浓度至 0 2 5mol l以后 ,进行抗生素筛选 ,得到了一种可以作为筛选标记的抗生素———G4 18,70 0 μg/mlG4 18在第 5d即比较完全地杀死野生型盐藻细胞。由于未知的原因 ,实验中氯霉素表现出的抑制浓度是 4 0 0 μg ml,作用时间是 10d以上 ,不同于已有报道。在含 1 5mol lNaCl的盐藻培养基中 ,氯霉素、潮霉素、壮观霉素、G4 18、氨苄青霉素、卡那霉素都没有表现出杀死盐藻细胞的能力。这说明G4 展开更多
关键词 G418 氯霉素 基因盐藻 抗生素筛选标记
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番茄基因转化中抗生素筛选压力的确定方法 被引量:3
3
作者 张寅玲 刘艳军 +2 位作者 张伟玉 杨静慧 柳树梧 《西南园艺》 2005年第5期4-6,共3页
在以抗生素为筛选标记的基因转化中,确定适宜的筛选压力是提高基因转化率的前提。本研究以卡那霉素为例,通过在10mg/L,20mg/L,30mg/L,50mg/L,100mg/L的筛选压力下,转化和非转化番茄子叶外植体的生长表现、愈伤组织和芽的分化率,来确定... 在以抗生素为筛选标记的基因转化中,确定适宜的筛选压力是提高基因转化率的前提。本研究以卡那霉素为例,通过在10mg/L,20mg/L,30mg/L,50mg/L,100mg/L的筛选压力下,转化和非转化番茄子叶外植体的生长表现、愈伤组织和芽的分化率,来确定适宜的筛选浓度。本实验以该方法找到的适宜的卡那霉素筛选浓度为50mg/L。以此浓度为筛选压力进行遗传转化所获得的部分再生苗经southernblot鉴定,均为转化株。 展开更多
关键词 基因转化 番茄 抗生素 卡那霉素 筛选压力
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转基因棉花筛选中抗生素浓度的选择研究
4
作者 王国祥 南宏宇 +1 位作者 张秉贤 冯克云 《中国棉花》 北大核心 2008年第2期14-15,共2页
关键词 基因棉花 抗生素 浓度 筛选 经济损失 害虫 蚜虫 棉区
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非抗生素药物的抗菌活性与标准抗生素相独立
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作者 赵林(编译) 《广东药科大学学报》 CAS 2024年第3期53-53,共1页
许多非抗生素药物具有强效抗菌活性,它们可能对人类微生物组产生不利影响。这种毒性的基本机制在很大程度上仍然未知。研究人员利用数千个条形码标记的大肠埃希菌敲除株进行基因筛选,研究了200种药物的抗菌活性。他们还分析了200万种具... 许多非抗生素药物具有强效抗菌活性,它们可能对人类微生物组产生不利影响。这种毒性的基本机制在很大程度上仍然未知。研究人员利用数千个条形码标记的大肠埃希菌敲除株进行基因筛选,研究了200种药物的抗菌活性。他们还分析了200万种具有潜在药物特异性毒性的基因-药物间的相互作用。基于网络的药物-药物间相似性分析显示,抗生素聚集在与已建类别的作用模式一致的模块中,而非抗生素类仍然没有关联。一半的非抗生素药物聚集在不同的模块中,潜在地揭示出新型抗菌药物共同的和未开发的靶标。对外排系统的分析显示,它们对抗生素和非抗生素药物都有广泛的影响,这表明应在体内密切研究非抗生素类药物对抗生素交叉耐药性的影响。 展开更多
关键词 抗生素类药物 交叉耐药性 抗菌活性 外排系统 条形码 相似性分析 基因筛选 大肠埃希菌
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Bt转基因水稻对抗生素反应的初步研究(简报) 被引量:15
6
作者 王忠华 舒庆尧 +2 位作者 贺华龙 夏英武 倪新强 《植物生理学通讯》 CSCD 北大核心 2001年第2期111-113,共3页
以相同浓度卡那霉素处理的Bt转基因水稻 ,其发芽率、根系生长力和叶色变化与对照品种无显著差异 ;用潮霉素处理时 ,对照秀水 11对 5 0mg·L-1潮霉素浸种处理十分敏感 ,发芽率降为 0 ,而Bt转基因水稻则未受到明显的影响。据此可以认... 以相同浓度卡那霉素处理的Bt转基因水稻 ,其发芽率、根系生长力和叶色变化与对照品种无显著差异 ;用潮霉素处理时 ,对照秀水 11对 5 0mg·L-1潮霉素浸种处理十分敏感 ,发芽率降为 0 ,而Bt转基因水稻则未受到明显的影响。据此可以认为 。 展开更多
