miR-146b-3p通过靶向BTG2基因调控肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制研究

目的:探讨miR-146b-3p对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测人正常肝细胞系L025和人不同肝癌细胞系Huh7、MHCC97-H、HCCLM3中miR-146b-3p的表达水平,免疫印迹法(Western blot)检测B细胞易位基因2(BTG2)蛋白表达水平。在肝癌Huh7细胞中转染miR-146b-3p inhibitor干扰miR-146b-3p的表达,通过噻唑蓝(MTT)和Transwell实验分析干扰miR-146b-3p对Huh7细胞增殖、侵袭和迁移的影响。生物信息学和双荧光素酶报告基因实验检测miR-146b-3p和BTG2的靶向关系。功能恢复实验检测沉默BTG2对miR-146b-3p调控的Huh7细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果:与人正常肝细胞系比较,人肝癌细胞系Huh7、MHCC97-H、HCCLM3中miR-146b-3p的表达水平明显上调(P<0.05),BTG2的表达明显下调(P<0.05)。干扰miR-146b-3p能够上调BTG2的表达。生物信息学预测显示BTG2可能是miR-146b-3p的直接靶基因,双荧光素酶报告基因实验证实了二者的靶向关系。干扰miR-146b-3p能够抑制Huh7细胞增殖、侵袭和迁移。沉默BTG2能够逆转干扰miR-146b-3p导致的Huh7细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。结论:干扰miR-146b-3p通过靶向上调BTG2的表达抑制肝癌Huh7细胞增殖、侵袭和迁移。

肝细胞癌中BTG2基因的表达及其对肝细胞癌细胞增殖和凋亡影响的研究

目的研究肝细胞癌中BTG2基因的表达以及BTG2基因对肝细胞癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法荧光定量PCR测定47例肝细胞癌组织中BTG2基因的表达情况。构建表达载体pcDNA-BTG2,转染HepG2细胞。转染后,蛋白质印迹法检测转染后BTG2蛋白的表达,MTT法测定细胞生长抑制率,双标流式细胞法检测细胞凋亡率。结果与癌旁组织相比,BTG2 mRNA在肝细胞癌组织中表达明显下调(P<0.01)。且BTG2的表达与肝细胞癌的分级相关,随着分化程度的升高呈逐渐增加的趋势,但与肝细胞癌的分期及淋巴结转移、远处转移无关。转染表达载体pcDNA-BTG2能够显著上调HepG2细胞中BTG2蛋白的表达,同时,细胞生长抑制率及凋亡率明显增加(P<0.01)。结论在肝细胞癌中BTG2基因表达下调,其表达上调能够抑制肝癌细胞增殖并促进凋亡。

小檗碱对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的调节作用

目的探讨小檗碱抑制肝癌HepG2细胞增殖及诱导细胞凋亡的作用及可能机制。方法活细胞计数(CCK-8)法检测小檗碱对HepG2细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测小檗碱对细胞凋亡及细胞周期的影响;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹法(Western blotting)检测抗增殖基因BTG2及细胞周期蛋白CyclinD1的mRNA和蛋白的表达情况。结果小檗碱可以显著抑制肝癌HepG2细胞的增殖,随着小檗碱作用浓度的升高及作用时间的延长,抑制作用增强(P<0.01);小檗碱可使HepG2细胞周期阻滞在G1期,并促进细胞凋亡,凋亡率与小檗碱的作用时间成正比(P<0.05);随着小檗碱作用时间的延长,抗增殖基因BTG2 mRNA的表达增加(P<0.05);细胞周期蛋白CyclinD1 mRNA的表达则逐渐降低(P<0.01)。结论小檗碱能够抑制肝癌HepG2细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与其上调抗增殖基因BTG2和下调细胞周期蛋白CyclinD1的表达相关。