血清学结合基因检测对1例Bx亚型的鉴定

截至目前,共有376个人类红细胞血型抗原被国际输血协会(ISBT)认定,其中有345个抗原属于总数为43种的红细胞血型系统(www.isbtweb.org)。每个血型系统表现为一个单基因或相关区域两个至三个紧密连锁基因构成的基因簇,在它们之间很少或几乎没有可识别的重组,因此每个血型系统都具有基因独立性[1]。其中ABO血型系统在临床输血中具有重要的意义,在输血前常规检测中会发现某些ABO亚型表现为正反定型不一致[2]。

Bx亚型1例的分子生物学鉴定

采用标准分析方法分析1例Bx亚型的血清学特征,再采用PCR-SSP技术做ABO初步基因分型,并对ABO基因第6外显子和第7外显子进行测序。该标本血清学检测结果:与抗B反应为无或1+,与抗AB反应为1+或2+,自身不凝集。PCR-SSP结果为Bx02/O2。ABO基因测序结果显示:B基因外显子6出现261G缺失,297为GG纯合子,表明该标本为B型与O2杂合;外显子7直接测序出现297A>G,526C>G,657C>T,703G>A,796C>A,803G>C,905A>G,930A>G,表明该标本为Bx02与O2的杂合;外显子7克隆测序出现803G>C,905A>G,表明该标本为Bx/O2。该标本血清学表型为B型,测序结果与Genbank网站比对鉴定为ABO*Bx.02.1.1与ABO*O21.01.1.1的杂合。

BX金属波纹管机械密封在原油输油泵中的应用

我公司某原油输油站多台外输泵所用的机械密封在使用过程中出现泄漏量超标且甩油的现象,通过对机械密封结构工作原理的分析,和对输送介质物性的研究,确定通过将QB结构形式机械密封改造为BX金属波纹管结构的方式来根除故障,在修旧利废的同时保证了输油泵安全平稳运行。主要对BX波纹管机械密封在高粘度原油输油泵中的成功应用进行分析,以供参考。

BX4-50型液压吊卡工作原理与故障诊断技术

勘探六号平台配备了美国NOV公司的TDS-8SA顶驱、桥吊、液压卡瓦、ST-120铁钻工和BX4-50液压吊卡等整套钻井包,高自动化的设备配置极大地提高了钻井作业的效率,节省了人力。但是复杂的电器、气路、液压的控制回路,给故障的诊断带来了不少困难。尤其是BX4-50液压吊卡的使用频率很高,一旦故障,就只能使用手动吊卡起下钻具,不但增大了劳动强度,且不能随意高度开关吊卡,影响钻井作业的效率。所以学习、了解和、掌握其互相工作的原理,对快速判断故障的原因与解决问题非常关键。

螺桨烷型分子BX[(CH2)n]3和BX(CH2)[CH(CH2)nCH](X=N，P)的结构和性质

采用密度泛函理论(DFT)研究了螺桨烷型分子BX[(CH2)n]3和BX(CH2)[CH(CH2)n CH](X=N,P;n=1-6)的结构、稳定性、化学键和电子光谱性质.计算结果表明这些分子都是稳定的.BX[(CH2)n]3(X=N,P;n=1-6)的最高占据分子轨道(HOMO)和最低空分子轨道(LUMO)之间的能隙均大于5.20 eV,其中BN[CH2]3和BP[CH2]3的能隙超过7.0 eV,与C5H6的能隙(7.27 eV)很接近,BX(CH2)[CH(CH2)n CH](X=N,P;n=1-6)的能隙在6.80 eV左右.所研究分子能量的二阶差分表明BN[(CH2)3]3、BP[(CH2)4]3及BX(CH2)[CH(CH2)2CH](X=N,P)是最稳定的.BX[(CH2)n]3的Wiberg键级表明除了BN[(CH2)n]3(n=2和6)中不存在B―N键,其它化合物中B和N均形成了化学键,BP[(CH2)n]3中除了BP[(CH2)2]3不存在B―P键,其它的均存在.电子密度的拓扑分析表明N―B键属于离子键,而P―B键具有共价键特征.BX[(CH2)n]3(X=N,P)的第一垂直激发能分别在191.1-284.8 nm和191.8-270.1 nm之间,BX(CH2)[CH(CH2)n CH](X=N,P)的第一垂直激发能分别在190.5-199.7 nm和209.0-221.3 nm之间.

