转录因子Bach2在适应性免疫细胞中的研究进展

Bach2是一种具有碱性亮氨酸拉链结构的转录因子,与小Maf家族蛋白等形成异源二聚体,并与靶基因结合,主要发挥转录抑制作用。Bach2主要在免疫器官中表达,尤其是高表达于介导适应性免疫的B细胞和T细胞中。Bach2参与B细胞的发育、增殖和凋亡。在CD4^(+)T细胞和CD8^(+)T细胞中,Bach2的调控作用具有多样性。此外,B细胞和T细胞在机体的适应性免疫中发挥关键作用,阐明转录因子Bach2在其发育和功能中的作用机制可能为相关免疫性疾病的防治提供新思路和新靶点。

Bach2对Th2细胞内IL-33生物学功能的影响

目的:探讨Bach2与Th2细胞内IL-33生物学功能的关系。方法:构建Bach2基因的条件敲除小鼠(Bach2-CKO小鼠),将Bach2-CKO小鼠与正常小鼠分为两组,IL-33经鼻诱导Th2型免疫应答,对比分析两组小鼠肺部炎症情况;从小鼠脾脏中分离na?ve CD4^(+)T细胞并诱导分化为Th2细胞;下调(或上调)细胞内Bach2表达后给予IL-33刺激,检测Th2型细胞因子表达。结果:与正常小鼠相比,IL-33显著增加Bach2-CKO小鼠肺组织内炎症细胞浸润、黏液腺分泌以及IL-4、IL-5和IL-13mRNA表达;与正常Th2细胞相比,IL-33更加显著地促进Bach2-/-Th2细胞IL-5和IL-13表达(P<0.01);上调细胞内Bach2表达显著抑制IL-33相关IL-5和IL-13表达(P<0.01)。结论:Bach2参与Th2细胞内IL-33/ST2信号通路调控,可有效抑制该细胞内IL-33的生物学功能。

TSLP、Bach2及IL⁃9在嗜酸性粒细胞浸润鼻息肉中的表达及临床意义

目的探讨胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、BTB与CNC同源基因2(Bach2)、白细胞介素⁃9(IL⁃9)在嗜酸性粒细胞浸润鼻息肉(Eos NPs)中的表达情况及临床意义。方法收集2017年2月至2019年2月于南阳市中心医院行鼻内镜手术的85例Eos NPs患者的85份下鼻甲组织(实验组),根据Eos NPs分期标准分为:Ⅱ型2期37例,Ⅱ型3期48例;同时选取52例行单纯鼻中隔矫正术患者的52份下鼻甲组织(对照组)。比较不同组织、分期的TSLP、Bach2、IL⁃9水平,绘制ROC曲线,分析TSLP、Bach2、IL⁃9三者单一检测及联合检测对Eos NPs诊断的灵敏度、特异度及AUC数值。结果实验组TSLP、IL⁃9水平明显高于对照组,Bach2阳性表达率明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。在不同分期中,II型3期的TSLP、IL⁃9水平明显高于Ⅱ型2期,Bach2阳性表达率明显低于Ⅱ型2期,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性显示,TSLP、IL⁃9与Eos NPs分期呈正相关(R=0.625,P=0.036;R=0.893,P=0.027),Bach2与Eos NPs分期呈负相关(R=-0.832,P=0.049)。TSLP、Bach2、IL⁃9三者联合检测诊断Eos NPs的灵敏度、特异度及AUC分别为94.52%、90.66%、0.926,显著高于单一检测(P<0.05)。结论TSLP、Bach2、IL⁃9的表达水平与Eos NPs有关,联合三者检测诊断Eos NPs的意义重大。

