双氢青蒿素对BXSB狼疮小鼠自身抗体产生、TNFα分泌及狼疮性肾炎病理改变的影响

目的 :观察双氢青蒿素 (DQHS)对BXSB狼疮模型小鼠几项免疫指标及狼疮性肾炎 (lupusnephri tis,LN)病理改变的影响 ,探讨DQHS治疗系统性红斑狼疮 (systemiclupuserythematosus,SLE)的可能机制。方法 :采用ELISA方法检测血清中的抗双链DNA(ds DNA)抗体 ,以ELISA试剂盒检测血清中肿瘤坏死因子α(TNFα)的水平 ,对肾脏组织进行HE常规染色及Masson特殊染色。结果 :血清中TNFα、抗ds DNA抗体水平 ,DQHS 12 5mg/kg给药组及DQHS 2 5mg/kg给药组与模型组比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5或P <0 0 1) ;各组肾脏组织HE、Masson染色病理改变差异有显著性。结论 :DQHS能抑制BXSB小鼠血清抗ds DNA抗体的生成 ,对BXSB小鼠血清中TNFα的分泌有抑制作用 ,能明显改善BXSB小鼠LN的病理状态。

双氢青蒿素对BXSB小鼠狼疮肾炎的作用及机制研究

目的 观察双氢青蒿素 (Dihydroqinghaosu ,DQHS)对BXSB小鼠狼疮肾炎 (LN)病理改变的影响及对其肾组织核蛋白提取物中核转录因子 κB(NF κB)活化和NF κBp6 5蛋白表达的影响 ,探讨DQHS治疗系统性红斑狼疮 (systemiclupuserythematosus,SLE)的分子机制。 方法 对低温冰冻肾组织进行免疫荧光检测 ;用Westernblot的方法检测肾组织核蛋白提取物中NF κBp6 5蛋白的表达 ;以凝胶电泳迁移率改变试验 (Electrophreticmobilityshiftassay ,EMSA)对NF κB的活化进行检测。结果 免疫荧光检测显示 :模型对照组及DQHS(5mg·kg-1)剂量组小鼠肾脏组织中多种免疫球蛋白 (IgG ,IgA ,IgM)和补体 (C3 ,C1q)的荧光检测呈强阳性 ,DQHS高剂量 (12 5mg·kg-1)和中剂量 (2 5mg·kg-1)组除IgG和补体C3 呈微弱阳性外 ,IgA ,IgM和补体C1q均为阴性 ;与正常组相比较 ,BXSB小鼠肾组织核蛋白提取物中NF κB的活化及其p6 5蛋白的表达均增加 ,其中 p6 5蛋白表达的增加差异具有显著性 (P <0 0 1) ;与模型组相比较 ,DQHS3个剂量 (12 5、2 5、5mg·kg-1)组BXSB小鼠肾组织核蛋白提取物中NF κB的活化及其p6 5蛋白的表达均有不同程度的降低 ,其中 p6 5蛋白表达的降低差异具有显著性 (P <0 0 1)。结论 DQHS能抑制肾组织中NF

亚砷酸对BXSB狼疮鼠狼疮性肾炎的治疗作用

目的 :观察亚砷酸对BXSB自发狼疮鼠狼疮性肾炎的治疗作用。方法 :2个月龄雄性BXSB小鼠12只 ,随机分为对照组 (生理盐水 )和治疗组 (亚砷酸 0 .8mg/kg) ,隔日腹腔注射 ,共 5 5d。观察尿蛋白、尿红细胞、血清肌酐 ,血清IgG、dsDNA、ANA及肾脏病理变化。结果 :治疗组的尿蛋白排出量比对照组明显减少 ,血清IgG和dsDNA值也比对照组低 ,肾脏病理改变比对照组明显减轻。结论 :亚砷酸能抑制BXSB狼疮鼠的自身免疫反应 。

