灯盏乙素通过环状GMP-AMP合酶-干扰素基因刺激因子通路抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症

目的探讨灯盏乙素对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症的影响。方法培养BV-2小胶质细胞系,将BV-2小胶质细胞分为对照组(Ctrl)、环状GMP-AMP合酶(cGAS)抑制剂RU320521(RU.521)组、LPS组、LPS+RU.521组、LPS+灯盏乙素预处理(LPS+S)组、LPS+S+RU.521组,共6组。Western blotting及免疫荧光双标染色法检测并观察BV-2小胶质细胞中cGAS、干扰素基因刺激因子(STING)、核因子κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、PYD结构域蛋白3(NLRP3)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达变化(n=3)。结果Western blotting和免疫荧光双标染色均显示,与对照组相比,LPS诱导后,BV-2小胶质细胞中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+S组中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著下降(P<0.05)。使用cGAS通路抑制剂RU.521后显示了与灯盏乙素预处理组相似的作用效果。此外,NF-κB在各组的变化不明显(P>0.05)。结论灯盏乙素干预抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症反应,可能与cGAS-STING信号通路有关。

灯盏乙素通过STAT3信号对激活的BV-2小胶质细胞M2型极化的影响

目的探究灯盏乙素(Scutellarin)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)作用下M2型小胶质细胞极化的作用及信号转导和转录激活因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)的调控机制。方法BV-2小胶质细胞分为对照组(Con组)、STAT3抑制剂α-氰基-(3,4-二羟基)-N-苄基霉素-烟酰胺组(AG490组)、LPS组、LPS+AG490组、LPS+灯盏乙素预处理组(LPS+S组)、LPS+S+AG490组,共6组。Western blot和免疫荧光染色检测STAT3、磷酸化STAT3(P-STAT3)和M2型小胶质细胞标记物白介素10(IL-10)的表达。结果Western blot结果显示,LPS组的P-STAT3、IL-10表达显著增强,与对照组差异显著(P<0.05);使用灯盏乙素干预后P-STAT3表达明显降低;IL-10表达显著增高;均与LPS组有显著差异(P<0.05)。AG490增强灯盏乙素的作用。此外,STAT3在各组的变化无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光染色结果显示,灯盏乙素干预后可降低LPS激活的BV-2小胶质细胞P-STAT3的蛋白表达水平;增强IL-10蛋白表达。各组STAT3的蛋白水平无统计学意义。结论灯盏乙素通过抑制STAT3活化促进BV-2小胶质细胞向M2型极化,可能与灯盏乙素减轻神经炎症反应有关。

Fasudil通过TLR4通路抑制脂多糖诱导的小鼠BV-2小胶质细胞TNF-α和IL-1β的表达

目的探讨Fasudil对脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞系促炎细胞因子表达中的作用。方法体外培养BV-2小胶质细胞系,实验分为PBS对照组、LPS刺激组、LPS联合Fasudil干预组,ELISA检测细胞TNF-α、IL-1β的释放,Griess法检测NO释放水平,流式细胞术检测Toll样受体4(TLR4)、TLR2蛋白表达。结果 LPS刺激BV-2细胞可导致TNF-α、IL-1β和NO的释放明显增加,还可导致炎性信号通路中的受体TLR4表达明显增加。Fasudil能明显抑制炎性因子的释放和TLR4的表达。结论 Fasudil可抑制LPS诱导的小胶质细胞NO、TNF-α和IL-1β释放,其作用机制可能与Fasudil下调TLR4通路有关。

核糖核酸酶抑制因子对H_2O_2损伤的大鼠神经胶质瘤细胞系C6的影响

核糖核酸酶抑制因子 (ribonucleaseinhibitor,RI)是广泛存在于哺乳动物细胞浆中的一种酸性糖蛋白 .为了进一步了解RI的功能 ,根据RI分子结构富含巯基的特点 ,研究了RI对过氧化氢(H2 O2 )损伤的大鼠神经胶质瘤细胞 (C6 )的影响 .用不同浓度的H2 O2 分别作用于转染有RIcDNA并且RI过表达的C6细胞和正常C6细胞 ,对比损伤前后 2者的细胞存活率、LDH漏出量、细胞内GSH和MDA含量差别 ,以及细胞内抗氧化酶类GPX、CAT和GST活性的差别 .结果表明 ,与正常C6细胞相比 ,RI过表达的C6细胞在H2 O2 作用下存活率高 ,LDH漏出量、MDA含量明显减少 ,而细胞内GSH较多 ;RI过表达的C6细胞在损伤前后均表现出更强的CAT和GST活性 .提示RI具有抗氧化功能 ,能够减轻H2 O2 所致的细胞过氧化损伤 .