A_2Bx血型亚型分析

ABO血型抗原变异较多,在A亚型中主要为A1、A2亚型,而B亚型一般比A亚型少见,而Bx亚型更为少见。我院在2006年无偿献血者血型复查检测过程中检出正反定型不符1例，后经鉴定为A2Bx亚型，现将结果报告如下。

Bx–daf–2与Bx–tre–1协同调控海藻糖促进松材线虫低温抗逆

分析-5℃处理松材线虫转录组数据,筛选出低温胁迫诱导差异表达基因胰岛素样生长因子受体基因Bx-daf-2。筛选低温胁迫和Bx-daf-2 RNA干扰松材线虫共表达基因,发现海藻糖酶基因Bx-tre-1受Bx-daf-2调控。进一步研究低温胁迫下松材线虫Bx-tre-1功能,结果表明,松材线虫Bx-tre-1表达量下调,参与低温胁迫响应,从而导致海藻糖酶活性降低,海藻糖含量升高。Bx-tre-1 RNA干扰处理组松材线虫低温胁迫下海藻糖酶活性下降,海藻糖含量升高,存活率升高,说明低温胁迫条件下,海藻糖含量升高有助于提高松材线虫存活率,Bx-daf-2与Bx-tre-1协同调控海藻糖含量升高,促进松材线虫低温抗逆。

猪带绦虫45W-4BX和TSOL18的高效表达及免疫效果研究

RT-PCR扩增45W-4B和TSOL18基因,PCR截去45W-4B基因的N端信号肽和C端疏水氨基酸序列形成45W-4BX。将45W-4BX和TSOL18 PCR产物分别亚克隆入pGEX-4T-1,用IPTG诱导表达,取产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。纯化表达产物制成油佐剂疫苗分别免疫家猪,用25 000枚猪带绦虫成熟虫卵进行攻击感染,ELISA检测各组的抗体水平,90 d后剖检计算各组的减虫率。结果表明,45W-4BX和TSOL18基因在大肠杆菌中分别以可溶性和包涵体形式获得高效表达,并能被囊虫病人血清所识别。重组蛋白免疫猪15 d血清抗体即为阳性,30 d左右达到峰值。2种重组抗原的减虫率均在88%以上,与囊虫粗抗原免疫效果相当。这为进一步研制基于45W-4BX和TSOL18的猪囊虫重组基因工程疫苗奠定了基础。

中国和CIMMYT小麦品种Bx7亚基超量表达基因(Bx7^OE)的分子检测

高分子量谷蛋白亚基Bx7的超量表达对提高小麦面筋强度有重要作用。利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)和STS标记检测了163份中国和CIMMYT小麦品种(系)的高分子谷蛋白亚基Bx7超量表达基因(Bx7OE)。结果表明,TaBAC1215C06-F517/R964标记和TaBAC1215C06-F24671/R25515标记可分别在含有Bx7OE基因的材料中扩增出447bp和844bp的特异带,在不含Bx7OE基因的材料中无相应目标带,两个STS标记的检测结果完全一致。在163份小麦品种(系)中,11份品种(系)含有Bx7OE基因,占总数的6.7%。RP-HPLC与STS标记检测结果一致。利用这两个STS标记可以方便、快速、准确地检测Bx7OE基因。

BX磁选机在大孤山选矿厂的工业试验

大孤山选矿厂为提高铁精矿质量 ,在采用BX多磁极、高梯度磁选机进行单机试验的基础上 ,进行了单系统流程工业试验。工业试验表明 ,铁精矿品位由 6 6 0 8%提高到 6 7 35 % ,为选矿厂改造和提高铁精矿品位创造了条件。

低温调控Bx-SCD促进松材线虫脂肪积累

为探究松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)低温胁迫条件下进入滞育状态的分子机理,应用Blast比对技术,在松材线虫基因组中鉴定得到秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)scd的同源基因,命名为Bx-SCD。应用PCR技术进行Bx-SCD完整蛋白编码区扩增,分析了低温胁迫下Bx-SCD表达量,并采用改良油红-O染色法测定低温胁迫后松材线虫脂肪相对积累率。结果表明:PCR扩增得到779 bp产物,Bx-SCD编码338个氨基酸,等电点为8.77,相对分子质量为39.532 78 ku。该蛋白属于质膜-脂肪酸去饱和酶域超家族蛋白,具有fa_desaturase结构域。低温胁迫下Bx-SCD表达量显著上调,同期松材线虫脂肪相对积累率显著上升。低温胁迫正向调控Bx-SCD基因表达,促进松材线虫脂肪积累,有助于松材线虫在低温胁迫条件下进入滞育状态并存活。

