烟草BTB/POZ蛋白家族的鉴定及其在抗马铃薯Y病毒中的作用

马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)侵染烟草(Nicotiana tabacum)会引起烟草脉带病,造成烟叶品质下降。broad complex,tramtrack,and bric-à-brac/pox virus and zinc finger(BTB/POZ)是动植物体内广泛存在的蛋白质家族,在植物生长和发育的各个环节都起着非常重要的作用。本研究鉴定到90个烟草BTB/POZ家族蛋白,对应71个基因。在这些蛋白质的序列中,识别到9种保守基序(motif),并根据其出现顺序将BTB/POZ家族成员划分至6个亚家族。结构域分析表明,BTB/POZ同一亚家族成员的结构域具有一致性。对BTB/POZ蛋白的三维构象进行预测发现,所有亚家族成员结构都以α螺旋为主,同一亚家族成员的三维构象相似。烟草品种K326和突变体M867(抗PVY)的BTB/POZ家族基因表达模式分析显示,叶片接种PVY后,NtBTB2M、NtBTB2K、NtBTB2L、NtBTB6E基因的表达丰度显著增加,这可能与烟草M867对PVY的抗性较强有关。顺式作用元件分析显示,NtBTB2K、NtBTB2L、NtBTB2M和NtBTB6E基因的上游2000 bp区域内含有若干逆境响应相关元件,包括水杨酸响应元件、MYB结合位点等,可能和这些基因的上调表达有关。本研究为BTB/POZ蛋白的功能研究提供了理论依据,为烟草抗病育种提供了一定参考。

BTB与CNC同源蛋白1通过调节MYC相关因子X二聚化蛋白1基因对套细胞淋巴瘤发生发展的影响

目的 探讨BTB与CNC同源蛋白1(BACH1)通过调节MYC相关因子X二聚化蛋白1(MXD1)基因对套细胞淋巴瘤(MCL)发生发展的影响。方法 采用靶向剪切及转座酶技术(CUT&Tag)检测BACH1下游靶基因,并通过序列比对分析寻找BACH1与MXD1的结合位点。通过双荧光素酶报告基因系统验证BACH1对MXD1的调控作用,并采用慢病毒技术构建BACH1过表达及敲低的稳转MCL细胞株,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测MXD1蛋白表达水平。应用GSE16411数据集分析MCL细胞和正常B细胞中MXD1 m RNA相对表达量。应用GSE132929及GSE21452数据集筛选MXD1共表达基因,对MXD1共表达基因进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析。采用噻唑蓝(MTT)法检测MXD1正相关基因应激诱导磷蛋白1同源物含U-框蛋白1(STUB1)的特异性激活剂YL109处理后MCL细胞的活力。结果 BACH1能够靶向结合MXD1并抑制MXD1基因的启动子活性。BACH1敲低后MXD1蛋白表达水平升高,而BACH1过表达后MXD1蛋白表达水平降低。通过GSE16411数据集分析发现,MCL细胞中MXD1 mRNA相对表达量明显低于正常B细胞,差异有统计学意义(P﹤0.01)。在GSE132929数据集中筛选出2222个MXD1共表达基因,在GSE21452数据集中筛选出503个MXD1共表达基因。GO分析显示,MXD1共表达基因主要富集于信号转导、蛋白质磷酸化、细胞葡萄糖醛酸化、类黄酮葡萄糖醛酸化等代谢相关的生物学过程;KEGG信号通路分析显示,MXD1共表达基因主要富集于肝脏发育的代谢途径、蛋白质的消化和吸收、Janus激酶(JAK)/信号转导及转录激活因子(STAT)信号通路等。采用YL109处理MCL细胞后可显著降低细胞存活率。结论 BACH1通过结合MXD1近端启动子负向调控MXD1的表达水平,且BACH1介导的MXD1表达改变很可能通过调控代谢过程参与MCL的发生发展。

