Prefoldin 1对乳腺癌BT474细胞上皮-间充质转化的影响

目的探讨Prefoldin 1(PFDN1)对乳腺癌BT474细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法将PFND1基因RNA干扰真核表达载体和空白对照基因表达载体导入BT474细胞,构建转染组及空白转染组,另设未转染组。通过Transwell侵袭实验和迁移实验检测细胞侵袭和迁移能力,采用real-timePCR和western blot检测EMT标志分子E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达水平。结果转染组PFND1mRNA和蛋白表达显著低于其他两组(P <0.05)。转染组细胞侵袭和迁移能力低于其他两组(P <0.05)。转染组E-cadherin表达明显强于其他两组(P <0.05),N-cadherin、Vimentin表达明显低于其他两组(P <0.05)。结论 PFDN1能够促进乳腺癌BT474细胞EMT转化。

KU004抑制人源乳腺癌BT474裸鼠异种移植模型肿瘤生长的作用

目的探讨KU004对人源乳腺癌BT474裸鼠异种移植模型肿瘤的抑制作用。方法对60只雌性BALB/c裸鼠接种人源乳腺癌BT474细胞,将肿瘤生长至100～160 mm^3的40只裸鼠随机分为模型组(0.5%羟丙基甲基纤维素溶液灌胃)、拉帕替尼组(80 mg/kg拉帕替尼灌胃)、KU004高剂量组(120 mg/kg KU004灌胃)、KU004中剂量组(80 mg/kg KU004灌胃)、KU004低剂量组(40 mg/kg KU004灌胃),每组8只,每天灌胃1次,连续灌胃21 d。分别于给药前以及给药后1 d、4 d、7 d、11 d、14 d、17 d、21 d测量各组裸鼠体重及肿瘤体积,计算相对肿瘤增殖率(T/C)和肿瘤抑制率(inhibition rate,IR)。结果成功建立人源乳腺癌BT474裸鼠异种移植模型。拉帕替尼组、KU004高剂量组、KU004中剂量组、KU004低剂量组裸鼠体重随给药时间延长变化不大,与模型组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。给药期间各给药组TV、RTV均低于与模型组(P<0.01),其中拉帕替尼组与KU004中剂量组TV、RTV比较差异无统计学意义(P>0.05)。拉帕替尼组、KU004高剂量组、KU004中剂量组和KU004低剂量组T/C随给药时间延长逐渐降低,至给药后21 d T/C分别为15.6%、6.9%、11.4%和32.7%,IR分别为85.0%、95.0%、91.0%和67.0%。结论不同剂量KU004均可对人源乳腺癌BT474裸鼠异种移植模型肿瘤生长产生抑制作用,且裸鼠耐受性良好。

调控FOXM1基因对乳腺癌BT474细胞赫赛汀药物敏感性的影响

目的探究调控叉头框转录因子M1(FOXM1)基因对乳腺癌BT474细胞赫赛汀药物敏感性的影响。方法将FOXM1过表达及特异性靶向FOXM1基因的小干扰RNA(FOXM1-siRNA)转染至乳腺癌BT474细胞,将细胞分为上调FOXM1基因组、下调FOXM1基因组和对照组。Western blot检测FOXM1蛋白以及PI3K/AKT信号通路蛋白的表达。MTT法检测不同浓度赫赛汀药物对BT474细胞增殖能力的影响。Transwell实验检测不同浓度赫赛汀药物对BT474细胞迁移、侵袭能力的影响。结果下调FOXM1基因后,FOXM1蛋白的相对表达量明显减少(P<0.05)。上调FOXM1基因组BT474细胞的增殖率、迁移数量、侵袭数量显著高于对照组,且随着赫赛汀浓度的增加其增殖率、迁移数量、侵袭数量逐渐增加,上调FOXM1基因可增强BT474细胞对赫赛汀的耐药性,促进增殖、迁移及侵袭。下调FOXM1基因组BT474细胞的增殖率、迁移数量、侵袭数量显著低于对照组,低浓度的赫赛汀对BT474细胞的增殖、迁移及侵袭能力的抑制程度较弱,高浓度的赫赛汀对BT474细胞的增殖、迁移及侵袭能力的抑制过度,而中浓度的赫赛汀抑制能力介于低、高浓度之间,能够有效抑制BT474细胞增殖、迁移及侵袭,但无抑制过度的表现。不同赫赛汀浓度下下调FOXM1基因组细胞的增殖率、迁移数量、侵袭数量显著低于上调FOXM1基因组。下调FOXM1基因组PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白相对表达量均低于对照组和上调FOXM1基因组(P<0.05)。结论上调FOXM1基因可增强乳腺癌BT474细胞对赫赛汀的耐药性,下调FOXM1基因在中浓度赫赛汀的干预下,可通过作用于PI3K/AKT信号通路,抑制乳腺癌BT474细胞的增殖、迁移及侵袭,从而抑制乳腺癌的发展。