中药狼疮静颗粒对狼疮性BXSB小鼠脾脏CD_4^+T、CD_(19)^+B细胞凋亡的影响

目的 :研究中药狼疮静颗粒对BXSB狼疮性小鼠脾脏CD4 + T、CD19+ B细胞凋亡的影响 ,并探讨其作用机理。方法 :运用流式细胞术、免疫双荧光染色法检测脾脏CD4 + T、CD19+ B细胞凋亡。结果 :雄性BXSB小鼠脾脏CD4 + T、CD19+ B细胞凋亡加速 ,中药狼疮静颗粒可明显抑制BXSB小鼠脾脏CD4 + T、CD19+B细胞凋亡率。结论 :中药狼疮静颗粒通过抑制T、B淋巴细胞过度凋亡 ,可能阻抑了过量核酸抗原释放 ,从而抑制了B细胞的异常增生活化 ,使自身抗体产生减少而达到治疗系统性红斑狼疮目的。

叉状头/翅膀状螺旋转录因子在BXSB狼疮小鼠肾脏中的表达

目的观察叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)在BXSB狼疮小鼠肾脏中的表达,探讨Foxp3在狼疮性肾炎中可能的免疫耐受诱导作用及机制。方法选取8周龄及16周龄雄性BXSB小鼠各6只,以8周龄C57BL/6雄性小鼠6只为正常对照,用免疫组织化学及实时荧光定量PCR方法,检测Foxp3在小鼠肾脏中的表达。结果正常对照组C57BL/6小鼠肾组织Foxp3阳性表达,细胞呈深棕色着色,广泛分布于肾小管;8周龄及16周龄BXSB小鼠肾脏组织Foxp3弱阳性表达,细胞呈浅棕色着色,分布于肾小管。8、16周龄BXSB组小鼠肾组织内Foxp3mRNA表达水平[(0.55±0.06),(0.51±0.07)]均较正常对照组(1.02±0.08)降低,差异有统计学意义(均P<0.01);16周龄BXSB组小鼠的Foxp3mRNA表达水平较8周龄BXSB组降低,但差异没有统计学意义(P>0.05)。结论 BXSB小鼠狼疮肾炎的发病机制可能与调节性T细胞的Foxp3表达下调相关。

商陆皂苷甲对BXSB狼疮性肾炎小鼠的治疗作用

目的观察商陆皂苷甲(EsA)在BXSB狼疮性肾炎(LN)模型小鼠体内的作用,探讨其对LN的治疗价值。方法 12周龄雄性BXSB小鼠24只,随机分成对照组、EsA低剂量治疗组和EsA高剂量治疗组。分别给予RPMI 1640培养液、5 mg/(kg.d)的EsA、20 mg/(kg.d)的EsA 0.2 mL腹腔注射4周,1次/d至治疗终点。留取标本,行尿蛋白、血清肌酐、白蛋白测定及肾脏病理检查。结果 (1)模型小鼠尿蛋白升高,治疗组经治疗后较对照组下降,高剂量治疗组进一步下降。(2)经药物治疗后,BXSB小鼠肾组织病理损伤明显减轻。(3)各组血清肌酐及白蛋白均不高,差异无统计学意义。结论 (1)EsA具有降低BXSB狼疮性肾炎小鼠尿蛋白的作用;(2)EsA可以改善BXSB狼疮性肾炎小鼠的肾脏病理。

IL-10基因给药对BXSB狼疮小鼠发病的影响

目的：为了观察白细胞介素10（IL－10）在系统性红斑狼疮（SLE）发病中的作用。方法：通过基因工程方法构建了真核表达载体pcDNA3－IL－10，采用基因给药方式先后两次将质粒DNA直接肌注于3．5月龄雄性BXSB狼疮小鼠．同时给对照组小鼠注射等量空载体质粒pcDNA3。结果：发现IL－10在该鼠体内过表达可导致其血清ANA滴度、IL－6水平及肾脏IgG沉积明显增加，而尿蛋白和血清GPT水平及肾脏C3沉积无明显差异。结论：提示IL－10在SLE发病中可能具有病理性作用，阻止或减少IL－10的分泌及作用，也许有助于SLE的治疗。

