用基因枪法将Bt杀虫基因导入玉米自交系的研究

利用PDS1000/氦气基因枪将人工合成的Bt基因导入玉米自交系340,8902,吉853,Mo17等的愈伤组织,在含有除草剂Basta2～5mg/L的培养基上筛选与分化。经3轮的除草剂筛选获得1840块抗性愈伤组织,再生860个植株。Southernblot分析证明,3个植株中整合有Bt基因。

高温对转基因抗虫棉中Bt杀虫基因表达的影响

Bt抗虫棉中Bt杀虫基因能否稳定表达是影响转基因抗虫棉应用前景和商品化生产的重要因素。以转基因双价抗虫棉139-20的R5代材料,通过不同温度处理,研究温度处理对Bt杀虫基因表达的影响。结果表明,温度变化影响抗虫棉早期的生长发育和Bt杀虫基因的表达,从而影响了抗虫棉生长发育过程中Bt杀虫蛋白含量降低的时间。高温处理后可使Bt杀虫基因在生长发育期中的沉默时间提前,导致Bt杀虫蛋白含量急剧降低,具体原因可能是由于转录后水平的基因表达调控,引起特异Bt杀虫基因mRNA的降解。因此,在生产实际中,应予以提前采取措施,预防高温期棉铃虫危害。

Bt杀虫基因与Bt转基因抗虫植物研究进展

苏云金杆菌是一类非常重要的昆虫病原体，它能产生特异性的杀虫结晶蛋白，对农业上和生物医学上的许多有害的昆虫有毒杀作用，这些害虫包括鳞翅目、双翅目、鞘翅目、膜翅目、螨类和线虫。近三十年来，以苏云金杆菌为基础的生物杀虫剂已在世界范围内商业化用于防治重要经济作物的害虫。近年来有关Ｂｔ基因的遗传、分子生物学和基因工程已取得显著进展。本文对苏云金杆菌杀虫晶体蛋白基因的分类和杀虫机理及用该类基因构建的工程转基因植物研究状况作一简要综述，同时对Ｂｔ基因工程存在的潜在问题和解决途径作了简单的探讨。

根癌农杆菌介导Bt杀虫基因对花椰菜的转化初报

采用 Ti质粒 p KSB带有 Bt杀虫蛋白基因、NPT 选择标记基因及 GUS基因 ,通过根癌农杆菌 L BA40 44菌株的介导 ,将 Bt杀虫基因导入花椰菜品种中。试验以花椰菜下胚轴为外植体 ,将下胚轴切段置于分化培养基 (MS+ 6 - BA1 .0～ 2 .0mg/L + NAA 0～ 0 .5 mg/L)上 ,对影响转化的种种因素进行了试验。得到了转化的愈伤组织及再生植株 ,用组织化学法检测 GUS活性 。

Bt杀虫基因专利保护现状与趋势

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)能产生多种对昆虫有特异活性的杀虫晶体蛋白,这些毒蛋白由cry或cyt基因编码。目前Bt杀虫基因已经广泛应用于转基因抗虫作物并且取得了巨大的经济、社会和生态效益。Bt杀虫基因的巨大市场价值引起国内外相关研究机构和企业的高度关注,并且利用知识产权将这些基因和技术转化为自己独占的权利。本文主要分析Bt杀虫基因的克隆命名情况,并对其中受专利保护的基因进行统计分析,借此为我国在转基因技术研发、产业化应用过程中,合理有效地规避知识产权陷阱,有效利用Bt资源提供决策参考。

Bt杀虫基因在桑粒肩天牛幼虫肠道内生优势菌中的转化研究

桑粒肩天牛(Apriona germariHope,Ag)幼虫是一种营钻蛀性生活的重要林业害虫,通过传统纯培养、生理生化鉴定和16SrDNA分子生物学分析等方法分离、鉴定出其肠道优势内生菌溶血葡萄球菌(Staphylococcus haem olyticus,S.haem olytic-us)Ag06菌株和人葡萄球菌(Staphylococcus hom is)Ag08菌株。从中筛选菌株S.haem olyticusAg06进行质粒消除后作为出发菌株,利用电转化技术将含有对鞘翅目昆虫具专一性毒力B t杀虫基因cry3A的Escherichia coli-Bacillus thuringiensis穿梭表达质粒pHT305 a和pHT7911分别转入其中。经质粒稳定性试验、转化子生长特性测试等分析,结果显示cry3A基因已经成功转入Ag幼虫的优势内生菌溶血葡萄球菌中。

用花粉管通道法将Bt杀虫基因导入玉米自交系的研究

本文利用花粉管通道技术 ,以生产上优良玉米自交系 792 2、3 4 0、4 4 4、4 112、吉 85 3、890 2、吉 83 5、吉 84 6、Mo17为材料 ,将Bt杀虫蛋白基因导入这 9个玉米自交系中 ,在D1代对转基因的 80 0株植株进行PPT( 3 0 0X)筛选 ,转基因植株成活率为 3 0 % ,对其中 60株进行PCR分子检测 ,得到 3株抗性转化植株 ,证明目的基因已转入玉米中 ,转化率为 0 3 75 %。

