BTB与CNC同源蛋白1通过调节MYC相关因子X二聚化蛋白1基因对套细胞淋巴瘤发生发展的影响

目的 探讨BTB与CNC同源蛋白1(BACH1)通过调节MYC相关因子X二聚化蛋白1(MXD1)基因对套细胞淋巴瘤(MCL)发生发展的影响。方法 采用靶向剪切及转座酶技术(CUT&Tag)检测BACH1下游靶基因,并通过序列比对分析寻找BACH1与MXD1的结合位点。通过双荧光素酶报告基因系统验证BACH1对MXD1的调控作用,并采用慢病毒技术构建BACH1过表达及敲低的稳转MCL细胞株,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测MXD1蛋白表达水平。应用GSE16411数据集分析MCL细胞和正常B细胞中MXD1 m RNA相对表达量。应用GSE132929及GSE21452数据集筛选MXD1共表达基因,对MXD1共表达基因进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析。采用噻唑蓝(MTT)法检测MXD1正相关基因应激诱导磷蛋白1同源物含U-框蛋白1(STUB1)的特异性激活剂YL109处理后MCL细胞的活力。结果 BACH1能够靶向结合MXD1并抑制MXD1基因的启动子活性。BACH1敲低后MXD1蛋白表达水平升高,而BACH1过表达后MXD1蛋白表达水平降低。通过GSE16411数据集分析发现,MCL细胞中MXD1 mRNA相对表达量明显低于正常B细胞,差异有统计学意义(P﹤0.01)。在GSE132929数据集中筛选出2222个MXD1共表达基因,在GSE21452数据集中筛选出503个MXD1共表达基因。GO分析显示,MXD1共表达基因主要富集于信号转导、蛋白质磷酸化、细胞葡萄糖醛酸化、类黄酮葡萄糖醛酸化等代谢相关的生物学过程;KEGG信号通路分析显示,MXD1共表达基因主要富集于肝脏发育的代谢途径、蛋白质的消化和吸收、Janus激酶(JAK)/信号转导及转录激活因子(STAT)信号通路等。采用YL109处理MCL细胞后可显著降低细胞存活率。结论 BACH1通过结合MXD1近端启动子负向调控MXD1的表达水平,且BACH1介导的MXD1表达改变很可能通过调控代谢过程参与MCL的发生发展。

转录因子BTB与CNC同源蛋白2在血液恶性肿瘤中的研究进展

BTB与CNC同源蛋白2(BACH2)是B细胞特异性转录因子,在淋巴细胞发育及分化过程中发挥重要的调节作用。以往研究多关注BACH2在人体免疫自稳调节及炎性反应中的作用,然而BACH2在血液恶性肿瘤中的功能鲜有关注。近年来,大量研究相继发现BACH2在白血病与淋巴瘤的发生、发展过程中发挥类似抗肿瘤因子的作用,并参与疾病的耐药与复发。本文将重点围绕BACH2的结构与生物学功能展开综述,并重点聚焦其在血液恶性肿瘤中的研究进展与目前面临的挑战。

转录因子Nrf2／Bach1及MAPK激酶调控γ-GCS在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的作用

目的:研究转录因子红系衍生核因子相关因子-2(Nrf2)及BTB-CNC异体同源体1(Bach1)在慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织中的表达,探索其感受氧化应激调控谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的可能机制。方法:复制慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型,通过免疫组化、Westernblotting、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术研究肺组织Nrf2、Bach1、γ-GCSmRNA及其蛋白和p-ERK、p-p38、p-JNK蛋白的表达。结果:免疫组化结果显示COPD组p-ERK、p-p38、γ-GCS、Nrf2蛋白水平较对照组升高(P<0.01),而Bach1、p-JNK蛋白水平无差异(P>0.05);Westernblotting结果显示COPD组p-ERK、p-JNK、Nrf2核蛋白质水平较对照组升高(P<0.01),Bach1、p-p38浆蛋白水平较对照组升高(P<0.01)而Bach1核蛋白水平较对照组降低(P<0.01);RT-PCR结果显示,COPD组Nrf2、Bach1mRNA水平较对照组无差异(P>0.05),而γ-GCSmRNA水平升高(P<0.01);直线相关分析结果表明,γ-GCSmRNA表达水平与Nrf2、p-ERK、p-p38总蛋白质水平,Nrf2、p-ERK、p-JNK核蛋白水平和Bach1、p-p38浆蛋白质水平均呈正相关(P<0.01),而与Bach1核蛋白质水平呈负相关(P<0.01);Nrf2核蛋白质水平与p-ERK、p-JNK核蛋白水平呈正相关(P<0.01),而Bach1核蛋白质水平与p-ERK、p-JNK核蛋白水平呈负相关(P<0.01)。结论:在慢性阻塞性肺疾病的发病过程中转录因子Nrf2/Bach1可能在核内竞争反向调节抗氧化基因γ-GCS的表达;信号转导蛋白p-ERK、p-JNK在调控Nrf2/Bach1核内平衡中起重要作用,且调控主要发生在转录后水平;γ-GCS可能还存在其它转录调节机制。