双氢青蒿素对狼疮性BXSB小鼠的作用

目的探讨双氢青蒿素治疗红斑狼疮的机理。方法选择雄性BXSB小鼠50只,分成空白组(生理盐水)、对照组(强的松)和实验组(双氢青蒿素),采用Macart和直接免疫荧光方法检测BXSB小鼠尿蛋白、脾脏T细胞亚群和B细胞。结果BXSB小鼠尿蛋白量依次减低为空白组>实验组>对照组,P<0.01。对照组的CD4T细胞和CD8T细胞低于空白组,P<0.05。实验组的CD4T细胞和CD8T细胞高于空白组,P<0.01。B细胞降低顺序为空白组>实验组>对照组,P<0.01。结论双氢青蒿素通过抑制B淋巴细胞增殖,促进CD4T细胞和CD8T细胞的增殖,尤其是CD8T细胞增殖明显,减少B细胞分泌自身抗体,从而达到治疗红斑狼疮的作用。

中药狼疮方对狼疮样BXSB小鼠脾脏免疫系统和淋巴细胞亚群的影响

目的:研究中药狼疮方对狼疮样BXSB小鼠免疫系统和淋巴细胞亚群的影响,探讨狼疮方治疗SLE的免疫学机制。方法:采用BXSB小鼠模型,随机分为3组:狼疮方治疗组(每天0.5mL狼疮方药液灌胃)、强的松治疗组(每天prednisone0.173mg/20gBW溶于0.5mL生理盐水灌胃),未治疗组(每天0.5mL生理盐水灌胃),每组6只,疗程10周。另设与BXSB小鼠同基因的正常C57BL/6小鼠6只为正常对照组。分别采集上述各组小鼠外周血和脾组织进行检测。结果:(1)未治疗组BXSB小鼠血清IgG和抗ds-DNA抗体水平及脾组织CD3、CD4、CD8、CD19、CD23阳性细胞百分比都显著高于正常对照组、狼疮方治疗组、强的松治疗组(P<0.05或P<0.01)。(2)经狼疮方或强的松治疗后,BXSB小鼠血清IgG、抗ds-DNA抗体水平及脾组织CD4、CD8、CD19、CD23阳性细胞百分比显著低于未治疗组(与未治疗组相比,P<0.05或P<0.01),且接近正常水平(与正常对照组比较,P>0.05)。结论:狼疮样BXSB小鼠T、B细胞免疫功能上调。中药狼疮方可抑制狼疮样小鼠T、B淋巴细胞活化,减轻其高丙种球蛋白血症,减少体内自身抗体产生。

C_3基因在BXSB小鼠主要脏器中的表达

用同位素标记ｃＤＮＡ探针的分子杂交方法检测了ＢＸＳＢ小鼠肝、肾、脾、胸腺各脏器中补体Ｃ_３ｍＲＮＡ的表达情况，结果表明３～４月龄雄性ＢＸＳＢ小鼠肝、肾、脾各脏器Ｃ_３ｍＲＮＡ的表达量较正常对照鼠显著增加。Ｃ_３基因的过度表达可能参与ＢＸＳＢ小鼠ＳＬＥ多脏器非感染性炎症的发生，同时提示该鼠存在Ｍ系统的大量扩增及活化。

中药狼疮方对狼疮样BXSB小鼠脾细胞CD_(134)/CD_(134)L表达的影响

目的:探讨CD134/CD134L共刺激信号在SLE发病机制中的可能作用及狼疮方对其表达的影响。方法:采用狼疮样BXSB小鼠模型,随机分为3组:狼疮方治疗组、泼尼松治疗组、空白模型组,每组6只,疗程10周。另设与BXSB小鼠同基因的正常C57BL/6小鼠6只为正常对照组。分别采集上述各组小鼠外周血和脾组织进行检测。结果:(1)与正常对照组比较,模型组BXSB小鼠的血清IgG和抗ds-DNA抗体水平和脾组织CD4+CD134+、CD8+CD134+、CD19+CD134L+、CD23+CD134L+的百分比及CD134、CD134L的mRNA拷贝数都显著增高(P<0.05或P<0.01)。(2)狼疮方治疗组或泼尼松治疗组的血清IgG、抗ds-DNA抗体水平和脾组织CD4+CD134+、CD8+CD134+、CD19+CD134L+、CD23+CD134L+的百分比及CD134、CD134L的mRNA拷贝数都显著低于模型组(P<0.05或P<0.01),而与正常对照组比较无统计学差异(P均>0.05)。结论:狼疮样BXSB小鼠存在CD134/CD134L的异常表达。狼疮方可减轻狼疮样小鼠高丙种球蛋白血症,减少体内自身抗体产生,对CD134/CD134L存在泼尼松相当的下调作用,抑制T、B细胞的异常活化,有效地治疗SLE。