转录因子BACH2在冠心病患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的:研究转录因子BACH2在冠心病(CAD)患者外周血单个核细胞中的表达水平,并探讨其在冠心病发病中的意义及作用机制。方法:采用密度梯度离心法分离急性冠脉综合征(ACS)、稳定型心绞痛(SA)和正常对照组(NS)三组受试者外周血单个核细胞(PBMC);采用RT-PCR和Western blot法检测不同组别PBMC中BACH2及TLR4的表达量;采用ELISA法检测不同组别血清ox-LDL及TH1,TH2,TH17和Treg细胞各自标志性细胞因子(IFN-γ,IL-4,IL-17和TGF-β1)的水平。组间差异的比较使用方差齐性分析,各变量之间的相关性使用直线回归分析。结果:ACS组病人PBMC中的BACH2表达显著下调,TLR4表达显著上调。ACS组血清ox-LDL及IFN-γ、IL-4、IL-17水平较SA组和NC组显著升高,而TGF-β1显著降低。CAD患者PBMC中的BACH2表达量与TLR4表达水平显著负相关;BACH2表达量与IFN-γ、IL-4和IL-17水平负相关,与TGF-β1水平显著正相关。结论:冠心病患者循环中的BACH2表达降低;CAD病人循环中高浓度的ox-LDL可能通过激活TLR4抑制BACH2的表达,进而造成CD4^+T细胞亚群分化和发育失调以及炎症因子分泌紊乱,从而导致冠心病的发生和发展。

Bach2在嗜酸粒细胞性慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉组织中表达及临床意义

目的 探究BTB与CNC同源基因2(Bach2)在不同类型慢性鼻-鼻窦炎(CRS)中的表达及临床意义。方法 43例慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)患者中,嗜酸粒细胞性慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(ECRS)19例,非嗜酸粒细胞性慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(non-ECRS)24例,另有20例对照受试者,分别收集鼻息肉和筛窦黏膜。通过定量逆转录-聚合酶链反应、免疫组织化学染色和蛋白质印迹法测定收集的组织样品中Bach2的表达情况;通过苏木精-伊红染色,测定组织中嗜酸粒细胞数。疾病的严重程度通过计算机断层扫描(CT)、鼻内窥镜检查和受试者症状来评估。结果 Bach2主要表达在鼻上皮细胞层中。Bach2的mRNA和蛋白表达在ECRS中显著低于non-ECRS,但高于对照组(P<0.05,P<0.01)。Bach2的mRNA表达水平与所有ECRS患者的CT扫描结果、鼻内镜评分及组织中每高倍镜视野中的嗜酸粒细胞数之间呈一定的相关性(P<0.01,P<0.05,P<0.01),而与VAS评分间无明显相关性(P>0.05)。结论 Bach2在ECRS中表达与non-ECRS相比较低,致ECRS中嗜酸性炎症,并且与其疾病严重程度有关。

新的候选抑癌基因Bach2在胰腺导管腺癌中的表达

目的探讨Bach2在胰腺癌中的表达及意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测胰腺癌(37例)、癌旁正常组织(29例)、人胰腺癌细胞株(3株)和正常导管上皮细胞株中Bach2的表达,采用蛋白质免疫印迹法和免疫组织化学(IHC)方法分别检测胰腺癌冰冻组织(18例)和石蜡包埋组织(15例)中Bach2的表达。结果 Bach2在胰腺癌表达明显下降(6.264±2.148)(P<0.05),在人胰腺癌细胞株BXPC-3、PANC-1和SWl990中表达明显下降(2.705±0.473)、(2.481±0.381)和(4.629±0.592)(P<0.01);胰腺癌组织和细胞株中Bach2蛋白质表达相对下降;胰腺癌神经侵犯者癌组织中Bach2表达更低(4.891±2.664)(P<0.05)。结论 Bach2在胰腺癌组织和细胞株中表达下降,可能与胰腺癌发生和神经侵犯相关。

MiR30b与小鼠Bach2相互作用的研究

目的研究B细胞末端分化过程中miR30b新的作用靶点。方法经生物信息学分析,利用特异性引物以及定点突变引物从小鼠c DNA中分别扩增大小为530、361和189bp三个目的片段,胶回收并对361和189bp进行拼接,获得野生型、突变型小鼠Bach2 mRNA特异性片段,分别与pmir GLO载体连接,构建野生型、突变型重组荧光素酶报告基因质粒pmir GLO-m Bach2、pmir GLO-m Bach2 mt;与miR30b共转染至HEK293 T细胞,分析其荧光素酶活性。结果重组荧光素酶报告基因质粒经双酶切及测序证实构建正确;共转染后,与pmir GLO+miR30b组相比,pmir GLO-m Bach2+miR30b组的荧光素酶活性明显降低(P<0.05),而pmir GLO-m Bach2 mt+miR30b组的荧光素酶活性则无明显改变(P>0.05)。结论小鼠Bach2 mRNA是miR30b的靶点。

bach1和bach2在斑马鱼早期发育中的表达分析

目的研究bach1和bach2基因在斑马鱼早期发育中的表达规律。方法以不同发育时期的野生型斑马鱼胚胎和幼体为材料，采用地高辛标记的反义RNA探针以及整体原位杂交技术确定两个基因在斑马鱼早期发育中的表达特征。结果在斑马鱼早期胚胎发育过程中bach1，和bach2基因在整个胚胎都有表达，48hpf后其表达区域则主要集中到头部和内脏。结论bach1和bach2基因可能在斑马鱼的早期发育以及脑部和肝脏形成中发挥作用。

