细胞蛋白质组学和代谢组学整合策略表征散斑型BTB/POZ蛋白质突变调控的关键代谢通路

散斑型BTB/POZ蛋白(SPOP)是前列腺癌中突变率最高的蛋白质之一。该研究通过整合细胞蛋白质组学和代谢组学的方法,揭示SPOP突变引起的代谢紊乱及其调控的代谢通路。首先,系统地研究了LNCaP SPOP野生型及突变型高表达细胞中的代谢变化。代谢组学结果显示,SPOP野生型和突变型(SPOP_Y87N和SPOP_F133L)导入的LNCaP细胞在偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)得分图上得到了很好的区分。进一步通过单因素方差分析发现,SPOP突变引起富马酸、苹果酸、柠檬酸、天冬氨酸和天冬酰胺等代谢物含量的增加。蛋白质组学共发现909种蛋白质在两种LNCaP SPOP突变体细胞中发生变化。分别对差异代谢物和差异蛋白质进行通路富集分析,发现三羧酸循环、氨酰基-转运核糖核酸生物合成在代谢组学和蛋白质组学分析中都发生了明显改变。最后,在SPOP敲除的Du145细胞中验证了上述研究结果。该研究证明SPOP突变可促进三羧酸循环。

BTB/POZ蛋白质家族的结构和功能

ＢＴＢ／ＰＯＺ蛋白质家族的结构和功能王重赵德标（中国科学院上海细胞生物学研究所，上海２０００３１）关键词ＢＴＢ／ＰＯＺ结构域锌指结构现在已经发现了许多具有保守序列的蛋白质，尽管它们在不同的生理过程中发挥不同的作用，但它们却介导类似的分子功能。人们把许...

原发性干燥综合征患者唇腺组织中BTB/POZ结构域蛋白7及基质金属蛋白酶-9的表达与自身抗体的关系

目的 探讨原发性干燥综合征(pSS)患者唇腺组织中BTB/POZ结构域蛋白7(BTBD7)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达与自身抗体的关系。方法 收集2016年9月—2020年10月本院46例pSS患者的唇腺组织为pSS组,收集同期46例口干燥症患者的唇腺组织为对照组。检测唇腺组织中BTBD7、MMP-9的mRNA表达及蛋白表达;分析pSS患者血清自身抗体[抗干燥综合征抗原A(SSA)抗体、抗干燥综合征抗原B(SSB)抗体、抗核抗体(ANA)]与BTBD7、MMP-9的关系;分析BTBD7蛋白表达水平与MMP-9蛋白表达水平的相关性。结果 与对照组比较,pSS组患者唇腺组织中BTBD7、MMP-9的mRNA及蛋白表达水平较高,差异有统计学意义(P<0.05)。在pSS患者的抗SSA抗体、抗SSB抗体以及ANA的检测结果中,各抗体阳性者唇腺组织中BTBD7、MMP-9的mRNA及蛋白表达水平均高于阴性者,差异均有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,pSS患者唇腺组织中BTBD7蛋白表达水平与MMP-9蛋白表达水平呈显著正相关(r=0.493,P<0.05)。结论 pSS患者唇腺组织中BTBD7、MMP-9均呈高表达,且二者与自身抗体如抗SSA抗体、抗SSB抗体及ANA表达有密切联系。