T细胞免疫防治BXSB小鼠系统性红斑狼疮的实验研究

目的 :探索用自身反应性 T细胞免疫防治 BXSB雄性小鼠发生类似人系统性红斑狼疮 (SL E)的可行性。方法 :用活化的 BXSB小鼠自身反应性 T细胞克隆 (ATL 1)从小鼠尾静脉注射进行免疫 (1× 10 6 /只 ,共 3次 ) ,然后从不同角度监测病情发展情况。 结果 :在免疫后的第 1、2、4周 ,T细胞免疫组小鼠血清中抗 ds DNA抗体水平明显低于对照组 (P<0 .0 1) ,在免疫后第 4、8、12、16周 ,T细胞免疫组小鼠的死亡率明显低于对照组 (P<0 .0 5 ) ,但是两组尿蛋白的浓度在各时间段均未见显著差异。结论 :T细胞免疫能在一定程度上延缓 BXSB小鼠 SL E的进程 ,延长小鼠的生存时间。其机制可能与 T细胞免疫诱导了针对自身反应性 T细胞的调节性免疫应答有关。

抑制性底物杂交(SSH)技术研究BXSB小鼠的差异表达基因

目的：利用抑制性底物杂交技术（Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＳＳＨ），以ＢＸＳＢ 狼疮小鼠为模型，研究系统性红斑狼疮（ＳＬＥ） 发病相关基因。方法：分离ＢＸＳＢ和Ｃ５７ＢＬ６ 小鼠骨髓细胞，提取ｍＲＮＡ，反转录构建ｃＤＮＡ 文库，利用ＳＳＨ 技术研究ＢＸＳＢ小鼠差异表达基因。结果：获得了１２ 个阳性克隆，其中有３ 个克隆编码ＴＣＲ、ＭＨＣ Ⅱ类分子及逆转录病毒基因表达产物，均在ＢＸＳＢ狼疮小鼠高表达，表明其与系统性红斑狼疮发病有关；１ 个在ＢＸＳＢ狼疮小鼠高表达的基因可能为新的ｃＤＮＡ片段，已被ＧｅｎＢａｎｋ 收录，登记号码为ＡＦ０９３４５３。结论：ＴＣＲ、ＭＨＣ Ⅱ类分子及逆转录病毒基因表达产物与系统性红斑狼疮发病有关。

