BTBD10基因的细胞、组织mRNA表达谱研究

目的研究人BTBD10基因mRNA在不同组织、不同细胞系的表达水平。方法用DIG-11-dUTP标记人BTBD10编码区基因作为探针,利用Northern blot杂交观察BTBD10 mRNA在14种正常人体组织和5种细胞株的表达水平。结果BTBD10基因呈单一转录本,大小约为3 kb,BT- BD10基因表达较广泛,在各组织和细胞株中均有不同程度的表达,其中在脑、骨骼肌、脂肪、肝脏、主动脉、十二指肠、肺脏、胰岛β细胞株等表达较高,而胰腺、垂体、心脏中表达量低。结论人BTBD10表达广泛,可能在多种组织中发挥重要作用。

BTBD10基因的真核表达载体构建和亚细胞定位

目的构建BTBD10重组真核表达载体,观察BTBD10在HEK293细胞中的定位。方法利用PCR方法扩增BTBD10全长,经HindⅢ和BamHI酶切后连接入pGFP-C3真核表达载体,构建pGFP-C3-BTBD10重组表达质粒,转染HEK293细胞,利用激光共聚焦显微镜观察BTBD10在细胞中的定位。结果经双酶切和核酸序列分析证实重组质粒包含有正确编码的BTBD10读码框。激光共聚焦显微镜观察到空质粒pGFP-C3转染后,整个细胞内弥散绿色荧光,而转染pGFP-C3-BTBD10重组载体后,可见绿色荧光分布于HEK293细胞膜一侧的细胞浆中,提示BTBD10定位于细胞浆中。结论成功构建人BTBD10真核表达载体,BTBD10定位于哺乳细胞的细胞浆中,可能发挥蛋白之间的相互作用。

BTBD10蛋白在大鼠胰岛和INS-1细胞株的表达

目的观察BTBD10蛋白在大鼠胰岛和INS-1细胞株的表达。方法利用构建好的BTBD10多克隆抗体,采用多重免疫荧光技术和激光共聚焦显微镜观察BTBD10在3月龄Fischer344大鼠的胰腺组织和大鼠胰岛β细胞株INS-1细胞中的表达。结果 BTBD10蛋白定位在大鼠胰腺组织的胰岛β细胞中,与胰岛素的定位重叠,而在胰腺的外分泌腺和胰岛α细胞中无表达,同时显示BTBD10定位在大鼠胰岛β株INS-1细胞的细胞浆中,表达量高。结论 BTBD10特异性表达于大鼠胰岛β细胞中,提示BTBD10可能与胰岛β细胞功能和胰岛素分泌有关。

BTBD10基因的研究现状与进展

BTBD10基因属于BTB/POZ家族,在多种正常组织中都有表达。其主要通过调节Akt磷酸化水平来改变后续信号通路,产生一系列生物学效应,包括可能参与基因的表达调控,生物体增殖、分化、凋亡等重要过程。目前发现:BTBD10在脑胶质瘤中的表达与肿瘤恶性程度有关,视为潜在的抑癌基因。同时,其在调节胰岛β细胞增殖和凋亡,颅内出血后脑损伤进程及家族性肌萎缩脊髓侧索硬化(ALS)的发病机制中均有作用。随着研究深入,将更加详细了解其多样化的生物学功能和具体作用机制。

人BTBD_(10)新基因克隆及组织表达和在脑胶质瘤中的表达谱及聚类

目的探讨人脑胶质瘤相关BTBD10新基因克隆、正常成人组织分布及在不同级别星形细胞瘤中的表达。方法构建胎脑cDNA文库和大规模测序获得全长BTBD10新基因;用Clontech人多组织文库(MTC)为模板研究BTBD10在8种正常组织中的分布;用含13 939种人类基因(8 347种已知基因,5 592种未知基因)的BioStarH140S型表达谱芯片检测BTBD10在星形细胞瘤中的表达,Hierarchical聚类分析与BTBD10表达谱相近的基因群;Northern杂交验证BTBD10在不同级别胶质瘤中的表达。结果人胎脑文库中克隆的BTBD10新基因含1 428bp长的开放阅读框,编码475个氨基酸的蛋白;芯片结果提示BTBD10基因在18例胶质瘤组织中表达一致降低,与促性腺诱导素转录阻抑蛋白GIOT1、血管性肠肽VIP等7条基因的表达谱相似;BTBD10在正常脑组织中表达量最高,而心、肺、肝、肾、胰腺中表达较低;Northern显示BTBD10与胶质瘤发生密切相关,与芯片结果一致。结论表达谱芯片可快速高效筛选脑胶质瘤相关基因,BTBD10基因与胶质瘤发生密切相关,在脑胶质瘤的转录调控中起重要作用。

BTBD1O对胰岛β细胞增殖的影响和作用机制研究

目的 观察BTBD10基因在大鼠胰岛β细胞株INS-1细胞过表达后对其增生的影响和可能机制.方法 构建重组真核表达质粒pcDNA4.0-BTBD10,利用脂质体转染INS-1细胞,转染后48 h筛选获得稳定表达细胞株,Western blot方法验证BTBD10表达.四唑盐比色法（MTT法）测定INS-1细胞增殖活性.Western blot方法检测蛋白激酶B（PKB,又名Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、哺乳动物的雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和磷酸化-mTOR （p-mTOR）的蛋白表达.结果 成功构建BTBD10过表达的稳定INS-1细胞株,BTBD10的高表达可增加INS-1细胞的增殖活性,促进INS-1细胞p-Akt和p-mTOR的表达,而Akt和mTOR蛋白表达无明显变化.结论 BTBD10在INS-1细胞的过表达可通过促进Akt和mTOR的磷酸化水平而激活Akt/mTOR信号通路,使细胞总体蛋白质翻译水平升高,从而促进INS-1细胞的增殖.