关键词 卡那霉素 潮霉素 Bt转基因水稻 抗生素反应 筛选
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抗生素筛选方法 被引量:3
7
作者 马寅姣 宋沁馨 顾觉奋 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期654-658,共5页
细菌耐药性发生率的升高,激励着人们去寻找更多的筛选抗生素的策略,进而发现了更多的抗生素作用机制。靶向策略、高通量筛选等方法已经被用于检测有潜力的抗生素。细菌的DNA复制、细胞分裂和蛋白合成的中间步骤已经成为了筛选的新靶点,... 细菌耐药性发生率的升高,激励着人们去寻找更多的筛选抗生素的策略,进而发现了更多的抗生素作用机制。靶向策略、高通量筛选等方法已经被用于检测有潜力的抗生素。细菌的DNA复制、细胞分裂和蛋白合成的中间步骤已经成为了筛选的新靶点,双组分信号传递系统也成为了较为重要的药物新筛选靶点。微生物基因组学的发展,给新抗生素的发现带来了更大的希望,使人们可以发现更多的新作用靶点。 展开更多
关键词 抗生素 抗生素筛选 基因 靶向抗生素筛选
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利用微生物基因组开发新型抗生素 被引量:4
8
作者 谢建平 乐军 王洪海 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期396-400,共5页
关键词 微生物基因 药物开发 生物信息学 靶位 药物筛选模型 抗生素
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基于序列宏基因组学技术的芳香聚酮抗生素的发现 被引量:1
9
作者 孟晓露 高凯 冯治洋 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期168-176,共9页
[目的]本文旨在筛选土壤微生物来源的芳香聚酮抗生素。[方法]通过宏基因组学技术,利用基于酮基合成酶基因(KSα)保守序列设计的简并引物筛选土壤宏基因组文库,获得含有芳香聚酮生物合成基因簇的阳性克隆。对阳性克隆质粒测序并通过BLAST... [目的]本文旨在筛选土壤微生物来源的芳香聚酮抗生素。[方法]通过宏基因组学技术,利用基于酮基合成酶基因(KSα)保守序列设计的简并引物筛选土壤宏基因组文库,获得含有芳香聚酮生物合成基因簇的阳性克隆。对阳性克隆质粒测序并通过BLASTx同源比对分析其所包含的芳香聚酮生物合成基因簇。通过接合转移方法将基因簇整合进异源表达宿主白色链霉菌基因组中,培养发酵接合子,利用高效液相色谱技术确定克隆特异性产物并对发酵产物进行抑菌活性检测。[结果]从珠穆朗玛峰土壤宏基因组文库第493号混合文库中扩增得到了1个KSα片段ZF493,蛋白序列分析显示其与酮基合成酶同源,文库筛选得到了含有其对应芳香聚酮生物合成基因簇的阳性克隆cos493。对cos493的测序分析显示其插入片段大小为34 kb,包括酮基合成酶基因(KSα,orf 21)、链长因子基因(KSβ,orf 20)、酰基载体蛋白基因(ACP,orf 19)、环化酶基因(CYC,orf 17和orf 18)、糖基转移酶基因(orf 12)、单加氧酶基因(orf 16)等芳香聚酮合成相关基因。ORF 21与化合物calixanthomycin A聚酮合酶的KSα有67%的相似性,ORF 20与化合物griseorhodin A的KSβ有49%的相似性。通过接合转移使含芳香聚酮合酶基因簇的cos493整合进白色链霉菌宿主基因组中。高效液相色谱分析发酵粗提物发现了2个克隆特异化合物峰,紫外光谱分析显示化合物1在223、296和420 nm处有特征吸收峰,化合物2在214、261和447 nm处有特征吸收峰,特异峰具备芳香聚酮化合物的紫外吸收特征。对发酵粗提物的抑菌活性检测发现,其对金黄色葡萄球菌有抑制作用。[结论]本研究运用基于序列的宏基因组学技术,在链霉菌宿主中表达了来源于土壤微生物的芳香聚酮合酶基因簇并产生了具有抗菌活性的化合物。 展开更多
关键词 基因组学 序列筛选 异源表达 芳香聚酮抗生素
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基因组学在寻找新型抗生素中的应用 被引量:5
