玉米AGPasebt2与GPN1蛋白互作的双分子荧光互补技术研究

【目的】解析玉米淀粉合成限速酶ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase-bt2)与糖酵解关键酶甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GPN1)在植物体内是否存在相互作用。【方法】首先克隆获得AGPase-bt2和GPN1基因,然后采用双分子荧光互补技术(BiFC),构建326-CYCHA-AGPase-bt2和326-CYNEE-GPN1双分子荧光表达载体,转化农杆菌EHA105,并用2种载体共同瞬时侵染烟草叶肉细胞,48h后在激光共聚焦显微镜下观察AGPase-bt2与GPN1的相互作用。【结果】AGPase-bt2基因长1 428bp,GPN1基因长1 497bp。双酶切鉴定结果表明,326-CYCHA-AGPasebt2、326-CYNEE-GPN1载体构建正确;PCR结果证实,植物表达载体成功转化到农杆菌EHA105中;携带有共转化基因的烟草叶肉细胞在激光共聚焦显微镜下观察到明显的黄色荧光现象,且黄色荧光与叶绿体自发的红色荧光位置重合。【结论】AGPase-bt2与GPN1在植物细胞中真实地存在蛋白互作。

玉米sbe1和bt2基因SNPs位点的筛选

【目的】本研究针对玉米淀粉合成相关基因sbe1和bt2获得SNPs位点并设计引物,进行HRM-PCR分型,根据结果找到相关基因对玉米淀粉合成方面的调控机理,从而为玉米育种的遗传改良和分子设计育种提供理论参考。【方法】本文提取普通玉米H21和紫糯96-619的基因组DNA后进行PCR扩增,测序并拼接出玉米淀粉合成相关基因bt2,sbe1的全长序列。【结果】进行亲本间序列比对,找到了20个SNPs位点,通过高分辨率熔解曲线(HRM),成功对171个高世代回交群体的SNPs位点分型。【结论】运用试验分析,总结了利用直接测序法和HRM进行SNPs位点的筛选和验证的优缺点,以期为大规模SNPs筛选技术提供参考。

牛栏江象鼻岭水电站BT2崩塌堆积体稳定分析与处理

由于区域地质活动、风化等自然地理现象，会造成山体崩塌重新堆积，形成的不良地质体，影响主体工程安全。对于该问题，需要对其边坡稳定性进行合理计算并处理。本文针对牛栏江象鼻岭水电站BT2崩塌堆积体进行了稳定性的研究与分析，并提出处理措施。

玉米sh2和bt2基因的克隆及胚乳特异表达载体的构建

采用Trizol剂试提取玉米胚乳总RNA,设计相关引物,采用反转录PCR方法克隆腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶编码基因bt2和sh2,并克隆玉米胚乳特异表达的isa基因启动子,利用酶切连接方法,构建bt2和sh2基因的单子叶植物胚乳特异表达载体。结果表明,bt2和sh2基因正向插入胚乳特异的ISA启动子和T-nos终止子之间,成功构建p3301-ISA-bt2-T35S和p3301-ISA-sh2-T35S植物胚乳特异表达载体。

一个新的玉米Bt2基因突变体的遗传分析和分子鉴定

玉米籽粒发育调控机制的研究对于玉米产量与品质性状的遗传改良十分重要。本研究鉴定了一个新的转座子插入的籽粒皱缩突变体5601Q,遗传分析表明其籽粒缺陷稳定遗传且为单基因隐性突变。构建其B73背景的F_(2)分离群体,通过图位克隆将该突变定位于玉米4号染色体上60.19~62.58 Mb的区间。基因注释分析发现,区间内存在一个已报道参与玉米籽粒发育的基因BRITTLE ENDOSPERM2(Bt2),其编码玉米胚乳淀粉合成途径中的一个限速酶——腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(ADP-glucose pyrophosphorylase,AGPase)的小亚基。籽粒储藏物质分析表明,该突变体百粒重及淀粉含量显著降低,但可溶性糖含量增加为野生型的4.67倍。利用本实验室已确定的Bt2基因突变体1774与5601Q进行等位测验,确认了5601Q是Bt2的一个新的等位突变体。分子鉴定表明,5601Q突变体中Bt2基因的第2个外显子存在一个Mutator 19转座子的插入。综上,5601Q籽粒发育缺陷是由Bt2基因的突变导致,本研究为解析玉米Bt2基因在胚乳储藏物质积累中的作用机制提供了新的种质资源。

