TaqMan多重实时定量PCR快速检测3种常见食源性病原菌

建立一种可同时快速检测大肠杆菌O157:H7、单增李斯特菌和蜡样芽孢杆菌的多重实时定量PCR(qPCR)方法。依据大肠杆菌O157:H7 tir基因、单增李斯特菌mpl基因和蜡样芽孢杆菌entFM基因的保守序列分别设计特异性引物和TaqMan探针,建立多重qPCR反应体系,进行灵敏度、特异性和稳定性试验,同步检测人工染菌牛奶样品中的病原菌并与国家标准方法作对比。结果表明,建立的多重qPCR方法灵敏度高,最低检出限为12 CFU/mL;特异性强,只对3种目标菌进行PCR扩增;稳定性好,各重复性试验中Ct值的变异系数<1%;所有受污染样品阳性检出率均为100%,与国家标准方法检测结果一致,且检测周期缩短至6 h。本研究建立的TaqMan多重qPCR方法能同时快速、准确地检测乳品中的大肠杆菌O157:H7、单增李斯特菌和蜡样芽孢杆菌,为食品安全提供技术支撑。

淮安市218批婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌毒力基因检测和耐药性分析

目的 了解淮安市婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌污染现状及其对药物敏感、主要毒力基因携带情况。方法2022~2023年抽取淮安市七个县区的婴幼儿奶粉及婴幼儿辅助食品共218批,根据GB4789.14-2014《食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验》蜡样芽胞杆菌平板计数法(第一法)进行检测,并进行药物敏感性试验,采用荧光定量PCR对检出的蜡样芽胞杆菌进行溶血性(hblC)基因、非溶血性基因(nheB)、呕吐毒素基因(ces)检测。结果 218批婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌检出39批次,检出率达17.89%。在23种药物敏感性试验中,蜡样芽胞杆菌对庆大霉素、阿米卡星、替考拉宁、万古霉素、氯霉素、利奈唑胺、呋喃妥因、利福平、左氧氟沙星、莫西沙星、诺氟沙星敏感率100%,对环丙沙星、米诺环素、四环素、红霉素、克林霉素、莫匹罗星高浓度、复方新诺明、苯唑西林敏感率分别为97.44%、92.31%、89.74%、82.05%、38.46%、23.08%、20.51%、5.13%,对达托霉素非敏感,对头孢洛林、氨苄西林、青霉素全部耐药。溶血性hblC基因携带率高达100%,非溶血性基因nheB携带率为58.97%,本次试验未检出呕吐毒素基因ces。结论 婴幼儿食品蜡样芽孢杆菌检出率较高且检出菌中携带至少一种毒力基因的概率高达100%。对头孢洛林、氨苄西林、青霉素全部耐药,对达托霉素、苯唑西林等药物敏感性差,可为临床用药方案提供指导。

基于转录组学分析揭示蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)AR1002阻控黄曲霉生长的生理机制研究

黄曲霉(Aspergillus flavus)极易侵染油料等农产品,其次级代谢产物黄曲霉毒素严重危害人体健康,阻控黄曲霉污染已成为亟待解决的国际难题。为探明蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)AR1002抑制黄曲霉生长、阻控黄曲霉污染的生理及分子机制。该研究采用AR1002代谢产物对黄曲霉进行处理,并对黄曲霉生长及产孢表型进行鉴定,通过显微结构及转录组学分析,对AR1002的抑菌机制进行了初探。蜡样芽胞杆菌AR1002代谢物可抑制黄曲霉菌丝生长、干物质积累分别达24.73%,65.00%,减少孢子数量达98.80%;AR1002通过抑制glpA和AYR1等关键基因表达调控黄曲霉甘油磷酸代谢,通过抑制SEC61A、RAD23、ATP13A1、UBE2G2等关键基因的表达调控内质网中蛋白质加工;此外,AR1002代谢产物通过下调RAD51和RAD54B等DNA修复机制相关基因,抑制黄曲霉同源重组及非同源性末端连接过程,最终达到抑制黄曲霉生长及产孢的目的。上述结果表明,蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)AR1002有望应用于实际生产中以应对黄曲霉污染问题。