体外CD134L单抗或CTLA4Ig对狼疮样BXSB小鼠脾细胞分泌IL-6、IFN-γ及自身抗体的影响

目的:探讨体外CD134L单抗或CTLA4Ig对狼疮样BXSB小鼠脾细胞分泌IL-6、IFN-γ及自身抗体的影响。方法:采用未经治疗的狼疮样BXSB小鼠模型,应用CD134L单抗和/或CTLA4Ig体外特异性阻断CD134-CD134L或B7-CD28通路后,用MTT法测定分裂原刀豆蛋白A(ConA)诱导的脾淋巴细胞增殖反应和用ELISA方法测定ConA诱导的脾细胞培养上清液中IL-6、IFN-γ和抗ds-DNA抗体的表达水平,并与经中药狼疮方或强的松治疗的狼疮样BXSB小鼠模型进行比较。结果: (1)在单纯培养或经ConA刺激后培养,相比于正常对照鼠,狼疮样小鼠脾淋巴细胞都表现有增殖反应性的显著增高,IFN-γ、 IL-6蛋白量的增高和抗ds-DNA抗体的过度分泌。(2)经强的松或中药狼疮方体内治疗后,狼疮样小鼠脾淋巴细胞体外培养的增殖反应性及IFN-γ、IL-6的分泌都受到明显抑制,抗ds-DNA抗体的产生也明显减少。(3)体外单独应用CD134L单抗或 CTLA4Ig特异性阻断CD134-CD134L或B7-CD28共刺激信号通路,同样可以显著抑制体外培养的狼疮样小鼠脾淋巴细胞的增殖反应及IFN-γ、IL-6的分泌,并可明显减少抗ds-DNA抗体的产生,但它们的抑制作用比强的松、中药狼疮方体内治疗狼疮样小鼠时所表现出的类似效应要弱。(4)联合CD134L单抗和CTLA4Ig,则治疗作用显著提高,其抑制脾淋巴细胞的增殖反应及 IFN-γ、IL-6的分泌,抗ds-DNA抗体产生的作用都优于中药狼疮方的体内治疗效果,而与强的松的体内治疗效应相当。结论: CD134-CD134L可以提供独立的、非B7-CD28依赖的,另一种驱动抗原特异性T细胞增殖的协同刺激通路。同时阻断B7与 CD28、CD134L与CD134间的相互作用,使自身反应性T淋巴细胞的活化和增殖受到快速而最大限度的抑制,对治疗SLE等自身免疫性疾病可能是一种较理想的免疫干预模式。

大黄素对BXSB狼疮样小鼠肾脏病变的影响及其机制

目的 : 探讨大黄素治疗狼疮性肾炎的作用及其机制。方法 : 取已发生狼疮性肾炎的BXSB雌性小鼠 3 5只 ,分别予以胃饲不同浓度的大黄素混悬液和生理盐水。 3 0天后 ,检测每只小鼠的 2 4h尿蛋白含量 ,同时取出肾脏制成切片 ,SP(streptavidin/peroxidase)法检测肾小球细胞间粘附分子 1(ICAM 1)表达水平 ,并用高清晰度彩色病理图文分析系统 (HPIAS)得出定量结果。结果 : 与生理盐水组相比 ,胃饲大黄素的各组小鼠 2 4h尿蛋白含量和肾小球ICAM 1表达水平均有所下降 (P <0 .0 5 ) ,尿蛋白含量与大黄素剂量 (0～ 6.2 5mg/kg范围内 )呈直线负相关 (P <0 .0 1) ;肾小球ICAM 1表达水平与大黄素剂量呈负相关(P <0 .0 0 1) ;尿蛋白含量与ICAM 1表达水平呈正相关 (P <0 .0 0 1)。结论 : 大黄素能降低BXSB狼疮样小鼠尿蛋白水平 ;其免疫药理学机制可能与下调肾小球ICAM

狼疮样BXSB小鼠脾细胞CD134/CD134L的表达及治疗影响

为了探讨CD134/CD134L共刺激信号在SLE发病机制中的可能作用及治疗的影响。采用狼疮样BXSB小鼠模型,随机分为三组:狼疮方治疗组、强的松治疗组、未治疗组,每组6只,疗程10周。另设与BXSB小鼠同基因的正常C57BL/6小鼠6只为正常对照组。分别采集上述各组小鼠外周血和脾组织进行检测。结果:(1)与正常对照组比较,未治疗组BXSB小鼠的血清IgG和抗dsDNA抗体水平和脾组织CD4+CD134+、CD8+CD134+、CD19+CD134L+、CD23+CD134L+的百分比及CD134、CD134L的mRNA拷贝数都显著增高(P<0.05或P<0.01)。且血IgG和抗dsDNA抗体水平与脾细胞CD19+CD134L、CD23+CD134L的水平增加呈正相关;(2)狼疮方治疗组或强的松治疗组的血清IgG、抗dsDNA抗体水平和脾组织CD4+CD134+、CD8+CD134+、CD19+CD134L+、CD23+CD134L+的百分比及CD134、CD134L的mRNA拷贝数都显著低于未治疗组(P<0.05或P<0.01),而与正常对照组无显著差异(P均>0.05)。狼疮样BXSB小鼠存在CD134/CD134L的异常表达。狼疮方可减轻狼疮样小鼠高丙种球蛋白血症,减少体内自身抗体产生,对CD134/CD134L的下调作用与强的松相当。