系统性红斑狼疮患者CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞中转录因子Bach2的表达及其影响

目的·研究系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞中转录因子BTB与CNC同源基因2(BTB and CNC homology 2,Bach2)的表达及其对细胞功能的影响。方法·采用流式细胞仪分选获得活动期SLE患者(SLE组)和健康对照者(对照组)外周血CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞,荧光定量PCR和Western blotting检测该类细胞中Bach2的表达;分析SLE患者该类细胞中Bach2的平均荧光强度(median fluorescence intensity,MFI)与SLE疾病活动指数(systemic lupus erythematosus disease activity index,SLEDAI)的相关性。采用流式细胞术比较SLE患者IL-17+CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞和IL-17-CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞中Bach2的MFI。在Bach2过表达体系中,采用流式细胞术检测CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞表达IL-17的细胞比例,采用ELISA方法检测细胞培养上清液中IL-17的含量。结果·与对照组相比,SLE组CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞Bach2的m RNA和蛋白表达水平均显著降低(均P<0.01);SLE组Bach2的MFI与SLEDAI呈显著负相关(R2=0.433,P=0.001)。SLE患者IL-17+CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞Bach2的MFI显著低于IL-17-CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞(P=0.013)。当Bach2过表达时,SLE患者CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞表达炎症因子IL-17的细胞比例明显下降(P=0.032),细胞培养上清液中IL-17含量显著降低(P=0.008)。结论·SLE患者CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞Bach2表达下降,在该类细胞中过表达Bach2可使IL-17表达下降。

MiR-130a-3p通过抑制BACH2抑制鼻咽癌细胞增殖和转移

目的探究对鼻咽癌细胞的作用及其靶向基因在鼻咽癌细胞中的相互作用机制.方法应用脂质法将MiR-130a-3p模拟物或pCMV-BACH2重组质粒转染进NPC细胞中,用MTT法检测细胞增殖情况,用划痕试验检测细胞转移功能,用Western bloting检测相关蛋白表达水平.结果 (1)NP9细胞株中miR130a-3p表达量显著低于NPC细胞株,BACH2的mRNA和蛋白质表达量在NPC细胞株明显高于NP9细胞组.(2)miR130a-3p过度表达抑制细胞增殖和转移.(3)miR130a-3p在NPC细胞中靶向作用于BACH2.(4)下调BACH2抑制NPC细胞增殖和迁移.(5)过表达BACH2降低miR130a-3p在NPC细胞的抑制作用.结论 miR130a-3p是一种NPC肿瘤抑制基因,抑制BACH2抑制鼻炎癌细胞增殖和转移.

转录因子Bach2的构建及表达

目的构建高效表达人Bach2基因的慢病毒重组质粒,并探索其在免疫疾病中的机制。方法取健康人外周血分离单个核细胞并提取总RNA逆转录为c DNA,扩增Bach2基因CDS序列,插入p LVX-IRES-Zs Green1慢病毒质粒。磷酸钙共转染法包装慢病毒,感染人HEK293T细胞。空白质粒感染HEK293T细胞作为对照。免疫印迹分析空白质粒和过表达质粒HEK293T细胞中Bach2基因表达。结果 PCR结果显示,Bach2成功插进p LVX-IRES-Zs Green1质粒中,real-time PCR以及Western blot证实,Bach2基因成功在HEK293T细胞中高效表达。结论成功构建高效表达Bach2基因的慢病毒穿梭质粒,并成功在HEK293T细胞表达。