Nrf2调控抗氧化酶与慢性阻塞性肺疾病

氧化/抗氧化失衡是慢性阻塞性肺疾病(COPD)的主要发病机制之一。γ-谷氨酰半胱氨酸合酶是肺内重要的抗氧化酶。核因子相关因子-2(Nrf2)是上调抗氧化基因表达的关键性转录因子,而BTB-CNC异体同源体1(Bachl)是与Nrf2竞争下调抗氧化基因表达的主要因子。本文综述了调控抗氧化酶转录因子的作用及机制,尤其是氧化应激时Nrf2、Bachl调节靶基因转录的分子机制,对认识COPD的发病和治疗有重要意义。

miR-155/BACH1信号通路在三氧化二砷诱导肺腺癌细胞死亡中的机制研究

目的探讨微小RNA 155(miR-155)、BTB和CNC同源蛋白1(BACH1)、醌氧化还原酶1(NQO1)和血红素氧合酶-1(HO-1)在三氧化二砷(ATO)诱导细胞死亡过程中的变化规律,以及miR-155和BACH1可能的调控关系,为增敏ATO治疗新靶点的发现奠定实验基础。方法以不同浓度ATO处理肺腺癌A549细胞后,采用MTT实验检测细胞的存活率或死亡率,试剂盒检测细胞的总抗氧化能力,Westom blot检测BACH1、NQO1和HO-1蛋白的表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-155的表达水平。miR-155类似物(mimic)及其阴性对照转染对数期A549细胞,并设未转染组为对照,qRT-PCR检测miR-155表达水平后,以20μmol/L ATO处理24h,再进行MTT及Western blot检测。结果 10~100μmol/L的ATO可降低细胞的存活率;与空白对照组相比,10、20μmol/L的ATO可减弱细胞的总抗氧化能力,激活BACH1蛋白的表达,抑制miR-155以及NQO1和HO-1蛋白的表达;在转染miR-155mimic后,20μmol/L ATO处理后的A549细胞死亡率低于未转染组和转染阴性对照组,且ATO对BACH1蛋白的激活作用减弱,NQO1和HO-1蛋白表达则高于后两组(P<0.05)。结论ATO可通过抑制miR-155的表达,激活BACH1蛋白,抑制NQO1和HO-1蛋白的表达,从而削弱细胞的总抗氧化能力,最终诱导细胞死亡,提示miR-155和BACH1可作为ATO治疗肺癌过程中的增敏靶点。

Bach2介导PD-1/PD-L1信号通路在变应性鼻炎发病中的作用和机制研究

目的探究B淋巴细胞转录抑制剂BTB和CNC同源类似物2(blymphoid transcription repressor BTB and CN Chomology 2,Bach2)介导程序性死亡受体1(programmed cell death protein 1,PD-1)/程序性死亡-配体1(programmed cell death 1 ligand 1,PD-L1)信号通路在变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)发病中的作用和机制研究。方法本院2018年6月—2021年6月100例AR患者为AR组,另选取同期健康体检者100例为对照组。检测血清PD-1、PD-L1表达水平。60只小鼠,分成6组,各10只。建立AR小鼠模型,鼻腔内给予Bach2过表达或沉默慢病毒干预。通过实时定量PCR、免疫蛋白印迹实验检测Bach2、PD-1、PD-L1表达量。结果AR组血清PD-1、PD-L1水平高于对照组(P<0.05)。模型组黏膜组织结构紊乱,间质有增生、充血,炎症细胞浸润;Bach2沉默组,炎症细胞浸润显著,增生、充血加重;Bach2过表达组沉默组浸润降低,细胞排列较整齐。与对照组比,AR+Bach2组中Bach2表达量高于模型组,AR+抗Bach2抗体组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组中PD-1、PD-L1表达增加,Bach2沉默组高于模型组,Bach2过表达组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组中PD-L1^(+)m DCs、PD-1^(+)CD4^(+)、Th2细胞比例增加,Bach2沉默组高于模型组,Bach2过表达组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论下调Bach2可能加重AR小鼠鼻炎,其作用机制可能与影响PD-1/PD-L1信号通路诱导免疫反应有关。