乙酰葛根素对Aβ_(25-35)诱导的BV-2小胶质细胞NF-κBp65和iNOS表达的影响

目的:研究乙酰葛根素对β-淀粉样蛋白诱导的小鼠BV-2小胶质细胞核转录因子-κBp65和诱导型一氧化氮合酶表达的影响。方法:体外培养小鼠BV-2小胶质细胞,用凝聚态β-淀粉样蛋白(amyloid-β25-35,Aβ_(25-35))诱导小胶质细胞活化建立阿尔茨海默病炎症细胞模型。实验细胞随机分为6组:空白对照组,Aβ_(25-35)组,Aβ_(25-35)+乙酰葛根素(浓度分别为:0.1,0.4,1.6μmol/L)剂量组和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)抑制剂(Z-DEVD-fmk)组。在倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化;硝酸还原酶法检测乙酰葛根素对一氧化氮(nitric oxide,NO)的影响;利用Western Blot分析乙酰葛根素对NF-κBp65和i NOS蛋白表达的影响;通过Realtime PCR分析乙酰葛根素对NF-κBp65和i NOS基因表达的影响。结果:Aβ_(25-35)诱导后小胶质细胞由静息状态转变为阿米巴样,乙酰葛根素可减轻细胞发生的形态改变。乙酰葛根素呈剂量依赖性的抑制炎性因子NO的产生,抑制NF-κBp65和i NOS的表达。结论:乙酰葛根素可以改善BV-2小胶质细胞的形态变化,减轻BV-2小胶质细胞的炎性反应,其机制可能与其抑制NF-κB信号通路的激活有关,且具有剂量依赖性。

美满霉素对脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的探讨美满霉素(MC)对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法采用相应浓度的MC或LPS(100 ng/ml)对MC组及0.1、1、10、100μmol/L MC+LPS组、LPS组、空白对照组BV-2小胶质细胞进行预处理。ELISA法检测BV-2小胶质细胞TNF-α蛋白的表达,逆转录-PCR检测细胞TNF-αmRNA表达。结果与空白对照组比较,0.1、1μmol/L MC+LPS组及LPS组的TNF-α水平显著升高(均P<0.01)。10、100μmol/L MC+LPS组TNF-α水平显著低于LPS组(均P<0.01)。与空白对照组比较,LPS组及10μmol/L MC+LPS组TNF-αmRNA的表达水平显著增高(均P<0.01)。10μmol/L MC+LPS组TNF-αmRNA表达水平显著低于LPS组(P<0.01)。结论 MC预处理(≥10μmol/L)可显著抑制LPS诱导的小胶质细胞TNF-α的表达。

胶质瘤细胞系A172、U251、U87和SHG-44中HER2的表达及意义

目的探讨人表皮生长因子受体2(HER2)在人神经胶质瘤细胞系A172、U251、U87和SHG-44中的表达情况。方法采用W estern b lot和流式细胞术(FCM)于蛋白质水平检测HER2在四种人胶质瘤细胞系中的表达。结果 W estern b lot检测出HER2在人胶质瘤细胞系A172中的表达量最高,U251次之,U87和SHG-44表达量较低。FCM检测结果显示HER2在A172、U251、U87和SHG-44中的阳性率分别为36.5%、21.5%、3.3%和3.5%。结论人胶质瘤细胞系A172和U251中HER2的表达量较高,这两种细胞系可作为良好的细胞模型来研究HER2分子在胶质瘤中的作用机制以及以HER2为靶点的生物治疗等。