猪带绦虫不同阶段45W-4BX和18kD基因联合表达及保护性分析

【目的】获得不同发育阶段基因联合表达的具有良好免疫保护性的重组抗原,为研制高效的猪囊虫基因工程疫苗奠定基础。【方法】PCR扩增截去45W-4B基因的信号肽和C端17个疏水氨基酸序列,经BamH I和EcoR I酶切后与表达载体pGEX-4T-1连接转化BL21感受态细胞,酶切及PCR扩增鉴定阳性克隆。测序正确的质粒经EcoR I和Not I酶切处理后与截去信号肽的18 kD基因连接,构建双基因融合表达载体pGEX-4BX/18。用IPTG诱导的表达产物,进行SDS-PAGE电泳、Western blot分析活性。分别用300μg重组GST-4BX、GST-4BX/18蛋白免疫猪,间接ELISA测定抗体水平。感染后90 d剖检计算各组的减虫率,比较评价重组抗原的免疫保护性。【结果】4BX/18 kD在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物为50 kD的融合蛋白,并能被人囊虫和感染初期的猪囊虫阳性血清所识别。重组抗原免疫猪后45 d抗体达到峰值,联合表达重组抗原的减虫率为97%,GST-4BX免疫组的减虫率为95%。【结论】重组抗原4BX和4BX/18kD均具有较好的免疫保护效果,有望利用它们研制出抗猪囊尾蚴病的高效疫苗。

猪带绦虫TSO45W-4BX与猪CD58分子在大肠埃希菌中的联合表达

目的以猪CD58为分子佐剂,将CD58基因与猪带绦虫疫苗候选抗原基因TSO45W-4BX联合表达,寻找新型抗猪囊尾蚴疫苗。方法分别以重组质粒pGEM-4B和pGEM-CD58为模板,PCR扩增猪带绦虫TSO45W-4BX基因和猪CD58基因,将TSO45W-4BX与酶切处理的pGEX-4T-1定向连接,转化大肠埃希菌JM109,重组质粒经鉴定正确后,在其下游酶切插入CD58基因,PCR扩增和测序证明阅读框正确后,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE))和蛋白质印迹法(Westernblotting)分析表达产物的免疫活性。结果pGEX-4BX和pGEX-4BX/CD58分别表达Mr41000和Mr69000的融合蛋白,pGEX-4BX表达产物主要以可溶性形式存在,而pGEX-4BX/CD58却以包涵体形式存在,但两者都能被囊尾蚴病患者血清识别。结论TSO45W-4BX与CD58基因联合表达,TSO45W-4BX仍具有免疫活性。

高分子量麦谷蛋白亚基基因1Bx14转化小麦

【目的】利用基因枪将优质高分子量麦谷蛋白亚基基因1Bx14导入普通小麦栽培品种绵阳19,为利用优质基因进行小麦品质改良奠定基础。【方法】构建小麦优质高分子量麦谷蛋白亚基基因1Bx14的胚乳特异性植物表达载体,利用基因枪将其转入不含该亚基的小麦品种绵阳19幼胚愈伤组织中,经潮霉素抗性筛选、PCR检测后,阳性植株进行PCR-Southern和Southern杂交验证,利用SDS-PAGE分析目的基因在转基因后代籽粒中的表达。【结果】从转化的652块愈伤组织中共获得6株转基因阳性植株,转化效率0.92%。转化后代种子分析表明,1Bx14在部分转基因后代种子中表达,但同时也导致部分内源高分子量麦谷蛋白亚基基因不同程度的沉默。【结论】本研究成功地将小麦高分子量麦谷蛋白亚基基因1Bx14导入普通小麦绵阳19中,并在部分后代种子中得到了表达。

小麦HMW-GS 1Bx14基因特异标记体系的建立

比较1B x 14及其它已知HMW-GS基因的启动子和编码区,根据其不同点设计出1B x 14基因特异扩增引物.以8种已知HMW-G S组成的小麦DNA为模板进行PCR扩增,结果表明:具有1Bx14亚基的品种扩增出1条400 bp左右特异条带.结合该特异标记和已报道的1Dx5特异标记对2个F2杂交群体进行检测,从184个F2单株中筛选出111个同时含有1B x 14和1D x 5基因的单株.该研究结果可为种质鉴定和亚基整合育种提供参考.

