用MTT比色法建立B型CpGODN活性检测标准

目的:B型CpG ODN,BW006作为疫苗佐剂已进入临床试验阶段,所以需要建立稳定、安全、简便易行的活性检测方法以控制不同批次BW006的生产质量。方法:根据BW006具有刺激人PBMC和小鼠脾细胞增生的特点,选择无放射性污染的MTT比色法作为首选检测方案。用BW006刺激BALB/c小鼠脾细胞作为筛选平台,确定如下反应条件:脾细胞用量、培养板形状、BW006浓度、培养液体积和培养时间以及如何优化MTT检测过程以提高反应灵敏度。结果:用3 mg/LBW006与96孔平底板中含100 mL/LFBS的200μL无酚红RPMI1640培养的6×105个小鼠脾细胞在37℃含50 mL/L CO2孵箱中共孵育36 h。随后每孔弃100μL上清,加入MTT(5 g/L)10μL,37℃避光孵育4 h使各孔充分形成甲瓒颗粒。每孔加入DMSO 150μL,经平板振荡器振荡20 min至颗粒完全溶解,在酶标仪上检测A578值即可。结论:建立了无污染、造价低、可操作性强的BW006活性检测方法。