沉默环状RNA BACH2抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为

目的检测环状RNA(circular RNA)BACH2在胶质瘤组织和胶质瘤细胞U87中的表达水平,探讨其对U87细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。方法 26例胶质瘤患者术中取肿瘤标本,应用实时PCR方法检测circBACH2在胶质瘤组织和U87细胞的表达。转染circBACH2沉默质粒载体后,CCK-8方法检测U87细胞增殖,Transwell小室方法检测U87细胞的迁移及侵袭,流式细胞仪检测U87细胞的凋亡。结果 circBACH2在胶质瘤组织和U87细胞中高表达(P<0.01)。circBACH2沉默可以抑制U87细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进凋亡(P<0.01)。结论 circBACH2在胶质瘤组织和U87细胞中表达上调,促进U87细胞增殖、迁移和侵袭,抑制细胞凋亡。

Bach1/Nrf2通路调控HO-1在大鼠肢体缺血再灌注后肺损伤中的作用机制研究

目的探讨Bach1/Nrf2通路调控血红素加氧酶(HO-1)在大鼠肢体缺血再灌注后肺损伤中的作用机制。方法选取120只SD大鼠作为研究对象,随机分为正常对照组、缺血再灌注组、Znpp组,Copp组。正常对照组不造成肢体缺血再灌注模型。缺血再灌注组给予缺血4 h,再灌注12 h处理。Znpp组加入HO-1的抑制剂原卟啉锌(5 mg/kg),Copp组加入HO-1的激动剂原卟啉钴(5 mg/kg)。测定各组大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),髓过氧化物酶(MPO)水平,测定各组大鼠肺组织SOD、MDA、MPO水平。采用RT-PCR法测定肺组织中HO-1、Bach1、Nrf2蛋白的表达。采用Pearson相关性分析法分析HO-1、Bach1、Nrf2的相关性。结果缺血再灌注组血清和肺组织MDA、MPO水平显著高于正常对照组,SOD水平显著低于正常对照组(P <0.05)。Znpp组的血清和肺组织MDA、MPO水平均显著高于缺血再灌注组(P <0.05),SOD水平显著低于缺血再灌注组(P <0.05);Copp组的血清和肺组织MDA、MPO水平均显著低于缺血再灌注组(P <0.05),SOD水平显著高于缺血再灌注组(P <0.05)。缺血再灌注组的HO-1和Nrf2蛋白水平显著低于正常对照组,Bach蛋白水平显著高于正常对照组(P <0.05)。Znpp组的HO-1和Nrf2蛋白水平显著低于缺血再灌注组,Bach蛋白水平显著高于缺血再灌注组(P <0.05);Copp组HO-1蛋白和Nrf2蛋白水平显著高于缺血再灌注组,Bach1蛋白水平显著低于缺血再灌注组(P <0.05)。Pearman相关性分析法结果显示HO-1与Nrf2呈显著正相关关系,与Bach1呈显著负相关关系。结论 HO-1的表达可能受Bch1/Nrf2通路的调控参与肢体缺血再灌注后肺损伤的过程。

黄芪甲苷调控Nrf2/Bach1/HO-1信号通路抑制缺氧复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤

研究黄芪甲苷(astragalosideⅣ,AS-Ⅳ)对缺氧复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用及其机制。将H9c2心肌细胞缺氧培养12 h再复氧培养8 h复制心肌细胞缺氧复氧损伤(H/R)模型,AS-Ⅳ干预后检测活性氧(ROS)的产生,细胞活力,细胞上清SOD,MDA,IL-6,TNF-α等指标水平,以评估AS-Ⅳ的干预效应;进一步通过蛋白印记试验观察AS-Ⅳ对Nrf2,Bach1,HO-1蛋白表达的影响;最后通过siRNA方法敲低HO-1基因表达观察其对AS-Ⅳ干预效应的逆转作用。结果显示,与H/R模型组比较,H/R+AS-Ⅳ组细胞活力显著提高(P<0.01),细胞内ROS显著减少(P<0.01),细胞上清MDA,hs-CRP,TNF-α含量显著减少(P<0.01),SOD含量显著增加(P<0.01);细胞HO-1蛋白表达显著增加(P<0.01),细胞核蛋白Nrf2表达显著增多(P<0.01),细胞核蛋白Bach1表达显著减少(P<0.01);预先采用脂质体转染HO-1 siRNA至H9c2细胞,敲低HO-1的表达后,可部分逆转AS-Ⅳ的上述效应。该研究结果提示,AS-Ⅳ对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤具有显著的保护作用,其机制与调控Nrf2/Bach1/HO-1信号通路有关。