脑胶质瘤病人血清LASP1、ZBTB20水平变化及其诊断价值

目的:观察脑胶质瘤病人血清含LIM和SH3结构域蛋白1(LASP1)、锌指和BTB结构域蛋白20(ZBTB20)水平变化,并探讨血清LASP1、ZBTB20水平对脑胶质瘤的诊断价值。方法:选取2017年6月—2020年3月沧州市人民医院神经外科收治的67例脑胶质瘤病人作为研究组,采集病人入院后及术后7 d静脉血,收集病人的临床资料,另选取同期在我院体检的60名健康体检者作为对照组,采集静脉血,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清LASP1水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测血清ZBTB20水平;采用Pearson相关性分析法分析LASP1与ZBTB20表达的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LASP1、ZBTB20水平对脑胶质瘤的诊断价值。结果:研究组病人血清LASP1、ZBTB20水平明显高于对照组(P<0.001),术后7 d病人血清LASP1、ZBTB20水平明显低于术前(P<0.001)。Pearson相关性分析结果显示,脑胶质瘤病人血清LASP1与ZBTB20水平呈正相关(r=0.263,P=0.031)。血清LASP1、ZBTB20及二者联合诊断脑胶质瘤的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.770,0.859,0.904,敏感度分别为76.12%、77.61%、74.63%,特异度分别为68.33%、83.33%、95.00%,二者联合诊断的效能优于各自单独诊断(Z=3.643,P<0.001;Z=2.129,P=0.003)。结论:脑胶质瘤病人血清LASP1、ZBTB20水平显著上调,二者联合检测对脑胶质瘤具有较高的诊断价值。

转录因子BTB-CNC同源体1通过上调赖氨酰氧化酶促进胶质母细胞瘤中巨噬细胞的募集和极化

目的研究转录因子BTB-CNC同源体1(BACH1)通过上调赖氨酰氧化酶(LOX)促进胶质母细胞瘤(GBM)中巨噬细胞的募集和极化。方法基于公共数据库分析BACH1在胶质瘤中的表达特点和预后情况;构建BACH1过表达的稳转GBM细胞系,并对其进行转录组和蛋白质组联合测序分析;利用Transwell共培养体系将GBM细胞与巨噬细胞共培养,观察对巨噬细胞的趋化和极化影响;构建GL261-C57BL/6小鼠脑胶质瘤原位模型,探索靶向调控BACH1对肿瘤生长以及免疫微环境中巨噬细胞的影响。结果首先,相对于正常脑组织,BACH1在胶质瘤中高表达,且在GBM患者中表达最高;同时还发现高表达BACH1的GBM患者预后较低表达BACH1的患者更差。然后,测序结果发现相对于BACH1空载组,BACH1过表达组中肿瘤相关巨噬细胞趋化因子LOX的转录和蛋白水平均显著升高(转录组,P<0.0001;蛋白组,P=0.0015)。其次,流式实验结果表明,相对于BACH1空载组,BACH1过表达组中M2型肿瘤相关巨噬细胞(CD11b^(+)CD206^(+))明显增加(P<0.0001),当加入LOX抑制剂后,两组中的M2型肿瘤相关巨噬细胞明显减少且BACH1过表达组减少的更明显(BACH1-Vec,P=0.0015;BACH1-OE,P=0.0013)。小鼠脑胶质瘤原位模型结果提示,相对于BACH1空载组,BACH1过表达组中肿瘤体积更大且侵袭能力更强。结论BACH1能够通过促进GBM细胞分泌肿瘤相关巨噬细胞趋化因子LOX进而影响巨噬细胞的募集和极化,最终促进肿瘤的恶性进展。

受稻瘟病菌诱导的水稻OsBTB基因的分子特征和功能初探

报道了1个从稻瘟病菌诱导的水稻近等基因系H7R/H7S中克隆的类GMPOZ基因———OsBTB,通过测序获其全长cDNA并分析了该基因的序列特征。根据水稻基因组序列数据库搜索,将OsBTB基因定位在水稻基因组第2染色体上。Northern和Western杂交结果表明,OsBTB基因在水稻近等基因系H7R/H7S中均受稻瘟病菌诱导表达,且在非亲和与亲和互作中表达差异明显。定量PCR结果表明该基因的表达模式与所选取的抗性及抗性相关基因的表达模式一致。综合结果提示该基因可能参与了稻瘟病菌诱导的抗性反应。

植物BTB/POZ蛋白及其抗病性研究进展

为了适应各种生物胁迫和非生物胁迫,植物在长期进化过程中形成了完整的调节机制,感受外界刺激,调整基因的表达,调节代谢途径。植物BTB/POZ蛋白在一系列生物过程中发挥重要作用。文中介绍了植物中的BTB/POZ蛋白的分子特征和抗病功能。此外,也就BTB/POZ蛋白在抗病应答途径、抗病反应中的作用机理等进行综述,为作物抗病的分子机理研究提供参考。