两种培养基应用于蜡样芽孢杆菌的计数效果比较

目的比较两种蜡样芽孢杆菌计数培养基的检测效果。方法分别使用甘露醇卵黄多黏菌素B(mannitol-yolk-polymyxin-B,MYP)培养基和蜡样芽孢杆菌显色培养基对于包括蜡样芽孢杆菌在内的10株芽孢杆菌的标准菌株、8株非芽孢杆菌标准菌株、30株食品中蜡样芽孢杆菌的分离株进行生长率、特异性及选择性比对,并应用两种培养基对737件实际食品样品进行计数效果对比。结果蜡样芽孢杆菌显色培养基与MYP培养基虽然在生长率和实际样品检出率差异无统计学意义,但特异性及选择性均优于MYP,特别是显色培养基的特异性在实际样品的检测中更具优势。结论蜡样芽孢杆菌显色培养基较传统的MYP培养基具有更好的特异性及选择性,建议在食品样品蜡样芽孢杆菌计数检测时增加显色培养基。

溶藻菌CZBC1在氯化物型盐碱水中对铜绿微囊藻的溶藻效果研究

为研发氯化物型盐碱水体溶藻菌菌剂,选取溶藻菌菌株CZBC1,探讨了滤液组、菌体组、菌液组在初始铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)密度分别为10^(5)和10^(6)个·mL^(-1)的氯化物型盐碱水中对铜绿微囊藻的溶藻效果。结果发现,菌株CZBC1同时具有直接和间接2种溶藻方式,菌株CZBC1的滤液组、菌体组、菌液组作用于铜绿微囊藻时能使藻细胞变形、褪色或破裂,在氯化物型盐碱水体中可以发挥良好的溶藻效果。当初始藻密度为10^(5)个·mL^(-1)时,第6天菌液组的铜绿微囊藻密度可降至2.30×10个·mL^(-1),菌体组降至1.27×10~2个·mL^(-1),对照组为3.67×10^(5)个·mL^(-1),菌液组和菌体组极显著低于对照组(p<0.01),2组的最高溶藻率可达99%以上。当初始藻密度为10^(6)个·mL^(-1)时,第6天菌液组的铜绿微囊藻密度可降至8.30×10^(5)个·mL^(-1),对照组为3.17×10^(6)个·mL^(-1),菌液组显著低于对照组(p<0.05),最高溶藻率为78.8%。从溶藻效果来看,菌液组>菌体组>滤液组。研究表明,溶藻菌CZBC1在氯化物型盐碱水中对铜绿微囊藻具有良好的溶藻效果,可用于氯化物型盐碱池塘中的微囊藻水华防控。

蜡样芽孢杆菌性眼内炎疾病特点分析及药物治疗策略

目的:分析蜡样芽孢杆菌性眼内炎的疾病特点和细菌耐药情况,探讨药物治疗措施。方法:收集某院2013年1月~2023年12月期间经细菌学培养确诊为蜡样芽孢杆菌性眼内炎的7例患者的临床资料,统计分析患者的职业、病因、治疗前后视力变化、手术方式、药敏试验结果、药物治疗策略和住院经济学指标。结果:纳入的7例蜡样芽孢杆菌性眼内炎患者经手术和药物治疗后,末次出院时均保留眼球,视力检查不配合2例(28.57%),视力下降1例(14.29%),视力不变1例(14.29%),视力提高1级2例(28.57%),视力提高4级1例(14.29%)。药敏试验结果显示,该菌对万古霉素、氯霉素、阿米卡星、利福平和亚胺培南西司他丁敏感,对氨苄西林、青霉素、头孢唑林和头孢他啶耐药。4例(57.14%)住院次数大于1次,5例(71.43%)手术次数多于1次,6例(85.71%)住院总费用高于2万元,7例患者住院总天数均大于1周。结论:蜡样芽孢杆菌所致的眼内炎较少见,但由于其具有快速的繁殖能力和迁移速率,眼球感染后可诱发严重炎症反应及视网膜结构破坏,应给予快速和适当的治疗干预,玻璃体腔内注射万古霉素为治疗蜡样芽孢杆菌性眼内炎的主要手段。