万家水库库岸稳定性评价及蓄水后塌岸预测分析

以万家中型水库为研究对象,对推荐段坝址岸坡地质结构特征进行了总结,在此基础上根据岸坡地质结构特征和库岸变形破坏特征,对岸坡稳定性进行了分类评价,评价结果表明:稳定条件好库岸累计长占总长的36.7%,稳定条件较好库岸占总长的59.2%,稳定条件较差库岸占总长的4.1%,库岸稳定整体较好,根据库岸稳定性进一步分析了水库蓄水后形成BT_(1)和BT_(2)崩塌堆积体位置、地质特征、塌岸量及稳定性情况,为水库修建及后期水库安全运行提供了保障,从而避免对坝址、库尾居民和农田造成影响,造成水库淤积。

柴胡皂甙(I)对胰腺腺泡的拟膜受体激动剂作用

应用检测淀粉酶分泌和单细胞[Ca2 + ]i 的技术 ,研究了Bt2-cGMP和GDP对柴胡皂甙(I)[SA(I)]和CCK -8促大鼠胰腺腺泡酶分泌和增加[Ca2 + ]i 的抑制作用。Bt2-cGMP对SA(I)和CCK -8促酶分泌的抑制有相似的剂量依赖性。Bt2 -cGMP对SA(I)刺激的酶分泌动力学的抑制较对CCK -8滞后并持续。SA(I)诱发的胰腺腺泡单细胞[Ca2 + ]i 的变化与CCK -8的作用有所不同 :[Ca2 + ]i 峰值上升较慢且持续较长 ,并在峰后[Ca2 + ]i 再次升高。GDP亦抑制SA(I)刺激的酶分泌和[Ca2 + ]i 增加的峰植。结果表明 ,SA(I)可激活胰腺腺泡细胞膜受体从而升高[Ca2 + ]i 和促酶分泌。

叶酸和维生素B_(12)减轻高同型半胱氨酸血症诱导的老年大鼠阿尔茨海默样病变

目的:探讨慢性高同型半胱氨酸血症对老年大鼠脑内tau蛋白结构和功能的影响以及其可能机制。方法:选取18月龄健康大鼠,尾静脉注射同型半胱氨酸(Hcy)生理盐水溶液(1.6 mg.kg-1·d-1)制造高同型半胱氨酸血症模型组,在给予Hcy的同时通过饮用水给予叶酸(4 mg·kg-1·d-1)和维生素B12(Vit B12,250g.kg-1·d-1)作为治疗组,单纯注射生理盐水作为对照组,持续28周,Bielschowsky银染观察磷酸化tau蛋白的分布和聚集;Western blotting检测磷酸化tau蛋白、糖原合酶激酶3β(GSK-3β)和蛋白磷酸酶2A(PP2A)的表达。结果:(1)血浆中Hcy水平增高导致神经原纤维样缠结;给予叶酸和Vit B12能够有效减轻缠结;(2)血浆高Hcy水平诱导老年大鼠脑内tau蛋白在Ser199/202和Ser396位点磷酸化水平升高;(3)血浆高Hcy水平激活GSK-3β同时抑制PP2A的活性。补充叶酸和Vit B12有效地缓解了这些激酶和酯酶的活性改变,并下调了tau蛋白Ser199/202和Ser396位点的磷酸化水平。结论:补充叶酸和Vit B12能够有效改善高同型半胱氨酸血症所诱导的tau蛋白阿尔茨海默样病理改变,其机制可能与其抑制GSK-3β活性和激活PP2A有关。

新型无铅铁电陶瓷BaTi_2O_5粉体的制备

采用Sol-gel法,以钛酸丁酯和乙酸钡为主要原料,无水乙醇为溶剂,少量乙酰丙酮为螯合剂,在不同温度煅烧合成了BaTi2O5(BT2)粉体。采用XRD、DTA/TG、FT-IR和SEM对样品进行检测表征。700℃时粉体晶化,800～1 200℃为稳定单相BT2,粉体基本为球形,粒径随温度的升高而增大。