雌激素受体GPR30通过TXNIP/NLRP3信号通路减弱氧糖剥夺/复氧诱导的BV-2细胞氧化应激损伤和炎症反应

目的:通过研究雌激素受体G蛋白偶联受体30(G protein-coupled receptor 30,GPR30)对氧糖剥夺/再灌注(oxygenglucose deprivation and reperfusion,OGD/R)BV-2小胶质细胞的氧化应激损伤和炎症反应的调控作用,探讨其对OGD/R BV-2小胶质细胞的保护作用及其相关机制。方法:取BV-2小胶质细胞ODG 4 h后再灌注2、4、6或12 h。Western blot检测细胞中GPR30的蛋白表达水平。将pcDNA3.1、pcDNA3.1-GPR30、sh-NC、sh-GPR30质粒转染BV-2小胶质细胞,OGD 4 h后再灌注12 h。qRT-PCR检测GPR30 mRNA的表达水平,验证其转染效率,Western blot检测细胞中GPR30、硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin-interactingprotein,TXNIP)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶剪切体-1(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-1,cleaved Caspase-1)的蛋白表达水平,ELISA检测细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)水平。结果:GPR30在OGD/R后显著上升,在6 h时达到峰值,而在12 h时与对照组没有显著差异。随后确定OGD处理4 h,复氧12 h的时间点进行后续实验。qRT-PCR验证慢病毒转染成功,与对照组相比,OGD/R组细胞中ROS、MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18水平及TXNIP、NLRP3、cleavedCaspase-1蛋白表达水平显著上升,SOD活性显著下降(P<0.05);过表达GPR30抑制了ROS、MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18水平及TXNIP、NLRP3、cleaved-Caspase-1蛋白表达水平,促进了SOD活性;而干扰GPR30表达发挥了相反的作用。结论:GPR30能抑制ODG/R处理后BV-2细胞内TXNIP/NLRP3信号通路分子的表达,抑制ODG/R诱导的BV-2细胞氧化应激损伤和炎症反应,这可能是其保护ODG/R细胞的分子机制之一。

过表达膜定位IL-3的293T细胞外泌体的纯化及体外功能验证

目的体外验证过表达膜定位IL-3的293T细胞外泌体的功能,为在阿尔茨海默病模型动物的体内功能验证奠定基础。方法利用本课题组的专利结构,构建能定位于外泌体膜上的重组IL-3慢病毒载体,包装病毒感染293T细胞,筛选稳定表达细胞株。用流式细胞测量术和免疫荧光技术对IL-3的膜定位进行验证;超滤离心纯化IL-3外泌体,透射电镜观察外泌体形态;纳米流式测量术检测外泌体粒径分布及浓度;Western blot检测IL-3及外泌体相关标志蛋白质表达;免疫荧光技术检测其对小胶质细胞系BV-2吞噬Aβ淀粉样蛋白能力的影响。结果经过载体构建、病毒感染、嘌呤霉素筛选和验证,得到稳定过表达膜定位IL-3的293T细胞株;收集纯化外泌体,在透射电镜下可见直径50~100 nm的双层膜囊泡结构;免疫印迹结果显示CD63、ALIX、TSG101等多种外泌体标志蛋白质检测阳性,且与对照相比富含IL-3,提示IL-3外泌体纯化成功;免疫荧光技术检测结果显示IL-3外泌体能在体外促进BV-2细胞对Aβ淀粉样蛋白的吞噬作用。结论过表达膜定位IL-3的基因修饰293T细胞外泌体在体外兼具IL-3和外泌体的作用,能够促进小胶质细胞的吞噬作用,为阿尔茨海默病的临床治疗提供新的思路。

PrP106-126对BV-2小胶质细胞NO含量影响及作用机制

朊蛋白多肽PrP106-126可激活小胶质细胞并产生活性物质。探讨PrP106-126作用于BV-2小胶质细胞对NO生成状况影响,从酶学角度检测其作用机制。在细胞培养液中加入50μmol.L-1PrP106-126,培养48 h后检测培养液NO含量,采用实时定量RT-PCR检测细胞内iNOs和nNOs在mRNA表达水平。结果表明,PrP106-126显著提高细胞培养液中NO含量(9.34倍,P<0.01),且iNOs和nNOs表达水平均极显著提高(11.60倍和4.36倍,P<0.01),从而为解释朊病发生机制提供基础数据。