10
作者 郭利 王玉霞 《国外医学(药学分册)》 2001年第1期34-37,共4页
过去 4 0年 ,抗生素药物主要局限于对一系列药物靶标有对抗作用的已知化合物的研究。这种方法不能产生足够的分子多样性 ,临床上抗药性问题日益严重。基因组学的发展增加了潜在的药物靶标 ,使简单直接的抗生素药物筛选转向合理的基于靶... 过去 4 0年 ,抗生素药物主要局限于对一系列药物靶标有对抗作用的已知化合物的研究。这种方法不能产生足够的分子多样性 ,临床上抗药性问题日益严重。基因组学的发展增加了潜在的药物靶标 ,使简单直接的抗生素药物筛选转向合理的基于靶标的策略。基因组技术的应用 ,如表达图谱和蛋白质组 。 展开更多
关键词 基因组学 抗生素 药物筛选 抗药性 靶标
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重组人肽抗生素hPAB-β及其突变体的活性测定与筛选
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作者 饶贤才 陈志瑾 +7 位作者 金晓琳 黎庶 胡晓梅 朱军民 黄建军 胡金川 谭银玲 胡福泉 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2003年第2期4-4,共1页
关键词 重组人肽抗生素hPAB-β 突变体 活性测定 筛选 基因工程 基因表达
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亚麻转基因中抗生素应用效果的研究 被引量:12
12
作者 康庆华 《中国麻业》 2005年第2期94-97,共4页
在利用农杆菌介导法进行亚麻抗除草剂草丁膦(Basta)目的基因(Bar)导入工作中;对选择培养基内加入500mg/l克拉维酸钾(timentin进口)+200mg/l头孢噻肟(claforan进口)的抗菌素来取代500mg/l头孢噻肟(Cefotaxime国产)不仅脱菌效果彻底,期效... 在利用农杆菌介导法进行亚麻抗除草剂草丁膦(Basta)目的基因(Bar)导入工作中;对选择培养基内加入500mg/l克拉维酸钾(timentin进口)+200mg/l头孢噻肟(claforan进口)的抗菌素来取代500mg/l头孢噻肟(Cefotaxime国产)不仅脱菌效果彻底,期效长,且不影响亚麻愈伤形成和芽的分化;同时对再生植株进行了盆栽Basta抗性筛选试验,获得不同抗性的植株和种子。 展开更多
关键词 亚麻 抗生素 基因 应用 农杆菌介导法 抗性筛选试验 头孢噻肟 选择培养基 Basta 目的基因 抗除草剂 克拉维酸 再生植株 草丁膦 抗菌素 进口 导入 脱菌 愈伤 盆栽 种子
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新抗生素筛选的基本原理
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作者 林文良 《海峡药学》 1994年第4期51-53,共3页
关键词 抗生素筛选 钝化酶 小诺霉素 细胞壁合成 药物作用机制 抗菌活性 生物合成途径 丙氢酸 基因重组技术 抗菌药物
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梅岭霉素高产菌株链霉素抗性基因突变株筛选 被引量:9
14
作者 涂国全 刘姝 黎循航 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期33-37,共5页
通过链霉素对梅岭霉素 (Meilingmycin)产生菌南昌链霉菌NS 41 80菌株孢子致死浓度的测定 ,采用诱变剂EMS 4种不同剂量对菌株孢子进行诱变处理 ,然后涂布在含链霉素致死浓度的高氏平板上 ,获得了大量的链霉素抗性基因 (str)突变株。并... 通过链霉素对梅岭霉素 (Meilingmycin)产生菌南昌链霉菌NS 41 80菌株孢子致死浓度的测定 ,采用诱变剂EMS 4种不同剂量对菌株孢子进行诱变处理 ,然后涂布在含链霉素致死浓度的高氏平板上 ,获得了大量的链霉素抗性基因 (str)突变株。并进一步筛选到梅岭霉素高产菌株 80 5 1 1 2 2 1 ,在摇瓶条件下 ,只产梅岭霉素不产南昌霉素 ,梅岭霉素活性单位达 1 ,52 1 μg/mL,比NS 41 80的摇瓶发酵单位 855μg/mL提高了 77 9% ,该菌株连续传 6代进行摇瓶发酵 ,其F2 代和F3 代发酵单位稳定 ,F4代至F6 代随着代数增加 ,梅岭霉素发酵单位急速下降。通过EMS诱变剂量分别与抗药性突变率和str突变株产梅岭霉素产量的产势统计分析表明 ,菌株抗药性突变与产量突变密切相关。产量突变的EMS剂量高于str突变剂量 ,从而建立了梅岭霉素产生菌链霉素抗性基因突变筛选方法。 展开更多