基于流式细胞仪提高乳制品商业无菌检验时效性的研究

目的基于流式细胞仪探究提高乳制品商业无菌检验项目时效性。方法以地衣芽孢杆菌CMCC(B)63552和蜡样芽孢杆菌CMCC(B)63303菌株制备定量参考品。以4种灭菌乳为基质,制备染菌浓度分别为800、8000、80000 CFU/mL的菌悬液,测试流式细胞仪法灵敏度。制备染菌浓度为8 CFU/样品和80 CFU/样品的灭菌乳和调制乳样品,经(36±1)℃保温(24±2)h后,按照GB 4789.26法和流式细胞仪法进行检测,并分析比较两种方法检测结果。结果在灭菌乳基质中,染菌浓度为800 CFU/mL时,流式细胞仪法对人工污染地衣芽孢杆菌样品的阳性检出率为75%,而对人工污染蜡样芽孢杆菌的样品均未检出阳性;染菌浓度为8000 CFU/mL和80000 CFU/mL时,流式细胞仪法对地衣芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌污染样品的阳性检出率均为100%。对人工污染8 CFU和80 CFU地衣芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌的灭菌乳和调制乳样品,经保温处理后,流式细胞仪法检出率为100%,GB 4789.26法中未见样品膨胀,但是镜检和培养结果检出率为100%。结论当样品中染菌浓度≥8000 CFU/mL时,流式细胞仪法可稳定检出。人工污染地衣芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌的灭菌乳和调制乳样品经保温处理(24±2)h后,流式细胞仪法和GB 4789.26法检出率均为100%。

南瓜白粉病拮抗内生细菌Bacillus cereus B4-2的分离鉴定及生防效果

从高抗白粉病的南瓜植株内分离筛选出对南瓜白粉病有较好防治效果的内生拮抗细菌菌株,为南瓜白粉病的生物防治提供新途径。采用孢子萌发抑制法、叶盘漂浮法和温室盆栽试验筛选出有较好防效的内生细菌,用形态观察、生理生化测定和分子生物学方法进行鉴定。结果表明,从高抗白粉病的南瓜自交系22G3植株内分离获得29株内生拮抗细菌菌株,5个菌株对南瓜白粉菌的孢子萌发抑制率在50%以上,其中菌株B4-2对白粉菌的孢子萌发抑制率最高,为88.65%。叶盘和室内盆栽试验结果均表明,菌株B4-2对南瓜白粉病的防治效果最好,防治效果分别达79.58%和83.21%。不同稀释倍数的B4-2发酵液对南瓜白粉病均有一定的防治效果,随着稀释倍数的增大,防治效果降低,其中菌株B4-2发酵液原液对南瓜白粉病的防治效果最好,达82.14%。通过形态特征、生理生化特征及基因序列分析,鉴定菌株B4-2为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。综上所述,蜡样芽孢杆菌B4-2能较好地防治南瓜白粉病,有一定的开发潜力。

生鲜蔬菜来源的蜡样芽胞杆菌毒力基因分布与MLST分析

为了解生鲜蔬菜来源蜡样芽胞杆菌的分子流行病学特征,采用PCR技术对来自5种生鲜蔬菜的37株蜡样芽胞杆菌分离株进行了毒力基因(nheA、nheB、nheC、hblA、hblC、hblD、entFM、cytK、ces)检测和多位点序列分型(MLST)分析。结果表明:37株分离株除呕吐毒素基因ces未检出外,其他8个毒力基因均有检出,其中溶血性肠毒素基因nheB的检出率最高,为94.6%,其次为溶血素基因hblC、hblD、hblA和肠毒素基因entFM,检出率均超过80%,溶血性肠毒素基因nheA和nheC检出率较低,分别为78.4%和64.9%;细胞毒素基因cytK的检出率最低,为29.7%。根据毒力基因携带模式,将37株分离菌株分成14个型别,II型携带率最高,携带Hbl和Nhe两种基因的型别有I型、II型和IV型。MLST分析则发现,37株分离菌株可分为30个ST型和5个CC群。ST4和ST378为主要ST型;CC142分布最广泛,不仅包含的ST型最多,而且携带5种毒力型别。以上结果表明,上海市蔬菜中蜡样芽胞杆菌具有潜在肠毒性危害并在遗传上呈现出多样性。该结果对蔬菜中蜡样芽胞杆菌引起食物的监控、预警和爆发后感染源追踪具有指导意义。