鱼藤酮对小鼠小胶质细胞 BV-2存活率及一氧化氮含量的影响

目的：研究鱼藤酮对小鼠小胶质细胞BV-2存活率及一氧化氮含量的影响。方法 BV-2细胞以5×10^7/L密度接种到细胞培养板中，分别加入鱼藤酮0、1×10^-11、1×10^-10、1×10^-9、1×10^-8、1×10^-7、1×10^-6、1×10^-5 mol/L后0、6、12、24、48、72 h等测定细胞存活率。另以1×10^-8 mol/L鱼藤酮干预BV-2细胞48 h，测定上清液中超氧化物歧化酶、过氧化物酶、总巯基、超氧阴离子和NO含量并与未给予鱼藤酮干预的对照组比较。结果5×10^7/L BV-2细胞于0、6、12、24、48、72 h细胞增殖活力分别为0．035±0．001、0．132±0．006、0．334±0．017、1．073±0．044、2．272±0．172、0．776±0．032，可见48 h达到细胞生长曲线的峰值。鱼藤酮（1×10^-6 mol/L ）干预 BV-2细胞24、48、72 h 细胞存活率分别降低至（63．4±10．1）％、（51．7±12．2）％、（33．9±11．2）％；鱼藤酮（1×10^-7 mol/L）干预BV-2细胞72 h细胞存活率降低至（50．8±2．9）％。1×10^-8 mol/L 鱼藤酮干预48 h 后 BV-2细胞上清液一氧化氮水平达（27．6±6．2）μmol/L，明显高于对照组的（13．3±2．5）μmol/L （t＝-2．135， P＝0．044）。结论鱼藤酮在一定浓度范围内可激活小胶质细胞，但是超出此浓度范围时则可能导致小胶质细胞存活率降低。

褪黑素对低氧诱导的BV-2小胶质细胞CD45表达增高的抑制作用(英文)

目的 研究褪黑素对低氧激活的小胶质细胞CD4 5表达的影响 ,以探讨褪黑素的抗衰老和抗阿尔茨海默病的作用机制。方法 体外培养BV 2小胶质细胞 ,用终浓度为 2 .0mmol·L- 1的连二亚硫酸钠作用 4 8h ,造成慢性低氧模型 ,药物处理组在低氧的同时给予褪黑素。相差显微镜下观察小胶细质胞形态学变化 ,流式细胞术测定缺氧状态下BV 2小胶质细胞表面CD4 5的表达 ;体外培养BV 2小胶质细胞用终浓度为 0 .0 1,0 .1,1.0 μmol·L- 1的褪黑素作用5min ,加入 2 0mg·L- 1的脂多糖 37℃孵育 12h ,Griess试剂法检测培养上清中NO的含量。结果 连二亚硫酸钠引起的低氧可明显增加BV 2小胶质细胞CD4 5的表达 ,荧光强度增至 2 3.9± 14 .2 (对照组为0 .80± 0 .73) ,低氧也可使小胶质细胞的形态发生阿米巴样变 ,而 0 .0 1,0 .1,1.0 μmol·L- 1的褪黑素可剂量依赖性地减少低氧诱导的CD4 5表达 ,抑制由低氧引起的小胶质细胞的阿米巴样变。但褪黑素对脂多糖诱导的BV 2小胶质细胞培养液中NO的升高无明显抑制作用。结论 褪黑素抑制小胶质细胞的激活与其抗氧化作用密切相关 。

人参皂苷Rg1抑制脂多糖诱导BV-2小胶质细胞增殖

目的探讨人参皂苷Rg1(Rg1)对脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的调控作用及其对活化的BV-2小胶质细胞增殖的调控作用。方法体外培养BV-2小胶质细胞并分为空白对照组、LPS不同时间(1,3,6,8,12 h)处理组及Rg1不同浓度(10、20和50μmol/L)预处理组。采用Western blotting检测细胞增殖相关因子PCNA蛋白和cyclin D1蛋白的表达变化;RT-PCR检测细胞增殖相关因子PCNA和cyclin D1 mRNA的表达变化;免疫荧光染色法观察细胞内cyclin D1蛋白表达变化。采用流式细胞术检测细胞周期的变化。结果 LPS诱导BV-2小胶质细胞PCNA和cyclin D1mRNA和蛋白表达上调,并呈时间依赖性;不同浓度Rg1预处理下调LPS诱导的BV-2小胶质细胞PCNA和cyclin D1的mRNA和蛋白表达。结论Rg1通过下调LPS诱导的BV-2小胶质细胞PCNA和cyclin D1的表达水平来调控细胞周期进而抑制活化的小胶质细胞的增殖。