从安大简与上博简合证《孔子诗论》“既曰天也”评的应是《鄘风·君子偕老》

《上海博物馆藏战国楚竹书(一)·孔子诗论》简19“……溺志,既曰天也,犹有怨言”句,已往学者都接受评的是《鄘风·柏舟》“母也天只,不谅人只”,因为《毛传》把“母也天只”释为“母也天也”,所以“只”和“也”可以互用。《安大简(一)·诗经》出版后,“母也天只”句写作“母可天氏”,并没有把“只”字换成“也”。这让人反思“既曰天也”应该是一句好的话,后面不应该接“犹有怨言”。陈萌萌提出《诗经》中这种“AT1BT2”有三组(另二组是“日居月诸”和“猗嗟昌兮”),因为句义的关系,句中的“T1”与“T2”必须用两个不同的语气词,不可能替换为“ATBT”,这就从理论上说明了“母也天只”不能释作“母也天也”。安大简的“母可天氏”则有力地证明了这一点。因此,《上博一》的“既曰天也,犹有怨言”评的应该是《鄘风·君子偕老》,这样解释也和《君子偕老》的内容完全吻合。

GXY-2BT型地质勘探钻机及双层岩芯筒取芯技术在地铁勘察项目中的应用

介绍GXY-2BT型地质勘探钻机与双层岩芯管取芯技术在青岛地铁M1号线工程岩土详细勘察阶段中的应用。青岛地铁M1号线"永年路站~兴国路站"线路穿越牛毛山主体,距地表0.3 m^2.0 m处即揭露中等~微风化硬质岩石,且勘探平均设计孔深达54.6 m。在工民建勘察中广泛应用的XY-1型钻机由于动力配置较差、单层岩芯管采芯率低等问题,难以满足工期及技术要求。为此,选取GXY-2型地质勘探钻机及双层岩芯管取芯技术进行勘探作业,并对其技术性、经济性、工效等指标与XY-1型钻机进行对比分析。现场应用情况及综合指标性能对比分析结果表明,GXY-2型地质勘探钻机及双层岩芯管取芯技术具有更好的现场适用性。

Bt Cry2Ab对美国白蛾的杀虫活性及与几种中肠受体蛋白体外结合特性分析

美国白蛾(Hyphantria cunea)是危害我国蚕区桑树的重要害虫之一,为明确苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫晶体蛋白对其作用机制,本文利用大肠埃希菌表达苏云金杆菌Bt Cry2Ab蛋白,在活性测定基础上进行毒素蛋白与美国白蛾中肠类钙黏蛋白(cadherin)功能区(HcCAD-1、HcCAD-2)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase)HcALP1、HcALP3的结合特性分析。原核表达并纯化的Bt Cry2Ab蛋白用美国白蛾3龄幼虫进行生物测定,对幼虫生长发育抑制作用明显,当质量浓度为224 mg/L时抑制率为71.14%,抑制中浓度为68.44 mg/L。将Bt Cry2Ab毒素分别与美国白蛾HcCAD-1、HcCAD-2、HcALP1、HcALP3重组蛋白进行体外配体印迹试验,Bt Cry2Ab与HcCAD-2、HcALP1重组蛋白发生特异结合,而与HcCAD-1、HcALP3不结合,推测HcCAD-2、HcALP1可能为美国白蛾Bt Cry2Ab蛋白的中肠受体蛋白。

奶粉中维生素B_(12)及叶酸的检测方法对比

本研究通过分析乳粉中维生素B_(12)和叶酸两个项目,运用国外试剂盒方法与国标方法进行比对,试图找出更优、更简便快捷的方法检测乳粉中两种维生素含量。本实验所用上述两种方法,对同一批奶粉中的维生素B_(12)和叶酸这两个项目进行检测。结果表明,无论是对于维生素B_(12)还是叶酸来说,相比于国标文件中使用的传统方法,新兴的微孔板形式的微生物试剂盒法显得更胜一筹。它不仅容易操作,而且数据更精准稳定,平行性更好。

挡位模拟控制系统的研制

为方便对变速箱的换挡性能进行检检测和试验,研制一种能够模拟换挡操作的控制系统。系统主要包括3部分:输入挡位的检测、换挡逻辑控制,电磁阀控制输出。系统以STC10F08XE单片机为核心,用BTS728L2驱动输出控制电磁阀来实现传动系统的换挡操作。经实验验证,系统简单易用,可靠性高,达到了设计要求。