4种常见食源性病原菌多重PCR检测技术研究

为了解决常规方法检测食源性病原菌存在操作繁琐、周期长的问题,基于4种常见食源性病原菌特异基因序列扩增提出了一种快速、高效的多重PCR(multiplex polymerase chain reaction, MPCR)检测方法。根据单增李斯特菌iap基因、蜡样芽孢杆菌gyrB基因、产志贺毒素大肠埃希氏菌stxⅠ基因、肠炎沙门氏菌invA基因的特异序列分别设计引物后建立MPCR反应体系,测试其特异性、敏感性和可行性,并与国标培养法进行比较。结果表明:MPCR扩增出4个目标基因的特异性条带大小依次为371、221、432、171 bp;在58℃的退火温度下,MPCR扩增表现出良好的特异性,无非特异性扩增,4种病原菌最低检出限达到102CFU/mL;MPCR方法和国标培养法对多种食源性病原菌感染的牛奶样品的检测结果完全一致,检测周期由原来的5~7 d缩减到8~9 h。所建立的MPCR技术作为一种快速、高效的检测方法,可为食品安全生产提供保障。

邯郸市售婴幼儿食品微生物污染状况调查

目的了解邯郸市售婴幼儿食品中微生物的污染状况和趋势,为邯郸市婴幼儿食品的监管提供科学依据。方法采集邯郸市18个县区2021—2023年市售婴幼儿食品,进行克罗诺杆菌属(原阪崎肠杆菌)、蜡样芽胞杆菌和卫生指示菌检测。结果125份婴幼儿食品中,肠杆菌科检出4份,检出率3.2%。42份婴幼儿食品中,菌落总数和大肠菌群均未超标。2023年42份婴幼儿谷类辅助食品致病菌检出率28.6%,其中克罗诺杆菌属检出率23.8%,蜡样芽胞杆菌检出率7.1%。婴幼儿生制类谷类辅助食品克罗诺杆菌属检出率62.5%,其显著高于婴幼儿谷类辅助食品(即食)检出率5.5%,以及婴幼儿饼干或其他婴幼儿谷物辅助食品(即食)检出率25.0%,差异有统计学意义(χ^(2)=9.108,P=0.008)。分离得到10株克罗诺杆菌属的菌株中,阪崎克罗诺杆菌占比70%,莫金斯克罗诺杆菌占20%,丙二酸盐克罗诺杆菌占10%。3株蜡样芽孢杆菌均不包含呕吐性基因(cesB-)。结论邯郸市婴幼儿食品中存在不同程度的微生物污染,尤其是婴幼儿谷类辅助食品中克罗诺杆菌和蜡样芽胞杆菌污染持续存在,对婴幼儿食品安全造成威胁,建议相关监管部门严格监督检查。

