BTF3在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其与PINCH的相关性

目的:探讨基础转录因子3(basic transcription factor 3,BTF3)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)组织中的表达及其与PINCH的相关性。方法:采用免疫组织化学法检测BTF3在73对OSCC组织及相邻癌旁正常组织(45例伴淋巴结转移)中的表达,并通过肿瘤基因组图谱(the Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析BTF3、PINCH在OSCC组织及相邻癌旁正常组织中的表达以验证免疫组织化学检测结果。分析BTF3表达与患者年龄、性别、肿瘤分化程度及淋巴结转移等临床病理参数的关系及其与PINCH在OSCC中表达的相关性。结果:免疫组织化学检测结果显示,BTF3在OSCC组织中的表达明显高于相邻癌旁正常组织(60.27%vs 39.73%,P=0.013);TCGA数据库分析显示,OSCC组织中BTF3、PINCH的阳性表达率均显著高于二者在相邻癌旁正常组织中的阳性表达率。在OSCC中,BTF3在淋巴结转移组中的阳性表达率明显高于其在无淋巴结转移组中的阳性表达率(71.11%vs 42.86%,P=0.016);BTF3在低分化组OSCC中的阳性表达率明显高于其在高分化组OSCC中的阳性表达率(71.43%vs 45.16%,P=0.023);BTF3的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小和部位无相关性(P>0.05);BTF3和PINCH在OSCC中的表达呈正相关(r=0.286,P=0.015)。结论:BTF3与OSCC的发生、发展及淋巴结转移有关,有望成为判断OSCC发生、发展及预测淋巴结转移的潜在分子标志物,其机制可能与PINCH正协同作用有关。

凡纳滨对虾BTF3基因的克隆及表达分析

通过电子克隆所得序列设计引物,采用RT-PCR方法首次克隆得到长655 bp的凡纳滨对虾通用转录因子3(Basic Tran-scription Factor 3,BTF3)基因序列,其中包括597 bp的完整开放阅读框,共编码198个氨基酸残基,推算分子量约45.79 kDa,理论等电点为4.93。氨基酸序列分析表明,BTF3基因编码的氨基酸序列中具有保守的NAC结构功能域,利用实时荧光定量PCR检测凡纳滨对虾不同组织的表达情况发现,该基因在凡纳滨对虾组织中广泛表达,其中肌肉组织表达量最高,在肠中表达量最低。

敲低BTF3基因表达对膀胱癌细胞T24生物学功能的影响

目的:探究BTF3基因对人膀胱癌细胞株T24生物学功能的影响。方法:通过慢病毒感染的方法,构建BTF3基因低表达的T24细胞株。通过体外平板克隆实验检测克隆形成,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:RT-PCR和Western blotting证实BTF3低表达的T24细胞株构建成功。与对照组的细胞相比,敲低BTF3的表达能够抑制T24细胞克隆形成和细胞增殖,促进细胞凋亡。结论:我们的研究结果证明了BTF3在人膀胱癌细胞株T24中的重要性,提示BTF3不仅可能与膀胱癌的发生有关,而且可能成为膀胱癌潜在的治疗靶点和生物标记物。

丹参BTF3基因的克隆及生物信息学分析

采用PCR及RT-PCR技术分别从丹参基因组DNA和cDNA水平克隆了通用转录因子3(Basic TranscriptionFactor3,BTF3)基因,运用生物信息学方法对该基因编码氨基酸序列的组成成分、疏水性/亲水性、翻译后修饰、蛋白质高级结构等进行预测,利用实时荧光定量PCR检测丹参不同器官以及脱落酸和干旱诱导下BTF3的表达情况。结果表明:丹参BTF3基因全长为1510 bp,包含5个外显子和4个内含子;cDNA全长794 bp,编码蛋白整体表现为亲水性,二级结构主要由α-螺旋、不规则卷曲组成,具有NAC结构域,与其他植物的BTF3在序列组成、结构及活性位点上有高度的相似性。丹参BTF3基因在根、茎、叶中均有不同程度的表达,表达丰度为:根>茎>叶;ABA诱导该基因表达量24 h内没有显著的变化;干旱胁迫下该基因的表达受到抑制。

燕麦转录因子BTF3的电子克隆和生物信息学分析

运用电子克隆的方法获得一个燕麦BTF3基因的完整的cDNA序列。利用生物信息学方法对其编码的蛋白的一、二、三级结构和功能进行预测和分析。结果表明:该基因cDNA全长为870 bp,开放阅读框为531 bp,编码176个氨基酸,是一种亲水的不稳定的蛋白,定位在核内,拥有一个NAC保守结构域,与小麦等其它植物高度相似。为燕麦BTF3基因的克隆,功能分析和应用提供了参考。