干扰ClC-2基因表达对胶质瘤BT-325细胞生长的影响

目的观察抑制容积调控氯通道ClC-2基因的表达对胶质瘤BT-325细胞生长的影响。方法设计和构建两个针对ClC2基因的小干扰RNA(siRNA)重组表达载体,用脂质体LipofectamineTM2000介导转染,将空载体质粒和两个重组质粒分别转染入BT-325细胞(依次为对照组、PP1组和PP2组);通过RTPCR检测ClC2基因mRNA表达变化;MTT分析检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期。结果与对照组相比较,干扰组ClC2基因的mRNA水平明显降低,细胞生长速度明显减慢,细胞周期进程被阻滞在G1期。结论干扰胶质瘤细胞系BT-325细胞的ClC-2基因表达可以抑制细胞的生长,提示ClC2基因可能成为控制胶质瘤恶性生长的新靶点。

佛波醇对大鼠大脑皮层突触体及人多形胶质瘤细胞株BT-325摄取谷氨酸的促进作用

采用大鼠大脑皮层突触体、人神经母细胞瘤细胞株SK－N－SH及人多形胶质瘤细胞株BT-325作氚标谷氨酸高亲和摄取实验，探讨蛋白激酶C（PKC）及蛋白激酶A（PKA）对于神经元性及胶质细胞性谷氨酸（Glu）摄取的影响。结果：（1）PKC激活剂（PMA，佛波醇之一种）对于突触体及BT－325细胞摄取Glu有促进作用，但对于SK－N－SH摄取Glu没有影响；PKC抑制剂（SPH）能抑制PMA的促进效应。（2）PKA激活剂（db-cAMP）对于突触体、SK－N－SH及BT－325细胞摄取Glu均无影响。这些结果表明PKC对于胶质细胞性Clu摄取可能具有促进作用，而对于神经元性Glu摄取不排除有一定影响的可能；PKA对于Glu摄取（包括神经元性及胶质细胞性）没有影响。

转染P21 WAF1基因对BT-325细胞端粒酶表达的影响

目的 :观察外源性p2 1WAF1基因对BT - 32 5细胞的作用 ,探讨p2 1WAF1表达水平的改变对细胞端粒酶活性的影响。方法 :经脂质体介导的方法将PCEP -WAF1质粒导入BT - 32 5细胞中 ,细胞克隆转移扩大培养后 ,采用TRAP -PCR -ELISA、TUNEL和电镜等技术检测外源性p2 1WAF1基因对BT - 32 5细胞端粒酶活性和细胞凋亡的作用。结果 :较对照组相比 ,转染外源性p2 1WAF1基因的BT - 32 5细胞端粒酶表达水平显著下降 ,伴有显著细胞凋亡现象。结论 :外源性p2 1WAF1基因的表达可促进BT - 32 5细胞端粒酶活性降低 ,诱发细胞显著凋亡。提示端粒酶的活性表达可能与细胞周期调控存在密切联系。

VM-26对人多形性胶质母细胞瘤BT-325细胞增殖的影响

目的 研究替尼泊甙 (VM -2 6)对人多形性胶质母细胞瘤BT -3 2 5细胞增殖的影响。方法 应用免疫细胞化学方法 ,观察BT -3 2 5细胞经不同剂量 (1μg/ml和 5μg/ml)VM -2 6作用后的不同时间 (48小时、72小时 )克隆形成率的变化以及PCNA、CyclinD1表达的改变。结果 克隆形成率实验显示VM -2 6作用后克隆形成率降低 ,与对照组比较差别显著 (P <0 .0 1) ;对照组PCNA和CyclinD1均为强阳性 ;经VM -2 6作用后 ,PCNA和CyclinD1表达均受到显著的抑制 ,尤以 5μg/ml、72小时组效果最佳 ,与对照组比较差别显著 (P <0 .0 1)。结论 VM -2 6可显著抑制BT -3 2

丁酸钠对人脑多型性胶质母细胞瘤细胞系BT-325的诱导分化

目的 研究丁酸钠体外诱导人脑多型性胶质母细胞瘤细胞系 BT-325细胞的分化。方法 以 1mmol/L丁酸钠处理 BT-325细胞 ,测定细胞生长曲线 ,流式细胞术分析细胞周期， Western blot分析 BT-325中 GFAP的表达变化 ,鉴定细胞的分化状态。结果 BT-325细胞经丁酸钠诱导 6～ 8 d后，出现明显的分化特征：胞体显著增大，贴壁明显，细胞伸出多个突起，与相邻的细胞接触，且有接触抑制现象；细胞生长显著受抑 ,80％的细胞被阻断在 G1和 S期；胶质纤维酸性蛋白的含量明显增加。结论 经 1mmol/L丁酸钠处理后 ,人脑多型性胶质母细胞瘤细胞系 BT-325细胞发生一定程度的分化。

吐温-80合并温热对人多型性胶质母细胞瘤细胞系BT-325的诱导分化

目的 研究吐温 - 80合并温热对BT - 32 5人多型性胶质母细胞瘤细胞系BT - 32 5细胞的分化诱导效应。方法应用免疫细胞化学等方法 ,观察BT - 32 5细胞经吐温 - 80合并 4 1℃温热作用后 (2 4小时 )胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)基因的表达 ;并通过克隆形成率及测定细胞生长曲线等方法观察细胞恶性增殖能力。结果 (1)BT - 32 5细胞经吐温 - 80合并温热作用后 ,出现明显的分化特征 :胞体显著增大 ,贴壁明显 ,细胞突起增多 ,与周围细胞接触 ,且有接触抑制现象 ;GFAP的含量明显增加 ;(2 )克隆形成率显示合并作用后克隆形成数减少 ,与对照组比较有显著差异 (P <0 .0 1)。结论 吐温 - 80合并 4 1℃温热作用可显著抑制BT - 32 5细胞恶性增殖 ,并有促进GFAP表达的效应 ,显示吐温 - 80合并温热对BT - 32

ISOLATION AND IDENTIFICATION OF cDNA FRAGMENTS AND FULL-LENGTH cDNA DIFFERENTIALLY EXPRESSED IN HUMAN GLIOBLASTOMA CELL LINE BT-325 VERSUS ALL-TRANS RETINOIC ACID INDUCTION

Objective.To investigate the differentiation process of the human glioblastoma cells. Methods.Differential display reverse transcribed-PCR(DDRT-PCR) was used to isolate the genes differentially expressed in control and all-trans retinoic acid treated human glioblastoma cell line BT-325.Routine method of cDNA library screening was performed to clone full-length cDNA. Results.Thirty-six RT-PCR reactions were performed and 64 differentially expressed fragments were recovered,amplified and cloned.Of them,46 ESTs were sequenced and delivered into the GenBank.The homology comparison using BLAST algorithm revealed that 22ESTs are highly homologous with the known genes and many of them play important roles in the cell differentiation progress.A dot-blot hybridization was conducted to certify the differentiation expression.The result showed that 27 EST clones are expressed at different level in control and all-trans retinoic acid treated BT-325 cells.A full-length cDNA was cloned using the EST-HGBB098. Conclusion.DDRT-PCR was a simple and effective method to serially analyze the differentially expressed genes.