PrP^(106-126)及Aβ_(1-42)同步诱导BV-2小胶质细胞趋化及增殖活性的研究

通过检测传染性海绵状脑病(TSEs)及阿尔茨海默病(AD)的PrP和Aβ毒性蛋白同步诱导小胶质细胞趋化与增殖活性,旨在初步揭示TSEs及AD的致病机制及重新评估TSEs危害公共卫生安全的风险。以PrP106-126和Aβ1-42为研究对象,以BV-2小胶质细胞为实验细胞,构建25~100μmol·L-1的PrP106-126和2.5~10μmol·L-1的Aβ1-42以及两者不同浓度比例混合物侵染BV-2细胞的实验模型,比较多肽及其混合物诱导BV-2的趋化指数(CI)、增殖指数(PI)以及MCP-1、TGF-β1的表达水平,同步进行上述参数的相关性分析。结果表明:与PBS组及蛋白对照组相比,25~100μmol·L-1的PrP106–126及2.5~10μmol·L-1 Aβ1-42均上调BV-2的CI、PI及表达MCP-1、TGF-β1水平(P<0.05);两种多肽不同浓度混合物同步诱导BV-2的CI、PI值及MCP-1、TGF-β1表达水平均大于单一蛋白分别诱导相同参数值,但却小于两种蛋白分别诱导相同参数值之和;两者诱导BV-2CI、PI及MCP-1表达水平均呈现多肽低浓度依赖性及处理时间依赖性,但当多肽达到高浓度或长诱导时间(PrP106-126>50μmol·L-1;Aβ1-42>5μmol·L-1;诱导时间>12h)时,这3种参数都进入平台期,但BV-2表达TGF-β1水平持续上升;PrP106-126及Aβ1-42对BV-2RCI与MCP-1水平呈正相关。结果提示,两种多肽均能上调BV-2的CI、PI及表达MCP-1、TGF-β1水平,并引起这些参数有规律的变化,两者在蛋白水平同步诱导BV-2上述参数有明显的拮抗作用。

丁苯酞通过诱导自噬调控BV-2小胶质细胞炎症反应

目的研究丁苯酞(NBP)对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应的影响及可能机制。方法培养BV-2小胶质细胞,Aβ25-35诱导构建阿尔茨海默病(AD)炎症反应细胞模型,将其分为空白对照组(Control组)、模型组(Model组)、丁苯酞组(NBP)和丁苯酞联合6-氨基-3-甲基嘌呤(3-MA)组(3-MA组)。采用CCK-8法检测NBP和Aβ25-35对BV-2小胶质细胞活力的影响,Western blotting检测各组细胞自噬蛋白LC3B-Ⅱ和p62的表达情况,实时PCR检测自噬基因ATG5、Beclin1和炎症指标白细胞介素(IL)-1β、IL-6 mRNA的表达水平,ELISA检测细胞上清液中IL-1β的分泌量。结果Aβ25-35浓度≥20μmol/L时对细胞生存率具有显著损伤作用,NBP浓度≤40μmol/L时细胞活力与未处理细胞基本无差异。Model组IL-1β、IL-6 mRNA表达量较Control组明显上调,细胞上清液中IL-1β的分泌量增加(P<0.05)。与Model组相比,NBP组IL-1β、IL-6 mRNA表达量显著降低,ATG5、Beclin1 mRNA和LC3B-Ⅱ蛋白表达上调,p62蛋白明显减少,细胞上清液中IL-1β含量降低(P<0.05)。与NBP组相比,3-MA组IL-1β、IL-6 mRNA表达增加,ATG5、Beclin1 mRNA和LC3B-Ⅱ蛋白表达降低,p62蛋白和细胞上清液中IL-1β的分泌量增加(P<0.05)。结论NBP可能通过诱导自噬减轻Aβ25-35构建的BV-2小胶质细胞炎症反应。