Bt杀虫基因在转基因双价抗虫棉中的整合与遗传稳定性

Bt抗虫棉中Bt杀虫基因的表达与遗传稳定性对抗虫棉的品种培育和商品化生产是至关重要的. 利用转基因双价抗虫棉R3, R4及R5材料基因组DNA, 然后采用GFMCryIA基因的PstⅠ酶切片段做探针, 进行Southern杂交分析, 研究Bt杀虫基因在双价抗虫棉中棉所19材料基因组中的整合、拷贝数及遗传稳定性. 结果表明, 转基因抗虫棉和阳性对照经HindⅢ酶切, Southern blot均出现了约4.7 kb的杀虫基因阳性带, 从而在分子水平上证实了杀虫基因在棉花基因组中的整合, 并且存在比较完整. 利用在杀虫基因中只有一个酶切位点的XhoⅠ酶切后, 阳性对照出现了预期大小的17.7 kb的阳性带, 而双价转基因抗虫棉R3, R4及R5材料均出现了分别为约17.7, 8.0, 5.5和4.7 kb的4条阳性带. 初步结论是:外源Bt杀虫基因在双价抗虫棉中棉所19材料基因组中至少有4个拷贝, 这4个拷贝中很有可能有一个以上能够稳定遗传和表达. 该研究结果为以后的双价抗虫棉品种培育及商品化生产提供了依据.

农杆菌介导将Bt杀虫蛋白基因导入优良玉米自交系的研究

以杂交育种中广泛使用的优良玉米自交系 34 0、4112为材料 ,用带有质粒pGBIL0 4(Pactin -Bt-Tnos)的根癌农杆菌LBA44 0 4转化其幼胚及其初始愈伤组织 ,共培养 3天后 ,在含PPT的培养基上连续筛选培养 3代 ,然后分化获得再生植株。PCR检测证明目的基因已整合到再生植株的基因组中。实验结果表明幼胚预培养后形成的新鲜的初始愈伤组织是比较适宜的转化受体 ,结果还发现将共培养温度降到 2 2℃可以提高农杆菌介导的玉米遗传转化的筛选频率。

转基因抗虫油菜中Bt杀虫蛋白基因稳定遗传和高效表达及抗虫性研究

通过对转 Bt杀虫蛋白基因油菜植株的后代进行卡那霉素抗性分析和 PCR技术检测 ,结果表明 :Bt杀虫蛋白基因是以单拷贝、杂合地整合到转基因植株 (T0 1、T0 2、T0 3、T0 5、T0 6、T0 7、T0 8)的基因组中 ,并稳定地遗传。EL ISA检测表明 :在第 3～第 9叶期 Bt杀虫蛋白基因在转基因油菜植株中高效地表达 ,Bt杀虫蛋白的表达量为 170～ 2 6 0 ng/ 2 5mg鲜叶 ,占植物可溶性蛋白的 0 .0 6 7%～ 0 .10 5 % ,其抗虫效果高达 72 .0 %～ 94 .4 %。但从第 11叶期后 Bt杀虫蛋白表达量显著地降低 ,只有 7～ 5 0 ng/ 2 5 mg鲜叶 ,占植物可溶性蛋白的 0 .0 0 3%～ 0 .0 2 %。

转Bt杀虫蛋白基因的抗棉铃虫棉花新种质

采用花粉管通道途径,将合成的 Bt 杀虫蛋白基因导入棉花优良品种泗棉3号和中棉所12号,获得了转基因植株。组织化学分析表明,GUS 标记基因已在 R_1代植株中得到表达。据对 GUS 阳性转基因棉株的 PCR 分析结果,证明 Bt 杀虫蛋白基因出现在 R_1代中,并通过自交传递至 R_2代。经鉴定,获得了5株对棉铃虫幼虫有高度毒杀作用的 R_1代单株S545、S591、S636、S1001(泗棉3号+Bt/GUS)及 Zh1109(中棉所12号+Bt/GUS),棉铃虫幼虫致死率分别达到91.6%、93.8%、92.3%、85.7%、75.0%。并由 R_1代自交后形成 R_2代抗虫棉群体,表明获得了抗棉铃虫棉花新种质。

以基因枪法将Bt杀虫蛋白基因导入常规玉米自交系的研究

以生产上大面积使用的优良玉米自交系 792 2为材料 ,以来源于其幼胚的Ⅱ型胚性愈伤为受体 ,经预实验选择标准制弹用量一半的金粉 ,通过基因枪轰击法 ,将Bt杀虫蛋白基因转入其细胞中 ,并再生了大量的转基因植株。抗性植株再生频率为 78 40 % ,PCR分子检测证明目的基因已转入玉米中 ,转化频率为 3 0 9%。

