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可生物素化H-2K^d-BSP融合蛋白的原核表达和纯化
被引量:
3
1
作者
钱亚云
刘静
+3 位作者
张伟
潘兴元
龚卫娟
季明春
《实用临床医药杂志》
CAS
2008年第4期1-4,共4页
目的构建可生物素化的H-2Kd-BSP融合基因的表达载体,原核表达H-2Kd-BSP融合蛋白,以制备H-2Kd-肽四聚体。方法采用RT-PCR技术从小鼠SP2/0细胞中克隆小鼠MHC-Ⅰ类分子H-2Kd基因的胞外区,拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列(BSP)后,插入pET-...
目的构建可生物素化的H-2Kd-BSP融合基因的表达载体,原核表达H-2Kd-BSP融合蛋白,以制备H-2Kd-肽四聚体。方法采用RT-PCR技术从小鼠SP2/0细胞中克隆小鼠MHC-Ⅰ类分子H-2Kd基因的胞外区,拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列(BSP)后,插入pET-22b高效表达载体多克隆位点,诱导表达后对表达产物进行纯化,用Western印迹法分析鉴定纯化融合蛋白。结果成功构建pET-H-2Kd原核表达载体,测序证实H-2Kd-BSP融合基因序列正确。pET-H-2Kd原核表达载体可在大肠杆菌BL21中高效诱导表达H-2Kd-BSP融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的36%,主要以包涵体形式表达;经反复洗涤纯化,纯化蛋白纯度可达90%以上。纯化蛋白可被H-2Kd分子特异性单克隆抗体SF1-1.1所识别。结论可生物素化H-2Kd-BSP融合蛋白的原核表达和纯化为进一步制备H-2Kd-肽四聚体奠定了实验基础。
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关键词
H-2K^d
H-2K^d—BSP融合蛋白
可生物素化序列
下载PDF
职称材料
骨关节炎软骨下骨中视网膜母细胞瘤RB1-诱导卷曲蛋白1的表达及作用
2
作者
李俊彦
方航
+1 位作者
冯晓峰
蔡道章
《中国组织工程研究》
CAS
北大核心
2020年第17期2642-2647,共6页
背景:骨关节炎以关节软骨的退变和软骨下骨的重建为主要病理特征。骨关节炎的具体发病机制目前仍未清楚,大部分研究以软骨与软骨下骨为主要切入点,探索疾病过程中的分子机制和信号通路变化,为骨关节炎的诊断与治疗提供新的生物靶点和研...
背景:骨关节炎以关节软骨的退变和软骨下骨的重建为主要病理特征。骨关节炎的具体发病机制目前仍未清楚,大部分研究以软骨与软骨下骨为主要切入点,探索疾病过程中的分子机制和信号通路变化,为骨关节炎的诊断与治疗提供新的生物靶点和研究方向。目的:探讨在骨关节炎进程中软骨下骨RB1CC1的表达情况。方法:8周龄C57小鼠随机分为实验组和假手术组,实验组又随机分为4周和8周2个亚组。实验组小鼠行右侧膝关节内侧半月板胫骨韧带切除,游离内侧半月板,诱导骨关节炎;假手术组小鼠则仅切开关节囊而不行内侧韧带切除和半月板游离。实验方案于2017-12-13经南方医科大学第三附属医院动物实验伦理委员会批准,批准号为No.44007200038731。结果与结论:与假手术组相比,实验组骨关节炎RSI评分均显著升高,关节软骨面Ⅱ型胶原表达降低,软骨下骨中的RB1CC1表达逐渐升高,RB1CC1与成骨相关指标BSP2的表达趋势有一致性;提示随着骨关节炎进程的发展,软骨下骨的RB1CC1表达逐渐增多,可能与促进软骨下骨增生及重塑有关。
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关键词
骨关节炎
软骨下骨
RB1CC1
成骨
骨代谢
bsp2
硬化
血管形成
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职称材料
题名
可生物素化H-2K^d-BSP融合蛋白的原核表达和纯化
被引量:
3
1
作者
钱亚云
刘静
张伟
潘兴元
龚卫娟
季明春
机构
扬州大学医学院病原生物学和免疫学教研室
出处
《实用临床医药杂志》
CAS
2008年第4期1-4,共4页