响应面法模拟优化蜡样芽孢杆菌W-3菌株产木聚糖酶发酵条件

【目的】应用响应面法对产木聚糖酶的工艺进行优化,为进一步大规模生产提供参考依据。【方法】通过单因素试验分别考察碳源、氮源、pH、温度、接种量和转速6个因素对蜡样芽孢杆菌W-3产木聚糖酶的影响。通过Design Expert 10.0.3软件中的Box-Behnken进行响应面优化设计。通过对小麦麸皮、氯化铵、pH、温度、接种量和转速进行不同组合,系统地优化了发酵条件。利用二次响应面回归方法建立酶产量与各因素之间的数学模型,并通过回归分析确定各因素对酶产量的影响程度。【结果】小麦麸皮添加量、氯化铵添加量、pH和温度是影响发酵的主效应因素,单因子优化显示,蜡样芽孢杆菌W-3发酵产木聚糖酶条件为小麦麸皮35 g/L、氯化铵5 g/L、pH 8.0、温度70℃、接种量2%、转速210 r/min。在单因子优化的基础上进一步应用响应面优化,找到了更优的发酵参数,经过优化后的发酵条件为小麦麸皮33.0 g/L、氯化铵5.1 g/L、pH 8.3、温度73℃、接种量2%、转速210 r/min,该条件下蜡样芽孢杆菌W3发酵产生的木聚糖酶的酶活为523.24 U/mL。【结论】本试验通过响应面法优化了蜡样芽孢杆菌W-3发酵条件,在33.0 g/L小麦麸皮、5.1 g/L氯化铵、pH 8.3、73℃、2%接种量、210 r/min条件下,可获得较高的木聚糖酶的酶活(523.24 U/mL),比优化之前(225.53 U/mL)提高了2.32倍。

鼠李糖脂抑制芽孢态蜡样芽孢杆菌的活性及机制

以蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)芽孢为研究对象,从表观、形态和胞膜状态等方面解析鼠李糖脂(rhamnolipids,RLs)对芽孢态B.cereus的抑制活性和作用机制。结果表明,RLs的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度分别为80.0 mg/L和160.0 mg/L。两个浓度的RLs均可以引起芽孢表面出现严重的皱缩和凹陷,破坏芽孢细胞膜完整性和通透性,导致胞内电解质、DNA和蛋白质等生物大分子外泄。同时,RLs可以通过降低芽孢的耐热性、产生胞内氧化应激反应、降低表面黏附能力、结合并干扰DNA分子等多种抑菌机制对B.cereus芽孢起到抑制和灭活作用。研究结果有利于推动RLs在食品安全领域的开发和应用。

源自蜡样芽孢杆菌抗菌肽DB16的筛选及其对金黄色葡萄球菌的抑菌机制

本实验发现当与蜡样芽孢杆菌混合培养时,金黄色葡萄球菌的生长受到抑制。结合生物信息学方法从蜡样芽孢杆菌DeadBoxATP依赖性RNA解旋酶中预测、筛选得到抗菌肽DB16(RKLLQFAKKLGIVFTK)。抗菌肽DB16对金黄色葡萄球菌的最低抑菌质量浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)为31.25μg/mL,可在0.5 h内完全抑制金黄色葡萄球菌的生长;抗菌肽DB16在磷酸盐缓冲溶液中呈现无规卷曲结构,在十二烷基硫酸钠环境中转变为α-螺旋结构。采用荧光探针、流式细胞术、透射电子显微镜、DNA凝胶电泳以及圆二色谱等方法探究抗菌肽DB16对金黄色葡萄球菌的抑菌机制,结果表明,抗菌肽DB16能够改变细菌细胞膜通透性,造成细胞内容物外泄,同时进入胞内与金黄色葡萄球菌基因组DNA结合,影响正常DNA的复制,最终抑制菌体的生长繁殖。此外,对哺乳动物红细胞的处理表明,DB16在8×MIC条件下仍无溶血性。综上,源自蜡样芽孢杆菌的抗菌肽DB16在金黄色葡萄球菌防控方面具有很大应用潜力。

降解多种真菌毒素的芽孢杆菌的筛选鉴定及其发酵饲料应用

粮食作物在生长及其收获储存过程中,极易被有害真菌感染导致存在黄曲霉毒素(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、呕吐毒素(DON)这3种真菌毒素污染,严重危害人和动物的健康。研究旨在筛选一种可以同时降解饲料原料中这3种真菌毒素的菌株,首次使用亚甲基蓝褪色作为降解真菌毒素筛选方法,再以过氧化物酶复筛最终获得一株蜡样芽孢杆菌BL-17,该菌株对AFB1、ZEN、DON 3种毒素同时存在的降解率分别达74.38%、98.31%和39.66%。后续将BL-17与两株乳酸菌混合对饲料原料进行发酵,在有氧条件下大幅度降解了饲料中这3种有毒物质,对AFB1、ZEN和DON的降解率分别高达86.72%、100%和43.19%。菌株BL-17不仅提高了发酵饲料的安全性,同时也可增加对非常规饲料原料的利用,具有很好的应用前景。