关键词 南昌链霉菌 杀虫抗生素 梅岭霉素 高产菌株 链霉素抗性基因突变株 筛选
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国外新抗生素(微生物药物)研究发展动态 被引量:3
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作者 施跃峰 《生物技术》 CAS CSCD 1998年第5期1-5,共5页
关键词 抗生素 作用对象 筛选模型 基因工程
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南美白对虾肠道内乳酸菌的分离鉴定及其对抗生素的耐药性 被引量:6
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作者 宋俊男 张久峰 +2 位作者 罗剑飞 赵丹丹 林炜铁 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2020年第5期192-199,共8页
以南美白对虾为研究对象,采用平板分离法从其肠道内筛得26株乳酸菌,通过16S rRNA测序鉴定可归为4种:乳酸乳球菌乳亚种L. lactis subsp. lactis、台湾乳球菌L. taiwanensis、格式乳球菌L. garvieae、乳酸乳球菌L. lactis。选取7株具有代... 以南美白对虾为研究对象,采用平板分离法从其肠道内筛得26株乳酸菌,通过16S rRNA测序鉴定可归为4种:乳酸乳球菌乳亚种L. lactis subsp. lactis、台湾乳球菌L. taiwanensis、格式乳球菌L. garvieae、乳酸乳球菌L. lactis。选取7株具有代表性的乳酸菌,用PCR的方法检测对虾中检出率较高的6类18种抗性基因(ARGs)在乳酸菌中的分布,辅以平板涂布的方法用抗生素选择性培养基研究乳酸菌对抗生素的耐药性。研究发现:7株乳酸菌具有相似的耐药谱,对四环素、磺胺吡啶、乙酰螺旋霉素表现出耐药性(抑菌率<50.00%),对盐酸金霉、土霉素、硫酸庆大霉素、氯霉素、红霉素敏感(抑菌率100%);含有多重抗性基因,ARGs的检出率:磺胺类(92.86%)>四环素类(53.06%)>喹诺酮类(23.81%)>氨基糖苷类(4.76%)>氯霉素类=大环内酯类(0.00%),其ARGs基因型与菌株的抗生素表型并不能完全吻合。 展开更多
关键词 乳酸菌 分离筛选 抗性基因 抗生素耐药性
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抗生素研制方法进展
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作者 洪澍 《杭州师范学院学报(医学版)》 2006年第1期51-54,共4页
关键词 抗生素 产抗基因 筛选 基因 生物信息学
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棉花基因枪茎尖转化研究 被引量:13
18
作者 刘传亮 于娅 +2 位作者 王玉芬 耿立召 李付广 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2003年第6期361-366,共6页
对棉花茎尖轰击转化的多种因素进行了分析,建立了较为完善的基因枪茎尖转化体系,使抗性转化率达到4.7%~9.4%,转化周期缩短至2~3个月,改进了抗性筛选程序,建立了4次筛选法,获得91株抗生素抗性植株;同时对部分植株目的基因的表达量进... 对棉花茎尖轰击转化的多种因素进行了分析,建立了较为完善的基因枪茎尖转化体系,使抗性转化率达到4.7%~9.4%,转化周期缩短至2~3个月,改进了抗性筛选程序,建立了4次筛选法,获得91株抗生素抗性植株;同时对部分植株目的基因的表达量进行了初步的遗传分析。结果表明,茎尖的轰击状态与抗性筛选程序对转化周期与转化率具有决定性作用。 展开更多