Rho激酶抑制剂法舒地尔作用BTBD7-ROCK2信号通路抑制肝细胞癌侵袭运动

目的:观察Rho激酶抑制剂法舒地尔(Fasudil)对人高侵袭潜能HCC细胞株3(human high metastatic liver cancer cells 3,HCCLM3)侵袭转移的影响,并且探讨其作用的机制。方法:应用100 mol/L Fasudil作用于HCCLM3细胞,采用肌动蛋白微丝荧光染色和侵袭小室实验观察HCCLM3细胞的运动侵袭能力。HCCLM3细胞经过处理后分为阴性对照组、Fasudil作用组、BTBD7干扰组,通过Western印迹检测BTB/POZ结构域蛋白7(BR-C,ttk and bab/pox virus domain containing 7,BTBD7)、Ras同系物家族成员C(ras homolog family member C,Rho C)、Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶2(Rhoassociated,coiled-coil containing protein kinase 2,ROCK2)、MMP2和MMP9蛋白表达水平,酶谱分析法检测MMP2和MMP9活性水平。BTBD7干扰组作为阳性对照。结果:Fasudil处理后HCCLM3侵袭运动能力下降,BTBD7,Rho C,ROCK2蛋白表达下调,MMP2和MMP9活性降低,与阴性对照组比较差异有统计学意义(均P<0.01)。结论:Fasudil具有干预BTBD7-ROCK2信号通路、抑制HCC侵袭转移的重要作用。

BTB/POZ结构域蛋白7假基因1在肝细胞癌中的表达及功能的初步研究

目的:探讨BTB/POZ结构域蛋白7(BTBD7)假基因1(BTBD7P1)在肝细胞癌(HCC)中的表达及功能。方法:检测106例配对的HCC组织与癌旁组织标本中BTBD7P1 m RNA的表达,分析BTBD7P1m RNA表达与HCC患者临床病理特征及预后的关系。用BTBD7P1过表达慢病毒载体转染HCC细胞系Bel7404后,检测细胞增殖率以及BTBD7 m RNA与蛋白的表达。结果:HCC组织中BTBD7P1相对表达量明显低于癌旁组织为(0.71 vs.2.14,P<0.05);BTBD7P1m RNA低表达与肿瘤大小、卫星灶、分化程度、静脉血管侵犯、出血坏死、HCC分期明显有关(均P<0.05);BTBD7P1 m RNA低表达患者的1、3、5年总体生存率及无瘤生存率均明显低于BTBD7P1m RNA高表达患者(均P<0.05)。与转染空载体质粒的对照组Bel7404细胞比较,转染BTBD7P1过表达慢病毒载体的Bel7404细胞,细胞增殖能力明显减低,BTBD7 m RNA表达明显下调(均P<0.05),但BTBD7蛋白表达无明显变化(P>0.05)。结论:BTBD7P1可能在m RNA水平对亲本基因BTBD7表达进行调控,从而参与了HCC发生与发展。

SPOP在机体发育中的作用

在胚胎发育中发挥重要作用的许多基因,其异常表达或突变常与疾病密切相关,斑点型BTB/POZ蛋白(speckle type BTB/POZ protein,SPOP)是其中之一。SPOP是E3泛素连接酶接头蛋白质,主要由MATH、BTB和BACK结构域构成,其功能正常发挥依赖于多个结构域各自不同的作用。SPOP主要通过泛素-蛋白酶体途径促进其靶蛋白质的降解来发挥作用。目前发现,SPOP底物蛋白质有30多种,其中大部分与前列腺癌、子宫内膜癌和肾癌的发生发展相关。SPOP在机体发育过程中也发挥重要作用,缺失或者突变SPOP导致小鼠出生后死亡。SPOP新生突变导致儿童神经发育障碍。SPOP调控机体发育也主要通过调控靶蛋白质降解来实现,包括作用于Gli2/3、PDX1、NANOG和SENP7等靶蛋白质来调控神经、骨骼和胰腺的发育以及衰老等过程。另有研究发现,SPOP与靶蛋白质会共定位到核斑(nuclear speckles)等无膜细胞器中,促进靶蛋白质的泛素化降解,并且SPOP寡聚体的形成以及其与底物多价互作引发的液-液相分离(liquid-liquid phase separation,LLPS)也在其中发挥了重要作用。SPOP寡聚化缺陷的BTB突变或BACK突变,可导致SPOP无法发生液-液相分离并定位于无膜细胞器。本文综合了最新研究进展,详细探讨了SPOP在机体发育过程中的重要作用。