小鼠BTB/锌指结构新基因Bsg6的克隆及表达谱分析

Bsg6(brain specific gene 6)是用消减差异筛选的方法克隆的小鼠头部特异表达新基因.Bsg6基因cDNA长3 871 bp,编码一个670个氨基酸残基的蛋白,GenBank登录号AY635051,位于小鼠第4号染色体,由2个外显子构成.Bsg6蛋白含有一个N端BTB(Broad-complex,Tramtrack,andBric-a-brac)结构域和两个C端C2H2型锌指结构域.小鼠Bsg6蛋白与其在人类和鸡中同源蛋白的同源性分别为86.2%和79.1%.Bsg6在小鼠胚胎中的表达具有一定动态性,在E8.5的小鼠胚胎中,Bsg6主要在前脑和神经管表达.在E9.5的小鼠胚胎中,Bsg6的表达明显增强并主要集中在前脑的端脑部.Bsg6在E10.5小鼠胚胎端脑的表达出现了下降,但是在中脑和后脑的表达增加,此外,Bsg6 mRNA的表达还出现在肢芽和尾部.在HH10期的鸡胚中,Bsg6主要在头部和神经管前端表达.Northern杂交结果显示,Bsg6在很多小鼠成体组织中没有表达,但是在破骨细胞瘤中高表达.Bsg6的表达谱提示,Bsg6可能是在器官形成期对脑的发育起到重要作用的转录因子,而且其表达受到严格的调控,此外Bsg6还可能与肿瘤的发生有关.

Rho激酶抑制剂法舒地尔作用BTBD7-ROCK2信号通路抑制肝细胞癌侵袭运动

目的:观察Rho激酶抑制剂法舒地尔(Fasudil)对人高侵袭潜能HCC细胞株3(human high metastatic liver cancer cells 3,HCCLM3)侵袭转移的影响,并且探讨其作用的机制。方法:应用100 mol/L Fasudil作用于HCCLM3细胞,采用肌动蛋白微丝荧光染色和侵袭小室实验观察HCCLM3细胞的运动侵袭能力。HCCLM3细胞经过处理后分为阴性对照组、Fasudil作用组、BTBD7干扰组,通过Western印迹检测BTB/POZ结构域蛋白7(BR-C,ttk and bab/pox virus domain containing 7,BTBD7)、Ras同系物家族成员C(ras homolog family member C,Rho C)、Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶2(Rhoassociated,coiled-coil containing protein kinase 2,ROCK2)、MMP2和MMP9蛋白表达水平,酶谱分析法检测MMP2和MMP9活性水平。BTBD7干扰组作为阳性对照。结果:Fasudil处理后HCCLM3侵袭运动能力下降,BTBD7,Rho C,ROCK2蛋白表达下调,MMP2和MMP9活性降低,与阴性对照组比较差异有统计学意义(均P<0.01)。结论:Fasudil具有干预BTBD7-ROCK2信号通路、抑制HCC侵袭转移的重要作用。

上调锌指和含BTB域20表达对APPswe/PSE9转基因阿尔茨海默病小鼠学习记忆能力的影响

目的探讨上调锌指和含BTB域20(A20)表达对APPswe/PSE9转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆影响及其对海马神经元凋亡的抑制作用。方法将APPswe/PSE9转基因小鼠40只分为4组,分别为对照组、AD组、干扰小RNA(siRNA)-AD组和A20-AD组。选择携带高表达A20的腺病毒为干扰药物,采用Morris水迷宫实验观察小鼠空间学习记忆能力,采用Westren blottong技术检测A20的表达,采用免疫组织化学法观察各种小鼠海马CA1区P53表达情况。结果与AD组比较,A20-AD组小鼠学习记忆功能有所改善,海马CA1区神经元凋亡率显著降低,海马CA1区P53表达显著降低。结论上调A20表达能提升APPswe/PSE9转基因小鼠学习记忆能力,可使APPswe/PSE9转基因小鼠海马CA1区P53表达降低。

用BTB快速鉴定黄连木雌雄株方法初探

用溴麝香草酚兰(BTB)的方法,对黄连木雌雄株进行鉴别。结果表明,黄连木雌株提取液在加入溴麝香草酚兰(BTB)溶液3h后,溶液颜色由黄绿色转变为褐色,而雄株提取液的颜色还是保持原来的黄绿色,随着时间的增加,雌株提取液褐变加深,雄株无明显变化。说明用BTB溶液鉴定黄连木雌雄株,实验现象明显,认为可用此方法对黄连木幼苗的性别进行初步鉴定。本实验对黄连木幼苗雌雄株的鉴定提供了科学依据。