BT303CuS2不锈钢表面氧化物结构的研究

易切削不锈钢BT303CuS2盘条热处理后表面氧化物结构较为复杂,与普通304不锈钢相比酸洗更加困难。为了探明其表面氧化物的结构及影响因素,通过试验的方法测量出不同的热处理温度、时间及炉内气氛状态下BT303CuS2钢表面氧化物种类及结构。试验结果表明,随着固溶处理时间的延长、固溶温度的提高或炉内气氛中氧含量的增加,表面氧化层逐渐增厚,并对后续酸洗工序造成了影响。

Agrobacterium-meditated Genetic Transformation of an Upland Cotton(Gossypium hirsutum cv Coker 310) Using a Novel Bt Gene Cry2Ac

The development of transgenic cotton varieties resistant to bollworms has been a major success of applying plant genetic engineering technology to agriculture,evidenced by phenomenal increase in

解放CA3160PK2BT1型汽车用于运材的试验研究

通过对8辆解放CA3160PK2BT1型汽车两个冬运期的木材运输试验,对该型汽车的可靠性、经济性、维修性、适用性及主要技术经济指标等项目进行了考核。采用的试验方法科学合理,试验数据准确、可靠。对木材运输企业在运材汽车选型及使用经验方面具有重要的理论和使用参考价值。

粉尘螨-壳聚糖疫苗治疗过敏性哮喘小鼠肝脏Bcl-2的表达

目的探讨粉尘螨-壳聚糖疫苗经鼻粘膜免疫治疗过敏性哮喘小鼠肝脏疗效及Bcl-2在肝脏所起的作用。方法用粉尘螨(Dermatophagoides farinae,Der f)提取液致敏、激发BALB/c小鼠,建立哮喘模型。24只BALB/c小鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、粉尘螨治疗组(C组)、粉尘螨-壳聚糖疫苗治疗组(D组)。通过HE染色观察小鼠肝脏炎症变化;用免疫组化检测肝脏巨噬细胞Bcl-2的表达。结果粉尘螨和粉尘螨-壳聚糖疫苗治疗组肝脏炎症病理变化较哮喘模型组明显减轻;哮喘模型组肝脏出现大量巨噬细胞Bcl-2阳性细胞,而两治疗组肝脏阳性细胞较哮喘模型组明显减少。结论粉尘螨-壳聚糖疫苗对过敏性哮喘小鼠的肝脏炎症有治疗作用,效果较粉尘螨免疫治疗组更好,炎症细胞的凋亡在其过程中起到重要作用。

东风日产经典轩逸左侧转向灯失效

故障现象:一辆2015年产东风日产经典轩逸轿车,搭载1.6 L发动机和CVT变速器,行驶里程6万km。用户反映车辆打开左侧转向灯开关,左前、左后及左侧翼子板上的转向灯均不亮,仪表板上的左转向指示灯闪烁,但频率非常高。按下危险报警灯开关,灯光状态无变化。检查分析:维修人员接车后检查转向灯故障现象,与用户描述一致。连接诊断仪检测,无故障码。根据故障现象,推测可能的故障原因有3个灯泡同时烧毁、供电异常、开关异常以及线路异常。3个灯泡同时损坏的几率很小,且此3个灯泡并不共用搭铁,因此暂不考虑搭铁同时故障的可能性。

用几何方法求函数F(t)=(dt+e)/t^2+bt+c的最值

求函数 F(t)=dt+e/t^2+bt+c的最值,已有一些同志谈及,本文将用几何法讨论这个问题,它具有便捷、简单、直观的特点。在F(t)=dt+e/t^2+bt+c中,令y=dt+e…①x=t^2+bt+c…②于是求F(t)的最值,就是求y/x的最值。由①得t=y-e/d代入②则x=(y-e/2)~2+b·y-e/d+c 整理可得(y-2e-bd/2)~2=d^2(x-4c-b^2/4)…③它所表示的是以(1/4(4c-b^2),1/2(2c-bd)为顶点,y=1/2(2c-bd)为对称轴,开口向右的一条抛物线。由于y/x=y-0/x-0,y-0/x-0是坐标为(x,y)的点与坐标原点连线的斜率,于是求y/x的最值,就是求曲线③上的点与坐标原点连线斜率的最值。由切线的意义。