舒芬太尼对BT474细胞恶性生物学行为影响及机制研究

目的探讨舒芬太尼对BT474人乳腺导管癌细胞恶性生物学行为的影响及作用机制。方法体外培养BT474人乳腺导管癌细胞,随机将细胞分为对照组(C组)和舒芬太尼组,C组仅使用1640完全型培养基培养,舒芬太尼组分别给予含不同剂量舒芬太尼[0.1 nmol·L^(-1)(L组),1 nmol·L^(-1)(M组),10 nmol·L^(-1) L(H组)]的1640完全型培养基培养;处理时间24 h。采用平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,血管形成实验检测血管生成能力,Western blot实验检测细胞生长、转移和上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的表达。结果与C组比较,舒芬太尼组细胞克隆形成能力逐渐降低、细胞迁移率和细胞侵袭数逐渐减少(P均<0.05)、血管生成能力逐渐降低且均与浓度呈剂量相关性(P均<0.05);Western blot结果显示,与C组比较,L组MMP-9、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达水平差异均无统计学意义(P均>0.05),M组和H组MMP-9、N-cadherin蛋白表达量下调,E-cadherin蛋白表达量上调(P均<0.05),VEGF与Vimentin蛋白随舒芬太尼组干预剂量浓度的增加,蛋白表达均呈下调改变(P均<0.05)。结论舒芬太尼可抑制BT474人乳腺导管癌细胞生长、转移及血管形成,这一过程可能与EMT的发生有关。

下调晚期糖基化终末产物受体对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响

目的 :研究下调晚期糖基化终末产物受体(RAGE)对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响。方法 :培养乳腺癌BT474细胞,分为对照组(不做任何处理的乳腺癌BT474细胞)、上调组(乳腺癌BT474细胞+RAGE阴性对照)、下调组(乳腺癌BT474细胞+RAGE siRNA)。用四甲基偶氮唑盐法检测乳腺癌细胞增殖、凋亡水平;用Transwell法检测乳腺癌细胞迁移、侵袭水平;用免疫印迹法检测细胞PI3K/Akt信号通路蛋白PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、caspase3、Bcl-2、Bax表达量。结果 :下调组细胞不同时间点增殖率均显著低于上调组、对照组。下调组细胞不同时间点凋亡率均显著高于上调组、对照组。下调组细胞迁移、侵袭数均显著低于上调组、对照组。下调组p-PI3K、PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2蛋白表达量低于上调组、对照组,caspase 3、Bax蛋白表达量高于上调组、对照组。结论 :经下调RAGE作用于PI3K/Akt信号通路,其可抑制p-PI3K、PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2表达,促进caspase 3、Bax表达,致乳腺癌细胞凋亡,抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移。

帕瑞昔布钠对BT474乳腺癌细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响

目的 探讨帕瑞昔布钠对BT474乳腺癌细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响,及其作用机制。方法 体外培养BT474乳腺癌细胞,分为对照组和低、中、高剂量实验组。对照组在正常培养基中培养24 h;低、中、高剂量实验组分别置于含100,300和500μmol·L^(-1)帕瑞昔布钠的RPMI-1640培养基中培养24 h。用细胞计数法-8(CCK-8)实验检测细胞的增殖能力,用划痕实验检测BT474细胞的迁移能力,用Transwell实验检测细胞的侵袭能力,用Western blot法检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)和胱天蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)的表达情况。结果 处理24 h后,低、高剂量实验组和对照组的细胞增殖抑制率分别为(20.28±1.33)%,(67.91±2.35)%和(100.00±0)%,细胞迁移率分别为(20.84±2.15)%,(5.77±0.72)%和(26.03±2.09)%,细胞侵袭数分别为(1.72×10~4±397.00),(0.83×10~4±532.00)和(2.04×10~4±925.00)个,Bcl-2蛋白相对表达量分别为0.92±0.04,0.17±0.04和1.79±0.11,Bax蛋白相对表达量分别为0.51±0.05,1.21±0.11和0.38±0.02,Caspase-3蛋白相对表达量分别为0.82±0.08,1.98±0.17和0.33±0.06;低、高剂量实验组的上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 帕瑞昔布钠可抑制BT474乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的能力,其机制可能与调控细胞凋亡信号通路有关。