关键词 棉花 茎尖 基因 遗传转化 抗性 抗生素 植株 表达量 遗传分析 筛选程序 转化周期 转化率
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阴沟肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶的基因型调查 被引量:12
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作者 顾怡明 张杰 +2 位作者 俞云松 周志慧 杜小玲 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期82-85,共4页
目的了解北京朝阳医院阴沟肠杆菌中产ESBLs的流行情况,并对携带的ESBLs基因型进行调查。方法采用表型筛选法对58株对第三代头孢菌素或氨曲南敏感性降低的阴沟肠杆菌进行检测。对20株初筛阳性的细菌进行琼脂稀释法药敏试验、等电点测定,... 目的了解北京朝阳医院阴沟肠杆菌中产ESBLs的流行情况,并对携带的ESBLs基因型进行调查。方法采用表型筛选法对58株对第三代头孢菌素或氨曲南敏感性降低的阴沟肠杆菌进行检测。对20株初筛阳性的细菌进行琼脂稀释法药敏试验、等电点测定,并对β-内酰胺酶编码基因进行克隆测序。结果表型筛选法对58株阴沟肠杆菌检测的结果显示产ESBLs菌株的检出率为34.48%(20/58)。药敏结果显示,单独产生ESBLs的菌株对头孢西丁、头孢吡肟、哌拉西林/三唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦的敏感率分别为100%、32.5%和87.5%。同时携带ESBLs和AmpC酶的菌株只对亚胺培南敏感。20株检测阳性的细菌中,14株ESBLs编码基因PCR结果阳性,分别为:SHV-2、SHV-2a、SHV-12、CTX-M-14和CTX-M-22型ESBLs。对另外6株进行粗酶等电点测定发现分别存在7.89、8.0、8.57等电点条带,并被克拉维酸抑制。结论产生超广谱β-内酰胺酶是造成阴沟肠杆菌对第三代头孢菌素耐药的另一重要原因。 展开更多
关键词 阴沟肠杆菌 超广谱Β-内酰胺酶 基因 序列分析 表型筛选 抗生素
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海洋细菌中活性化合物的筛选策略(英文) 被引量:1
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作者 陈菲菲 林灵 +4 位作者 王以光 周红霞 陶佩珍 赫卫清 王勇 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期321-330,共10页
目的从700多株海洋沉积物分离得到的细菌中筛选安莎类抗生素和6-脱氧己糖(6DOH)糖基化修饰的次级代谢产物产生菌。方法以3-氨基-5-羟基苯甲酸(AHBA)合酶基因和dTDP-葡萄糖-4,6-脱水酶基因为靶标,分别进行安莎类抗生素和6DOH糖基化修饰... 目的从700多株海洋沉积物分离得到的细菌中筛选安莎类抗生素和6-脱氧己糖(6DOH)糖基化修饰的次级代谢产物产生菌。方法以3-氨基-5-羟基苯甲酸(AHBA)合酶基因和dTDP-葡萄糖-4,6-脱水酶基因为靶标,分别进行安莎类抗生素和6DOH糖基化修饰的次级代谢产物产生菌的分子筛选。对AHBA合酶及dTDP-葡萄糖-4,6-脱水酶基因阳性的菌株发酵液及提取物进行抗菌、抗肿瘤、抗病毒活性分析。采用利福霉素抗性及氢氧化钠显色初步鉴定安莎类化合物;采用α-萘酚硫酸显色初步鉴定6DOH糖基化修饰的化合物。利用16S rRNA序列对部分阳性菌株进行系统发育分析。结果共获得39株AHBA合酶基因阳性和10株dTDP-葡萄糖-4,6-脱水酶基因阳性菌株。阳性菌株中,78%具有不同程度的生物活性。化学初步鉴定结果表明:49%的AHBA合酶基因阳性菌株产生安莎类化合物;50%的dTDP-葡萄糖-4,6-脱水酶基因阳性菌株产生6DOH糖基化修饰的化合物。系统发育分析表明,大多数阳性菌株属于放线菌中的链霉菌属。结论基因探针筛选可作为一种合理、有效的方法从海洋细菌中发现活性代谢产物。 展开更多
关键词 海洋细菌 基因探针筛选 安莎类抗生素 6-脱氧己糖(6DOH)糖基化修饰的化合物 生物活性
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