ZBTB5基因及其表达特征的初步研究

目的了解ZBTB5基因的序列和表达特征。方法运用生物信息学方法分析该基因的序列特征和染色体定位,分子生物学方法分析其表达特征和亚细胞定位。结果ZBTB5基因的N末端含一个BTB结构域,C末端含2个C2H2锌指结构域;根据人类基因组序列数据库搜索,将ZBTB5基因定位在人类基因组第9染色体上。Northern杂交结果表明,ZBTB5基因在不同组织中表达差异明显。免疫胶体金技术显示该蛋白定位于细胞核。结论该基因可能是一个转录因子。

基于互联网的BTB电子商务研究

现代企业正在为获得竞争优势而努力,而企业间建立紧密的组织关系将是获得竞争优势的一个关键因素,由于互联网的广泛普及,使得越来越多的企业开始利用这种新的通信媒介来建立BTB的供应链。本文首先研究了哪些因素会影响到企业是否采用基于互联网的BTB电子商务,然后得出结论:企业的初始投入和运营成本、通信标准、连接性将对BTB电子商务的开展起着积极的推动作用,而数据安全、网络的可靠性和带宽将会产生消极的影响。

细胞蛋白质组学和代谢组学整合策略表征散斑型BTB/POZ蛋白质突变调控的关键代谢通路

散斑型BTB/POZ蛋白(SPOP)是前列腺癌中突变率最高的蛋白质之一。该研究通过整合细胞蛋白质组学和代谢组学的方法,揭示SPOP突变引起的代谢紊乱及其调控的代谢通路。首先,系统地研究了LNCaP SPOP野生型及突变型高表达细胞中的代谢变化。代谢组学结果显示,SPOP野生型和突变型(SPOP_Y87N和SPOP_F133L)导入的LNCaP细胞在偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)得分图上得到了很好的区分。进一步通过单因素方差分析发现,SPOP突变引起富马酸、苹果酸、柠檬酸、天冬氨酸和天冬酰胺等代谢物含量的增加。蛋白质组学共发现909种蛋白质在两种LNCaP SPOP突变体细胞中发生变化。分别对差异代谢物和差异蛋白质进行通路富集分析,发现三羧酸循环、氨酰基-转运核糖核酸生物合成在代谢组学和蛋白质组学分析中都发生了明显改变。最后,在SPOP敲除的Du145细胞中验证了上述研究结果。该研究证明SPOP突变可促进三羧酸循环。

包含BTB锌指结构的新基因Bsg2结构特性及其在发育阶段的组织表达特异性

通过消减差异筛选法寻找小鼠胚胎发育过程中在脑中特异表达的基因 .克隆得到的脑特异表达新基因 2 (brainspecificgene 2 ,简称Bsg2 )长 36 91bp ,通过生物信息学方法预测其编码一个含713个氨基酸的锌指蛋白 .此蛋白N端有一个BTB(BR C ,ttkandbab)结构域 ,C端有 9个连续的C2H2锌指结构 .该基因定位在小鼠 12号染色体上 ,包含 1个内含子和 2个外显子 .应用生物信息学和RT PCR方法分别检验该基因在小鼠各组织中的表达 .结果表明 ,Bsg2基因在小鼠胚胎及成体的各组织中普遍表达 ,在脾、肾、睾丸、肠、子宫和脑的表达水平较强 .利用整体 (wholemount)原位杂交研究其时空表达模式 .结果显示 ,Bsg2在早期的小鼠胚胎和不同时期鸡胚的头部均特异表达 ,在11d鼠胚的肢芽里也有较强的表达 .Bsg2基因的结构和表达特征预示它编码 1个具有DNA结合功能的转录调控因子 。

鹌鹑gcl基因BTB/POZ结构域编码序列的克隆及组织中的表达

Germ cell-less(GCL)是与原始生殖细胞发生相关的重要因子,果蝇、斑马鱼、青鳉鱼和小鼠的GCL蛋白都含有一个进化上保守的BTB/POZ结构域。本研究应用简并PCR克隆技术,在鹌鹑(Coturnix coturnix)中扩增得到319bp的gcl基因(包含BTB/POZ结构域编码序列)保守序列。通过与线虫、果蝇、斑马鱼、小鼠和人gcl同源序列的比对,发现该片段与它们的同源性分别为52.4%、55.4%、84.6%、79.6%和76.8%。采用RT-PCR和mRNA整体原位杂交方法,研究了gcl基因在不同组织和原条期胚胎中的表达。结果显示,该基因在卵巢、精巢和肝中表达;gcl mRNA存在于原条期胚胎的生殖新月区。

BTB/POZ蛋白质家族的结构和功能

ＢＴＢ／ＰＯＺ蛋白质家族的结构和功能王重赵德标（中国科学院上海细胞生物学研究所，上海２０００３１）关键词ＢＴＢ／ＰＯＺ结构域锌指结构现在已经发现了许多具有保守序列的蛋白质，尽管它们在不同的生理过程中发挥不同的作用，但它们却介导类似的分子功能。人们把许...

