商用BT细胞中污染病毒的检测及基因序列分析

为了解商用BT细胞系中牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛细小病毒(BPV)、呼肠孤病毒3型(Reo3)、牛腺病毒(BAdV-3)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)和牛副流感病毒3型(BPIV-3)6种病毒的污染情况,对购买的商用BT细胞进行病原PCR检测、细胞病变观察、上清液PCR检测,以及阳性病原部分基因序列的测序和分析。结果显示:对细胞培养液进行6种病毒的PCR扩增,仅BVDV出现特异性目的条带,其他病原均为阴性;目的条带测序后经BLAST分析,确定为BVDV阳性;7 d内BT细胞未出现细胞病变,细胞上清液可扩增出BVDV目的条带,并随着培养时间的增加条带亮度逐渐增强;通过基于BVDV 5'UTR、Npro和E2基因序列的遗传进化分析发现,该毒株与Oregon C24V毒株亲缘关系较近,为BVDV-1a型。结果表明,商用BT细胞存在BVDV-1a污染,因此应加强其相关生物制品的BVDV检测,防止BVDV污染扩散。

Twist促进乳腺癌细胞BT-549乳腺细胞小球形成及其迁移

目的探讨Twist基因功能缺失对乳腺肿瘤干细胞样细胞富集及其迁移的影响。方法采用shRNA干扰技术构建Twist基因敲减的BT-549乳腺癌细胞株(BT-549-sh Twist细胞株)和阴性对照细胞株BT-549-sh Vec;采用实时荧光定量PCR和Western blot法验证干扰效率;长程无血清悬浮培养方法富集具有干细胞特性的乳腺癌细胞小球(mammosphere);TranswellTM法检测乳腺癌细胞小球的迁移能力。结果采用shRNA干扰技术成功构建Twist基因敲减的BT-549乳腺癌细胞株BT-549-sh Twist细胞株;BT-549-sh Twist细胞株的mammosphere富集能力和迁移能力减弱。结论 Twist促进BT-549乳腺癌乳腺细胞小球形成及其迁移。

丁酸钠对人脑多型性胶质母细胞瘤细胞系BT-325的诱导分化

目的 研究丁酸钠体外诱导人脑多型性胶质母细胞瘤细胞系 BT-325细胞的分化。方法 以 1mmol/L丁酸钠处理 BT-325细胞 ,测定细胞生长曲线 ,流式细胞术分析细胞周期， Western blot分析 BT-325中 GFAP的表达变化 ,鉴定细胞的分化状态。结果 BT-325细胞经丁酸钠诱导 6～ 8 d后，出现明显的分化特征：胞体显著增大，贴壁明显，细胞伸出多个突起，与相邻的细胞接触，且有接触抑制现象；细胞生长显著受抑 ,80％的细胞被阻断在 G1和 S期；胶质纤维酸性蛋白的含量明显增加。结论 经 1mmol/L丁酸钠处理后 ,人脑多型性胶质母细胞瘤细胞系 BT-325细胞发生一定程度的分化。

不同胃癌细胞系中B7-H1分子的表达水平及定位

目的通过检测胃癌细胞系SGC7901/VCR、SGC7901和BGC-823,以及永生化胃上皮细胞系GES中B7-H1的表达,探讨B7-H1与胃癌的发生及多药耐药(MDR)的关系。方法上述细胞系培养于含10%灭活胎牛血清的RPMI-1640培养基中,利用RT-PCR技术、细胞免疫化学染色以及细胞免疫荧光染色技术与流式细胞术检测4种细胞系中B7-H1 mRNA与B7-H1蛋白的表达情况,并比较其在4种细胞系中的表达强度。结果B7-H1 mRNA在4种细胞系中均有表达,表达强度按照GES-1、BGC-823、SGC-7901、SGC-7901/VCR的顺序递增;细胞免疫化学染色与免疫荧光染色表明,B7-H1蛋白主要表达在上述细胞的细胞膜和少量细胞浆中,结合流式细胞术检测进一步证实,B7-H1蛋白在4种细胞系中的表达结果与mRNA的表达一致。结论B7-H1表达在胃上皮细胞上,可能通过抑制机体免疫反应,促进胃癌细胞生长及MDR基因表达。

十二碳烯酸对人乳腺癌细胞株BT-20环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷水平的影响

目的观察十二碳烯酸对人乳腺癌细胞株BT-20增殖及其环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)水平的影响。方法选用甘肃地产猫儿眼(Euphorbia kansui L.),经提取分离制得十二碳烯酸。人乳腺癌细胞株BT-20传代培养后,分别给予0.2、0.6、1.8 mg/L 3个浓度的十二碳烯酸培养48 h作为实验1、2、3组;每孔加5-Fu(10 mg/L,PBS液配制)20μl培养48 h作为5-Fu组;加等量PBS液培养48 h作为空白对照组。用MTT法检测各组细胞的增殖抑制率,用放射免疫法检测各组细胞的cAMP、cGMP含量,观察十二碳烯酸对人BT-20细胞cAMP、cGMP水平的影响。结果经给予不同液体培养48 h后,与对照组(细胞增殖抑制率为0)比较,实验1、2、3组和5-Fu组人乳腺癌细胞株BT-20的增殖抑制率分别为57.15%、75.87%、88.78%和81.73%(P均<0.01);c AMP含量分别增加了13.23%、25.96%、47.59%和34.39%(P均<0.01);cGMP含量分别降低了12.59%、19.29%、33.49%和22.47%(P<0.05,P<0.01);c AMP/c GMP比值分别增加了29.32%、55.77%、121.55%和72.59%(P<0.05,P<0.01)。结论十二碳烯酸具有抑制人乳腺癌细胞株BT-20增殖和升高c AMP/c GMP比值的作用。