SLE的BXSB小鼠模型病情进展状况的研究

目的 : 探讨系统性红斑狼疮样动物模型BXSB小鼠疾病进展状况。方法 : 分别测定不同月份的BXSB小鼠的 2 4小时尿蛋白含量、血清抗核抗体滴度及其肾脏免疫复合物沉积状况。结果 : 雄性BXSB小鼠 2月龄出现肾脏病理改变 ,3月龄出现临床指标改变。雌性BXSB小鼠 4月龄出现肾脏病理改变 ,5月龄出现临床指标改变 ,3月龄后BXSB雄性小鼠的各指标均较雌性高。结论 : 3月龄雄性BXSB小鼠处于狼疮肾炎阶段。雄性BXSB小鼠较雌性发病早且严重 ;在判断病情、作诊断时 ,应多项指标综合分析。

可诱导共刺激分子在BXSB狼疮小鼠肾脏中的表达

目的观察可诱导共刺激分子(ICOS)在BXSB狼疮小鼠肾脏中的表达,探讨ICOS在狼疮肾炎发病机制中的潜在作用。方法选取8周龄及16周龄雄性BXSB小鼠各6只,并以8周龄C57BL/6雄性小鼠6只为正常对照,用免疫组织化学及实时荧光定量PCR方法,检测ICOS在小鼠肾脏中的表达水平。结果正常对照组C57BL/6小鼠肾组织ICOS染色少许肾小管细胞呈浅棕色;8周龄及16周龄BXSB小鼠肾脏组织ICOS强阳性表达,细胞呈深棕色着色,分布于肾小管。8、16周龄BXSB组小鼠肾组织内ICOS mRNA表达水平[(6.43±0.92),(9.48±1.30)]均较正常对照组(4.58±0.63)增加,差异有统计学意义(均P<0.01);16周龄BXSB组小鼠的ICOS mRNA表达水平较8周龄BXSB组增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肾组织ICOS的分布及表达增加可能是BXSB小鼠狼疮肾炎发病的重要机制之一。

系统性红斑狼疮BXSB小鼠骨髓B细胞系细胞的分化发育

目的 :研究Yaa基因与骨髓B细胞系细胞的分化发育是否有相互关系。方法 :用Whitlock Witte法从骨髓细胞中培养纯化出B细胞系细胞 ,继而检测B细胞系细胞对脂多糖 (lipopolysaccharide,LPS)刺激后的表型、增殖反应和抗DNA抗体的产生以及对地塞米松诱导后的凋亡情况。结果 :用Whitlock Witte法成功地从骨髓细胞中培养分离出B细胞系细胞。经LPS刺激后 ,雌雄BXSB小鼠B细胞系细胞膜表面CD19抗原和膜表面Ig的分布相似 ,都出现较强的增殖反应和产生IgM类型的抗ssDNA和dsDNA抗体 ,但是对地塞米松诱导的凋亡作用不敏感。结论 :Yaa基因对BXSB小鼠骨髓中B细胞系细胞的分化发育无影响 ,提示Yaa基因仅在外周免疫器官的成熟B细胞中表达活性 ;并且BXSB小鼠骨髓中的自身反应性B细胞系细胞未被删除 ,可能是产生自身抗体的内在原因之一。

BXSB小鼠肝、肾、脾脏器中C－myc和N－ras原癌基因的表达

用同位素标记ｃＤＮＡ探针的斑点杂交方法观察了ＢＸＳＢ小鼠肝、肾、脾脏器中Ｃ－ｍｙｃ和Ｎ－ｒａｓ原癌基因的表达情况。结果表明ＳＬＥ发病较重的４～６月龄ＢＸＳＢ雄鼠脾脏和肾脏均表达Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ，肝脏未见表达。ＳＬＥ发病较轻的４～６周龄ＢＸＳＢ雄鼠仅发现脾脏表达Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ。ＢＸＳＢ小鼠肝、肾、脾各脏器均无Ｎ－ｒａｓｍＲＮＡ表达。本研究结果提示Ｃ－ｍｙｃ基因可能参与ＢＸＳＢ小鼠淋巴细胞异常活化和狼疮性肾炎的发生。