一株蜡样芽孢杆菌产抑菌物质发酵条件优化及抑菌效果研究

从广东湛江红树林自然保护区的红树植物根际土壤中分离筛选出一株广谱抑菌效果的菌株蜡样芽孢杆菌M15,对菌株M15进行发酵培养条件优化,采用特定发酵培养基的基础上,控制单一变量,对装液量、接种量、发酵温度和发酵时间进行优化,并对其抑菌活性物质的酸碱稳定性、热稳定性和蛋白酶耐受性进行测定。结果表明:菌株M15的发酵条件为装液量30 mL、接种量2%、发酵温度30℃、发酵时间120 h时,发酵液的抑菌效果最佳,对大肠杆菌、链球菌和沙门氏菌抑菌圈直径均为17 mm,金黄色葡萄球菌抑菌圈直径为15 mm;发酵培养基pH小于5.0或者大于6.0时,抑菌活性丧失;菌株M15的发酵液抑菌活性在30~60℃较稳定,但≥80℃时,发酵液抑菌物质失去活性;抑菌物质对胰蛋白酶不敏感,对木瓜蛋白酶、链霉蛋白酶E和蛋白酶K敏感。

1株蜡样芽孢杆菌噬菌体的分离与生物学特性分析

为获得蜡样芽孢杆菌噬菌体并了解其生物学特性,试验多位点采集河南省郑州市贾鲁河河边水样20份,混合后,以蜡样芽孢杆菌临床分离株LY为宿主菌,采用点滴法和双层平板法从水样中分离、纯化噬菌体,利用负染法在透射电镜下观察噬菌体形态,并对分离到的噬菌体进行最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)的测定、一步生长曲线的绘制、耐受性试验(温度、pH值)及裂解谱分析。结果表明:从水样中分离到1株蜡样芽孢杆菌噬菌体,根据形态判断该噬菌体为有尾病毒目(Caudovirales)肌尾病毒科(Myoviridae),命名为vB_Bac1。经测定噬菌体vB_Bac1最佳MOI为1。在一步生长曲线中,噬菌体vB_Bac1的潜伏期为20 min,裂解期为60 min,其效价在孵育40 min时达到第一个高峰,在孵育60 min时再次升高,在孵育80 min时达到第二个高峰。噬菌体vB_Bac1在4~60℃条件下水浴1 h,效价在1.12×10^(7)~2.12×10^(8)pfu/mL之间;但在70℃条件下水浴1 h即可完全失活。在pH值为4~11条件下孵育1 h,效价在1.13×10^(6)~2.12×10^(8)pfu/mL之间;当pH值为6时,效价最高(2.12×10^(8)pfu/mL);当pH值为2,3,12时,噬菌体vB_Bac1完全失活。噬菌体vB_Bac1仅能裂解其宿主菌——蜡样芽孢杆菌LY,无法裂解蜡样芽孢杆菌Y01及粪肠球菌和金黄色葡萄球菌的所有受试菌株。说明试验分离到1株有尾病毒目肌尾病毒科蜡样芽孢杆菌噬菌体,该噬菌体具有较好的耐酸碱能力,但对高温环境的耐受能力较差,且具有较强的宿主特异性。