基金
国家自然科学基金项目(30771955)
江苏省自然科学基金基础研究重点项目(BK2006706)
文摘
目的构建可生物素化的H-2Kd-BSP融合基因的表达载体,原核表达H-2Kd-BSP融合蛋白,以制备H-2Kd-肽四聚体。方法采用RT-PCR技术从小鼠SP2/0细胞中克隆小鼠MHC-Ⅰ类分子H-2Kd基因的胞外区,拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列(BSP)后,插入pET-22b高效表达载体多克隆位点,诱导表达后对表达产物进行纯化,用Western印迹法分析鉴定纯化融合蛋白。结果成功构建pET-H-2Kd原核表达载体,测序证实H-2Kd-BSP融合基因序列正确。pET-H-2Kd原核表达载体可在大肠杆菌BL21中高效诱导表达H-2Kd-BSP融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的36%,主要以包涵体形式表达;经反复洗涤纯化,纯化蛋白纯度可达90%以上。纯化蛋白可被H-2Kd分子特异性单克隆抗体SF1-1.1所识别。结论可生物素化H-2Kd-BSP融合蛋白的原核表达和纯化为进一步制备H-2Kd-肽四聚体奠定了实验基础。
关键词
H-2K^d
H-2K^d—BSP融合蛋白
可生物素化序列
Keywords
H-2K^d
H-2Kd-BSP fusion protein
BirA substrate peptide
分类号
R392-33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
骨关节炎软骨下骨中视网膜母细胞瘤RB1-诱导卷曲蛋白1的表达及作用
2
作者
李俊彦
方航
冯晓峰
蔡道章
机构
南方医科大学第三附属医院
出处
《中国组织工程研究》
CAS
北大核心
2020年第17期2642-2647,共6页
基金
国家自然科学基金项目(81371990),项目负责人:蔡道章
国家自然科学基金项目(81601945),项目负责人:方航~~
文摘
背景:骨关节炎以关节软骨的退变和软骨下骨的重建为主要病理特征。骨关节炎的具体发病机制目前仍未清楚,大部分研究以软骨与软骨下骨为主要切入点,探索疾病过程中的分子机制和信号通路变化,为骨关节炎的诊断与治疗提供新的生物靶点和研究方向。目的:探讨在骨关节炎进程中软骨下骨RB1CC1的表达情况。方法:8周龄C57小鼠随机分为实验组和假手术组,实验组又随机分为4周和8周2个亚组。实验组小鼠行右侧膝关节内侧半月板胫骨韧带切除,游离内侧半月板,诱导骨关节炎;假手术组小鼠则仅切开关节囊而不行内侧韧带切除和半月板游离。实验方案于2017-12-13经南方医科大学第三附属医院动物实验伦理委员会批准,批准号为No.44007200038731。结果与结论:与假手术组相比,实验组骨关节炎RSI评分均显著升高,关节软骨面Ⅱ型胶原表达降低,软骨下骨中的RB1CC1表达逐渐升高,RB1CC1与成骨相关指标BSP2的表达趋势有一致性;提示随着骨关节炎进程的发展,软骨下骨的RB1CC1表达逐渐增多,可能与促进软骨下骨增生及重塑有关。
关键词
骨关节炎
软骨下骨
RB1CC1
成骨
骨代谢
bsp2
硬化
血管形成
Keywords
osteoarthritis
subchondral bone
RB1CC1
osteogenesis
bone metabolism
bsp2
sclerosis
angiogenesis
分类号
R446 [医药卫生—诊断学]
R363 [医药卫生—病理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
可生物素化H-2K^d-BSP融合蛋白的原核表达和纯化
钱亚云
刘静
张伟
潘兴元
龚卫娟
季明春
《实用临床医药杂志》
CAS
2008
3
下载PDF
职称材料
2
骨关节炎软骨下骨中视网膜母细胞瘤RB1-诱导卷曲蛋白1的表达及作用
李俊彦
方航
冯晓峰
蔡道章
《中国组织工程研究》
CAS
北大核心
2020
0
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职称材料
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