单疱疹病毒结构蛋白BVP22的亚细胞定位及在细胞间的穿梭

背景与目的单疱疹病毒结构蛋白BVP22具有在细胞间穿梭的特性,并能够携带与其融合的蛋白从细胞内合成后穿梭到周围的细胞,克服了基因治疗中转染效率低的问题。本研究的目的是检测BVP22蛋白在细胞中的定位及体内外的穿梭,为将其应用于肺癌的基因治疗提供依据。方法Lipofectamin介导质粒pEYFP和pEYFPBVP22转染肺癌细胞系801D,G418筛选,建立单克隆细胞系。荧光观察确定BVP22的表达及定位。单克隆细胞系与母系801D以一定比例混合培养,采用流式细胞分选计数、免疫细胞化学染色检测BVP22在细胞间的穿梭。建立裸鼠移植瘤,脂质体包裹质粒注入瘤体检测BVP22在实体瘤中的穿梭。结果成功获得单克隆细胞系pEYFP801D和pEYFPBVP22801D。BVP22在细胞中的定位表现出多相性,多数为胞核定位,少数为胞质丝状定位。流式细胞计数显示,随培养时间延长,YFP阳性细胞的比例无明显增加。免疫细胞化学染色显示pEYFPBVP22801D与801D混合培养24h后,几乎所有细胞的胞核都染成了棕黄色;裸鼠移植瘤的免疫组化染色显示注射pEYFPBVP22的肿瘤组织大部分被染成棕黄色。结论BVP22主要定位于细胞核中,其胞核定位可能与细胞分裂及其在细胞间穿梭相关。在体内外BVP22均能够介导与其融合的蛋白在细胞间发生穿梭。