李氏禾内生细菌Bacillus cereus J01吸附Cr^(3+)的研究

为考察李氏禾内生细菌蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus J01菌株吸附Cr^(3+)的性能,以蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus J01失活菌体作为生物吸附剂,采用单因素实验方法考察pH、温度、Cr^(3+)初始浓度、吸附剂用量、吸附时间等条件对Cr^(3+)吸附性能的影响,分析其等温吸附过程、动力学过程及热力学过程,并采用红外光谱方法对吸附机理进行初步分析。结果表明:(1)在50 mL反应体系中,当pH值为6、温度为40℃、Cr^(3+)初始浓度为150 mg·L^(-1)、吸附剂投加量为0.2 g、吸附时间为12 h时,蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus J01失活菌体对Cr^(3+)的吸附性能达到最佳,其平衡吸附量和Cr^(3+)去除率分别为34.30 mg·g^(-1)、91.60%。(2)等温吸附过程分析结果显示,朗格缪尔吸附等温模型能更好地模拟蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus J01失活菌体对Cr^(3+)的吸附,其吸附过程更倾向于单分子层吸附。(3)吸附过程动力学分析结果显示,蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus J01失活菌体对Cr^(3+)的吸附更符合准二级动力学速率方程。(4)吸附过程热力学分析结果显示,在40℃下,吸附过程的△G、△H和△S分别为-2.609 kJ·mol^(-1)、61.792 kJ·mol^(-1)和206.11 J·mol^(-1),该温度下吸附过程是自发过程。(5)红外光谱分析结果显示,蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus J01失活菌体对Cr^(3+)的吸附可能通过细胞成分中的氨基、羟基和羰基起作用。该研究结果表明该菌的失活菌体对Cr^(3+)具有较强的吸附性能,并在铬污染的环境治理中具有较好的应用潜力。

蜡样芽孢杆菌YF-2对荧光假单胞菌群体感应的淬灭活性

荧光假单胞菌是生鲜水产品中常见的优势腐败菌,其致腐能力受N-酰基高丝氨酸内酯(AHLs)类群体感应系统调控。以群体感应淬灭活性为导向,利用热灭活和酸敏感试验分析菌株YF-2分泌的淬灭活性物质类型。采用结晶紫染色法和激光共聚焦显微镜技术探究菌株YF-2对荧光假单胞菌生物膜的抑制和清除作用。通过生理生化和16S rDNA对菌株YF-2进行鉴定。结果表明:菌株YF-2对荧光假单胞菌AHLs具有较强的淬灭作用,降解率为100%,且淬灭活性物质在细胞提取物(CCE)中,通过热灭活及酸敏感试验初步判断淬灭活性物质为酰基转移酶或氧化还原酶。蛋白质量浓度为20,40μg/mL和80μg/mL的CCE对C4-HSL、C6-HSL及C8-HSL的降解率在52.8%~100%范围,对荧光假单胞菌生物膜的抑制率和清除率分别在25.84%~56.63%和26.12%~59.35%范围。此外,激光共聚焦图像表明CCE使荧光假单胞菌生物膜厚度减少,生物膜结构被破坏。同时,菌株YF-2被鉴定为蜡样芽孢杆菌。本研究为应用芽孢杆菌控制水产品腐败菌荧光假单胞菌提供一定的理论依据。

林麝源蜡样芽孢杆菌分离鉴定及致病性试验

陕西省某林麝养殖基地林麝出现体温升高、食欲废绝等症状,病死率10%左右。为分析林麝死亡原因,采集死亡林麝肺脏、肝脏等病变组织进行病原分离纯化,进行PCR检测、生化试验、16S rRNA测序鉴定、药物敏感性试验和致病性试验。结果显示,致病菌为蜡样芽孢杆菌。生化鉴定试验显示,该菌能分解葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等,但不分解甘露醇、硫化氢、尿素等;药物敏感性试验显示,该菌对哌拉西林、头孢氨苄、丁胺卡那、庆大霉素和环丙沙星等抗菌药敏感,对青霉素、苯唑西林、氨苄西林、羧苄西林和复方新诺明等抗菌药耐药;致病性试验表明,该菌对小鼠有较强致病力。论文从林麝体内分离出蜡样芽孢杆菌,为进一步了解蜡样芽孢杆菌病在林麝养殖中的危害并对该病的诊断和防治提供理论依据。