小麦Bx7亚基过量表达基因(Bx7^(OE))分子检测及对小麦品质影响

[目的]明确高分子亚基Bx7OE在6个品种中的分布,研究其对小麦品质影响,帮助品质性状改良。[方法]利用已有Bx7OE特异性标记,对津强1号、辽春10号及其杂交育成的5个品种进行检测,采用SDS-PAGE方法,获得7个品种高分子量亚基分布数据,并进行品质分析。[结果]7个供试品种中,有4个品种扩增出447 bp的片段,分别是津强1号、津强2号、津强5号和津强6号,说明里面含有7OE亚基。SDS-PAGE数据表明,这7个品种亚基组成为在Glu-A1位点除津强1号为2*亚基外,其余均为1亚基,在Glu-B1和Glu-D1位点均为7+8亚基和5+10亚基。通过品质数据分析,Bx7OE亚基对小麦粉质指标有明显的正面影响。[结论]STS标记特异性较好,Bx7OE亚基对改良小麦品质作用较大,可用于中国小麦品质改良。

猪带绦虫六钩蚴45W-4BX的高效表达、纯化及活性分析

截去猪带绦虫六钩蚴45W-4B基因的N端信号肽和C端17个疏水氨基酸序列形成45W-4BX。设计特异性表达引物,PCR扩增目的片段,经BamH和EcoR酶切后与表达载体pGEX-4T-1连接转化BL21感受态细胞。用酶切及PCR扩增鉴定阳性克隆,测序证明阅读框是否正确。用IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE电泳,Western blot分析其活性。包涵体经纯化、透析复性后作为包被抗原检测囊虫猪和囊虫病人血清中的4B抗体。结果表明,截断的4BX(351bp)基因在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物为相对分子质量40000的融合蛋白,并能被囊虫病人血清所识别。ELISA检测表明,囊虫病人血清中含有高滴度的4B抗体,所以45W-4BX的表达产物有可能作为候选抗原用于囊虫病的诊断和免疫预防。

基于BX数据生成法的江苏省内河货运量预测

应用BX数据生成法对灰色模型预测中的初始数据进行了处理,并通过对江苏省内河航道货运量的预测,对两种方法进行了对比,说明BX数据生成法在没有明显加大工作量的基础上有效地改进了预测精度。

活体成像技术动态观测华蟾素对裸小鼠BxPC3-luc2异体移植胰腺癌的抗肿瘤作用

[目的]利用小动物成像技术,探讨华蟾素对裸小鼠Bx PC3-luc2胰腺癌的抗肿瘤作用。[方法]Bx PC3-luc2胰腺癌细胞接种于24只雄性裸小鼠皮下7d后,分成3组:即空白组、华蟾素组[6g·kg-1华蟾素(生药)]、顺铂组(2mg·kg-1DDP),每组8只,连续腹腔注射给药14d;用游标卡尺和活体生物发光成像仪分别在第7d和第14d检测各组裸小鼠胰腺癌肿瘤生长情况,并在第14d处死小鼠,取实体瘤称重。[结果]与空白组比较,华蟾素组体重无明显变化,肿瘤体积和重量明显减小,肿瘤光子量明显降低,在给药第7d和14d时,肿瘤光子量抑制率分别为30.11%和63.81%,但6g·kg-1华蟾素作用弱于2mg·kg-1顺铂,而华蟾素对小鼠体重无明显变化,具有一定的优势。[结论]华蟾素具有较好的抑制裸小鼠Bx PC3-luc2胰腺癌的作用。

Bx亚型伴抗-B抗体产生的血型血清学特性分析与输血策略

目的分析Bx亚型伴抗-B抗体产生的血型血清学特性,并探讨其输血治疗方案。方法对ABO血型鉴定正反定型不符的样本进行吸收—放散试验、唾液血型物质凝集—抑制试验等血型血清学分析。对符合Bx亚型伴抗-B抗体产生血型血清学特性的患者,采取配合性血液输注,并观察输血疗效。结果血型血清学试验结果提示患者为Bx亚型伴抗-B产生,给予O型红细胞、AB型血浆、AB型血小板输注后,无输血不良反应,输血治疗效果良好。结论 Bx亚型伴抗-B抗体产生的血型血清学特性由于B抗原表达减弱,在血型鉴定时导致正反定型不一致。与抗-AB凝集反应可增强,或不反应。H抗原表达强度与O细胞相似,同时产生低反应活性抗-B。分泌型个体唾液中可缺乏B物质,仅有H物质。此类患者在病情紧急,无法找到同型血液时,可采用配合性血液输注。