EP2受体拮抗剂AH6809对BV-2小胶质细胞凋亡的影响

目的:观察不同浓度前列腺素E_2受体2(EP2)抑制剂AH6809对BV-2细胞的致凋亡作用,探索AH6809使用浓度与BV-2细胞凋亡的关系。方法:将不同浓度(10、20、30、40、80、160μmol/L)的AH6809依次加入BV-2细胞培养液中,运用倒置显微镜、免疫荧光双标、TUNEL检测、流式细胞术和Western Blot技术,对AH6809干预后的BV-2细胞的形态和凋亡情况进行观察。结果:AH6809在40μmol/L以上时,观察到BV-2细胞开始出现凋亡迹象,并且随着AH6809浓度的递增,发生凋亡的BV-2细胞呈现出逐渐增多的趋势,表现出浓度依赖性特征,差异具有统计学意义(P <0. 05)。结论:AH6809对BV-2细胞有致凋亡作用,使用时需要考虑浓度对细胞凋亡的影响。

黄芪多糖抑制小鼠EAE及调控BV-2神经小胶质细胞活化的实验研究

目的:研究黄芪多糖(APS)对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE)的治疗作用以及对参与EAE发病机制的神经小胶质细胞活化的调控作用及其可能的作用机制。方法:动物实验:MOG_(35-55)诱导C57BL/6小鼠建立EAE模型,予APS给药干预,通过5级临床症状评分观察APS对小鼠EAE的治疗作用。细胞实验:MTT法检测脂多糖(LPS)对于BV-2神经小胶质细胞的增殖抑制作用,筛选合适的LPS刺激浓度活化神经小胶质细胞,构建BV-2神经小胶质细胞活化的模型;倒置显微镜观察BV-2神经小胶质细胞形态学的改变;ELISA法检测BV-2神经小胶质细胞IFN-γ、TNF-α的分泌水平变化;观察不同浓度的APS对BV-2神经小胶质细胞活化的调控作用;APS干预后,Western blot、Real-time PCR方法分别检测BV-2神经小胶质细胞PD-L1蛋白和mRNA表达水平的变化。结果:APS能够有效治疗小鼠EAE的临床症状,成功建立了体外BV-2神经小胶质细胞活化模型,一定浓度的APS能够抑制BV-2神经小胶质细胞的活化,提高活化的BV-2细胞的生存活性,降低IFN-γ、TNF-α的分泌水平,促进活化的BV-2神经小胶质细胞PD-L1基因及蛋白表达上调。结论:APS对小鼠EAE具有明显的治疗作用,其发挥作用的机制可能是APS能够有效抑制神经小胶质细胞的活化,降低炎性细胞因子IFN-γ、TNF-α的分泌,对神经小胶质细胞有抗炎保护作用,PD-1/PD-L1通路可能是APS发挥抗炎作用的重要途径。

雷公藤内酯对海人酸活化的BV-2小胶质细胞NF-κB表达的影响

目的:观察雷公藤内酯对海人酸活化的小胶质细胞活化增殖的影响,进一步探索雷公藤内酯抑制海人酸活化的小胶质细胞活化增殖的分子机制。方法:倒置显微镜观察BV-2小胶质细胞的活化增殖,免疫组化方法检测BV-2小胶质细胞的NF-κB蛋白表达水平,RT-PCR检测BV-2小胶质细胞的NF-κB mRNA表达水平。结果:倒置显微镜结果显示,与对照组相比,海人酸组BV-2小胶质细胞胞体变大变圆,突起变短或消失。与海人酸组相比,雷公藤内酯干预组BV-2小胶质细胞胞体变小变瘦,突起变细长,与对照组相似。免疫组化结果显示,与对照组相比,海人酸组BV-2小胶质细胞NF-κB蛋白表达显著增加(P<0.05)。与海人酸组相比,雷公藤内酯干预组BV-2小胶质细胞NF-κB蛋白表达显著降低(P<0.05)。RT-PCR结果显示,与对照组相比,海人酸组BV-2小胶质细胞NF-κB mRNA表达水平显著增加(P<0.05)。与海人酸组相比,雷公藤内酯干预组BV-2小胶质细胞NF-κB mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。结论:雷公藤内酯提取物可抑制小胶质细胞活化增殖,其分子机制可能与下调小胶质细胞NF-κB蛋白和mRNA表达有关。

