Beclin1基因增强三阴性乳腺癌细胞BT-549对多柔比星的敏感性

目的:探讨Beclin1基因对三阴性乳腺癌细胞BT-549增殖及多柔比星作用于癌细胞的影响。方法:脂质体法分别将质粒pDsRed-C1、pDsRed-C1-Beclin1转染于人三阴性乳腺癌BT-549细胞株。转染后一组用多柔比星处理,另一组不做处理。MTT法分析Beclin1过表达对BT-549细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:多柔比星处理前后,Beclin1组细胞增殖均慢于阴性对照组和空白组细胞(各P<0.01);细胞凋亡的变化:多柔比星处理前转染pDsRed-C1-Beclin1的BT-549细胞凋亡率为(8.81±1.45)%,高于转染pDsRed-C1细胞组和空白组(P<0.05),多柔比星处理后,Beclin1组细胞的凋亡率为(14.3±1.09)%,亦高于阴性对照组和空白组(P=0.00)。结论:Beclin1基因过表达抑制BT-549细胞的增殖,增强癌细胞对多柔比星的敏感性。

beclin 1过表达对三阴性乳腺癌BT-549细胞生长抑制作用观察

目的:观察自噬调控基因beclin 1过表达对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)BT-549细胞的体外生长影响。方法:应用荧光显微镜观察细胞转染效率,采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测细胞beclin 1mRNA和蛋白表达水平,采用吖啶橙染色观察细胞自噬情况,采用MTT检测细胞的增殖率,采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期情况。结果:细胞转染48h实验组和对照组的细胞转染效率均>45%,qRT-PCR提示实验组细胞beclin 1mRNA 2-ΔΔCt值为16.806±2.920,较空白组(0.853±0.025)显著升高,F=88.733,P<0.001;蛋白质印迹法提示实验组细胞beclin 1/GAPDH灰度值比为1.050±0.056,较空白组(0.640±0.006)显著升高,F=137.213,P<0.001;吖啶橙染色提示实验组细胞发生自噬的比例为33%,显著高于空白组(15%),χ2=8.985,P=0.011;MTT法提示实验组细胞增殖率在24h(0.152±0.019)、48h(0.254±0.029)、72h(0.322±0.027)和96h(0.357±0.035)均显著低于空白组24h(0.202±0.023)、48h(0.308±0.030)、72h(0.446±0.032)和96h(0.851±0.014),P值均<0.05;72h实验组细胞凋亡率为(6.560±0.593)%,显著高于空白组(2.533±0.216)%,F=107.085,P<0.001;实验组G0/G1期为(63.267±3.650)%,显著高于空白组(51.533±5.152)%,F=6.566,P=0.027。结论:自噬调节基因beclin 1过表达可显著抑制BT-549细胞的体外增殖水平。

Twist促进乳腺癌细胞BT-549乳腺细胞小球形成及其迁移

目的探讨Twist基因功能缺失对乳腺肿瘤干细胞样细胞富集及其迁移的影响。方法采用shRNA干扰技术构建Twist基因敲减的BT-549乳腺癌细胞株(BT-549-sh Twist细胞株)和阴性对照细胞株BT-549-sh Vec;采用实时荧光定量PCR和Western blot法验证干扰效率;长程无血清悬浮培养方法富集具有干细胞特性的乳腺癌细胞小球(mammosphere);TranswellTM法检测乳腺癌细胞小球的迁移能力。结果采用shRNA干扰技术成功构建Twist基因敲减的BT-549乳腺癌细胞株BT-549-sh Twist细胞株;BT-549-sh Twist细胞株的mammosphere富集能力和迁移能力减弱。结论 Twist促进BT-549乳腺癌乳腺细胞小球形成及其迁移。

Beclin 1基因过表达对人乳腺癌细胞BT-549裸鼠皮下成瘤生长影响研究

目的人乳腺癌BT549细胞缺失自噬基因Beclin 1是一种抑癌基因,过表达Beclin 1诱导自噬可抑制肿瘤的形成和发展。本研究预通过重组慢病毒载体转染Beclin 1基因,以观察过表达Beclin 1对裸鼠人乳腺癌BT549细胞皮下成瘤生长情况的影响。方法以重组慢病毒载体pLenO-GTP-Beclin 1感染BT549细胞为实验组(6只),以对照慢病毒颗粒(pLenO-GTP-Vecto)感染BT549细胞为阴性对照组(6只),不做处理BT549细胞(缺失Beclin 1基因)为空白对照组(6只)。3组转染细胞分别接种至裸鼠皮下,构建人乳腺癌BT549细胞裸鼠皮下成瘤模型。观察记录裸鼠成瘤情况并绘制肿瘤生长曲线。裸鼠饲养28d后脱臼法处理,剥离瘤体,测定肿瘤体积和质量。用RT-PCR法、蛋白质印迹法及免疫组化法检测皮下成瘤中Beclin 1基因表达情况。结果慢病毒载体构建成功,裸鼠接种各组细胞后在第7天均有肿瘤形成,实验组的瘤体平均体积为(79.66±42.52)mm3,肿瘤生长速度明显慢于阴性对照组的(358.62±58.83)mm3和空白对照组的(400.40±121.45)mm3,差异有统计学意义,F=27.34,P<0.05;实验组、阴性对照组和空白对照组的瘤体平均重量分别为(0.16±0.06)、(0.81±0.32)和(0.93±0.37)g,差异有统计学意义,F=12.749,P<0.05。RT-PCR法检测显示,实验组Beclin 1 mRNA的相对表达量为31.11±12.77,明显高于阴性对照组的0.66±0.02和空白组的1.00±0.07,差异有统计学意义,F=16.86,P<0.05;实验组Beclin 1蛋白表达量为0.212±0.078,明显高于阴性对照组的0.044±0.006和空白对照组的0.043±0.009,差异有统计学意义,F=27.418,P<0.05。实验组中Beclin 1蛋白的阳性表达率为46.7%,明显高于阴性对照组的10.0%和空白对照组的16.7%,差异有统计学意义,χ2=12.34,P<0.01。结论 Beclin 1基因过表达能够明显抑制裸鼠人乳腺癌BT549细胞皮下成瘤的生长,Beclin 1的表达量与肿瘤成长呈负相关。

条索状透明质酸在乳腺肿瘤细胞BT549化疗耐药中的作用

目的观察透明质酸的新存在形式——条索状透明质酸在乳腺肿瘤细胞BT549表面的表达情况，探索该结构在BT549细胞耐受紫杉醇杀伤中的作用。方法采用免疫细胞荧光技术观察BT549细胞表面条索状透明质酸的分布情况；分别用流式细胞术和RT—PCR检测透明质酸的条索状结构被破坏前后，紫杉醇诱导的肿瘤细胞凋亡、坏死率的改变以及凋亡相关基因c-junmRNA表达的改变。结果BT549细胞天然表达大量的条索状透明质酸，条索状结构被破坏后，紫杉醇诱导BT549细胞的凋亡和坏死率显著增高（P〈0．05），凋亡基因c扣n的表达水平也显著增高（P〈0．05）。结论乳腺肿瘤细胞BT-549高表达条索状结构的透明质酸，这种透明质酸的新存在形式可能在BT549细胞耐受紫杉醇的杀伤过程中起到一定的保护作用。