农杆菌介导法将Bt杀虫蛋白基因导入玉米自交系的研究

利用β 葡萄糖苷酸酶(gus)基因的瞬时表达和稳定表达对农杆菌转化玉米愈伤组织的条件进行优化,通过用带有Bt抗虫基因和bar抗除草剂基因的根癌农杆菌LBA4404(ACT)转化玉米自交系7922、H99和P2的胚性愈伤组织,获得了抗性愈伤组织,并分化出植株。PCR检测初步证明Bt杀虫蛋白基因已整合到玉米再生植株中。

Bt杀虫蛋白基因导入新疆棉花获得抗虫转基因植株

通过花粉管通道法将人工全序合成的Ｂｔ杀虫蛋白基因导入新陆早４号和Ｃ６５２４两品种中，收获注射过Ｂｔ杀虫蛋白基因的棉花种子２万余粒。经棉铃虫饲喂的抗虫性生物检测，得到高抗虫的１８株新陆早４号转化苗和３６株Ｃ６５２４转化苗；以Ｂｔ基因的一对引物进行ＰＣＲ分析，５４株抗棉铃虫的转化棉苗均扩增出部分Ｂｔ杀虫蛋白基因的目标带。未转化的对照棉苗则无此条带，证实Ｂｔ杀虫蛋白基因已整合到转化抗虫棉株的染色体上，首次获得了新疆转目的基因的高效抗虫棉。

欧美杨108号转蜘蛛杀虫肽与Bt毒蛋白嵌合基因的研究

以欧美杨108号为外植体材料,利用农杆菌介导法成功地将抗虫基因(蜘蛛杀虫肽+B t毒蛋白的嵌合基因)导入受体中。通过PCR检测,凝胶电泳结果显示8个卡那霉素抗性芽中,6个存在目的基因;经PCR-Southern印迹杂交检测,阳性率为50%,进一步表明目的基因成功整合到欧美杨108号基因组内。

转Bt杀虫蛋白基因植物及其抗虫性研究进展

利用遗传工程技术将苏云金杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ Ｂｅｒｌｉｎｅｒ简称Ｂｔ）杀虫蛋白基因导入植物是近年来的研究热点，本文就Ｂｔ基因的转化及其在植物中的表达与抗虫效果、转Ｂｔ基因植物的产量及品质以及存在的风险与安全性等方面的研究进展作一综述．

山新杨转Bt+蜘蛛杀虫肽基因的分析

以山新杨(Populus davidiana Dode×P.bollena Lauche)为受体材料,在筛选遗传转化条件的基础上,利用农杆菌介导叶盘转化法进行了Bt+蜘蛛杀虫肽基因转化研究。结果表明:在叶片转化时,卡那霉素的临界质量浓度为10mg/L;生根筛选培养时卡那霉素的临界质量浓度为15mg/L;利用质量浓度为600mg/L的头孢噻肟钠脱菌,对叶片生长和不定芽形成影响不大。山新杨遗传转化的工程菌菌液浓度以0.1～0.2(OD600)为最佳,其叶片分化率为73%～77%、抗性芽率为20%～23%;浸染时间以2～5min为宜,其叶片分化率和抗性芽率最高。在共培养基中加入200μmol/L的乙酰丁香酮,其叶片分化率和抗性芽率分别比对照提高1.43倍和2.61倍。对转化植株的PCR检测结果呈阳性,初步证明外源基因Bt+蜘蛛杀虫肽导入并整合进了山新杨基因组。

子房注射法获得转基因抗虫棉植株研究

采用子房注射法将构建在植物表达载体 p BI1 2 1 .1上的 Bt杀虫基因导入棉花品种石远 3 2 1、中植3 72、82 2和辽棉 90 0 1中 ,获得 8株转基因植株。经温室抗虫性鉴定 ,8株转基因植株对棉铃虫都表现出较好的抗性。同时对这 8棵棉株叶片进行的 PCR检测结果证明

苏云金杆菌抗虫基因cryIAc转化辣椒的研究

通过农杆菌介导法将杀虫结晶蛋白基因cryIAc导入到辣椒子叶外植体中,经卡那霉素筛选、组织化学法检测GUS活性以及PCR、Southern杂交分析证实cryIAc基因已整合进辣椒核基因组中。

转Bt基因植物中外源基因时空动态表达的研究现状

在转Bt基因植株中 ,外源基因的时空动态表达对于害虫的防治和转基因安全评价管理具有重要意义。利用生物测定法和酶联免疫吸附测定法 (ELISA) ,对植物不同组织在同一发育阶段、同一组织在不同的发育阶段以及不同转基因植株的外源基因的时空动态表达进行研究。本文综述了转基因植物中外源基因时空动态表达的研究进展和现状。