雷公藤内酯对海人酸活化的BV-2小胶质细胞Ras和Raf表达的影响

目的:观察雷公藤内酯对海人活化的BV-2小胶质细胞Ras、Raf蛋白及mRNA表达的影响,揭示雷公藤内酯抑制海人酸活化的BV-2小胶质细胞增殖的分子机制。方法:免疫组化法检测BV-2小胶质细胞Ras和Raf蛋白表达,RT-PCR法检测BV-2小胶质细胞Ras和Raf mRNA表达。结果:免疫组化结果显示,海人酸组BV-2小胶质细胞Ras和Raf蛋白表达与对照组相比显著增加(P<0.05),雷公藤内酯组BV-2小胶质细胞Ras和Raf蛋白表达与海人酸组相比显著降低(P<0.05)。RT-PCR结果显示,海人酸组BV-2小胶质细胞Ras和Raf mRNA表达水平与对照组相比显著增加(P<0.05),雷公藤内酯组BV-2小胶质细胞Ras和Raf mRNA表达水平与海人酸组相比显著降低(P<0.05)。结论:雷公藤内酯可能通过下调BV-2小胶质细胞Ras、Raf蛋白及mRNA表达抑制海人酸活化的BV-2小胶质细胞增殖。

竹节参总皂苷对BV-2小胶质细胞神经炎症模型p38 MAPK/NF-κB通路的影响

目的 探讨竹节参总皂苷对BV-2小胶质细胞炎症模型p38 MAPK/NF-κB通路的影响。方法 采用大孔树脂提取竹节参总皂苷,并进行鉴定、含量检测。体外培养BV-2小胶质细胞,分为正常对照组、模型组、竹节参皂苷组(10、100μg·mL^(-1)竹节参皂苷)、抑制剂组(10μmol·mL^(-1)SB203580)、竹节参皂苷联合抑制剂组(100μg·mL^(-1)竹节参皂苷+10μmol·mL^(-1)SB203580),1μg·mL^(-1)LPS(脂多糖)干预BV-2小胶质细胞24 h,诱导炎症反应。CCK-8法检测细胞活性,免疫荧光、Western Blot法检测p38 MAPK/NF-κB通路蛋白表达,实时荧光定量PCR法检测IL-1β、IL-6 mRNA表达,划痕实验观察细胞迁徙。结果 与0μg·mL^(-1)竹节参皂苷比较,低浓度范围(0.1~100μg·mL^(-1))内,竹节参皂苷对BV-2细胞活性无明显影响(P>0.05)。与正常对照组比较,模型组BV2小胶质细胞p-p38 MAPK、p-NF-κB p65、IL-1β蛋白表达明显上升(P<0.05,P<0.01),IL-1β、IL-6 mRNA表达明显上升(P<0.01),细胞在划痕区域所占面积上升(P<0.01);与模型组比较,10、100μg·mL^(-1)竹节参皂苷均可抑制p-p38 MAPK、IL-1β蛋白表达(P<0.05),100μg·mL^(-1)竹节参皂苷可抑制p-NF-κB p65蛋白表达(P<0.01),10、100μg·mL^(-1)竹节参皂苷均可抑制IL-1β、IL-6 mRNA表达(P<0.05,P<0.01),并降低划痕区域迁徙细胞所占面积(P<0.01)。与模型组比较,抑制剂组p-NF-κB p65、IL-1β表达下降(P<0.01);与竹节参皂苷组(100μg·mL^(-1))比较,竹节参皂苷联合抑制剂组(100μg·mL^(-1)竹节参皂苷+10μmol·mL^(-1)SB203580)p-NF-κB p65表达下降(P<0.01),而IL-1β表达无明显变化(P>0.05)。结论 竹节参总皂苷干预活化的小胶质细胞,可通过抑制p38 MAPK/NF-κB通路,改善神经炎症,并抑制细胞迁徙。