PAK4与RCBTB1相互作用促进胰腺癌细胞增殖

目的研究p21激活激酶4(PAK4)与RCC1和BTB结构域包含蛋白1(RCBTB1)的相互作用及其在胰腺癌细胞增殖过程中的作用。方法采用免疫共沉淀实验确定PAK4与RCBTB1在胰腺癌细胞内的相互作用;采用免疫荧光实验确定PAK4与RCBTB1在胰腺癌细胞内的定位和共定位位置;采用CCK-8实验探究过表达PAK4、RCBTB1对胰腺癌细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测过表达PAK4、RCBTB1对胰腺癌细胞周期的影响;采用Western blotting检测过表达PAK4、RCBTB1对cyclin D1蛋白表达水平的影响。结果PAK4与RCBTB1在胰腺癌细胞内存在相互作用。PAK4与RCBTB1共定位于胰腺癌细胞核和核周细胞质内。过表达PAK4、RCBTB1促进胰腺癌细胞增殖,加速胰腺癌细胞的细胞周期进程,促进cyclin D1的表达。结论PAK4与RCBTB1相互作用促进胰腺癌细胞增殖。

多孔材料Cu_3(BTB)_2和H_2O_2处理偶氮染料废水及机理

采用溶剂热法合成了Cu_3(BTB)_2(BTB=4,4',4"-benzenetri benzoate)介孔材料,并进行了SEM、BET、FTIR和XRD表征。该材料呈多孔球形,比表面积为1293m2/g,平均粒径为10μm。应用该材料进行刚果红偶氮染料废水处理,发现Cu_3(BTB)_2单独作用时,废水去除率为10.29%;Cu_3(BTB)_2和H_2O_2共同作用,去除率骤增到91.65%。通过紫外-可见光谱、高效液相色谱、微量热、捕获剂等手段分析其降解机理,Cu_3(BTB)_2与H_2O_2共存时,342nm处紫外特征吸收峰右移,HPLC峰强度显著降低,放热反应标准摩尔反应焓为2068.74k J/mol,加入自由基捕获剂异丙醇或氯仿后,去除率大幅降低。实验结果表明:Cu_3(BTB)_2单独作用为多孔吸附,去除率较低,与H_2O_2共存时去除率高,归结于Fenton-like反应产生活性自由基(·OH和O_2~–)使CR分子键断裂,且·OH占主导作用。

配合物Co_3(BTB)_2(H_2O)_5(DMF)_9的合成及其催化染料废水脱色性能研究

使用配体1,3,5-三(4-羧基苯基)苯(H_3BTB)通过水热法合成了配合物Co_3(BTB)_2(H_2O)_5(DMF)_9(用Co L表示),经红外光谱和元素分析进行了结构表征。将其用于催化过氧化氢脱色活性艳蓝KN-R,研究了双氧水浓度、催化剂浓度、温度和活性艳蓝KN-R的初始浓度对脱色效果的影响。研究表明,CoL表现出优异的催化脱色性能,在废水处理方面具有广阔的应用前景。

含锌指和BTB结构域7B(ZBTB7B/ThPOK)及其相关因子在T细胞分化及功能中的作用

含锌指和BTB结构域7B(ZBTB7B/ThPOK)是CD4谱系分化中的关键转录因子,并抑制CD8谱系生成。ThPOK蛋白表达促进CD4谱系分化,维持CD4谱系稳定性,并抑制CD8谱系分化。首先在胸腺内,ThPOK基因表达受T细胞受体(TCR)信号、基因增强子、基因沉默子等调节,且ThPOK表达受GATA结合蛋白3(GATA3)、Runt相关转录因子3(Runx3)、白血病/淋巴瘤相关因子(LRF)、胸腺细胞选择相关性高迁移率族盒基因(TOX)、Myc关联的锌指蛋白相关因子(MAZR)、E1A结合蛋白p300(P300)等转录因子影响,进而影响CD4、CD8谱系分化。而在外周T细胞中,ThPOK影响CD_4^+T细胞亚群、CD_8^+T细胞分化及功能。在此基础上,正逐步展开针对外周疾病中ThPOK作用的研究。