Bacillus amyloliquefaciens SY07产α-葡萄糖苷酶抑制剂液态发酵条件优化

对一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens SY07)产α-葡萄糖苷酶抑制剂的最适培养基和液态发酵条件进行优化。豆渣可作为该菌产α-葡萄糖苷酶抑制剂的适用培养基,优化发酵条件为豆渣5%,装液量60 mL/250 mL三角瓶,接种量2%,初始pH值6.5,摇床转速180r/min,培养温度37℃,发酵时间48 h。在此条件下,发酵产物对α-葡萄糖苷酶活性的抑制率为60.08%。B.amyloliquefaciens SY07良好地利用了豆渣产α-葡萄糖苷酶抑制剂的能力,为潜在的降血糖功能性食品的研发及农副产品的综合利用开辟了新途径。

Bacillus amyloliquefaciens C-1胞外发酵产物对食源性致病菌抑菌活性的初步研究

对本实验室自行分离的解淀粉芽孢杆菌C-1进行发酵,离心得到其上清液,平板抑菌实验结果显示该菌上清液对蜡样芽孢杆菌MS10362R、大肠杆菌ATCC 25922及厌氧梭菌(Clostridium difficile QB21)有较强的抑菌活性;在生长曲线测定中,4 mL C-1上清液可显著延长B.cereus MS10362R细胞的迟缓期,抑制细菌生长,且可排除pH等物理因素的影响,确定了C-1发酵上清液的抑菌活性;同时发现其对于MS10362R次生代谢产物-黑色素的产生和产量具有明显的抑制作用,初步推测可能与抑制细菌的群体感应有关;而从C-1上清中提纯的胞外多糖被证明不具有抑菌活性。

解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)HAB-7的培养基优化及抑菌活性

研究了解解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)HAB-7菌株在不同培养基下生长速率及产生的活性物质对几种植物病原菌的抑菌活性。采用摇瓶法测定了HAB-7耐盐性及生长速率;平板对峙法测定了其抑菌活性;以NA培养基为基础培养基,芒果炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)为靶标菌,研究了不同碳、氮源组合培养基对HAB-7菌株生长影响,以及对芒果炭疽菌的抑制率;用单因子正交试验,进一步优化碳源、氮源组合培养基。结果表明,HAB-7菌株在0~20%NaCl(g/L)含盐量上均能生长;最佳接种时间应在培养24~28 h;在NA、LB、BPY、AYDA、BPA及牛肉膏蛋白胨培养基上培养的HAB-7,对8种植物病原真菌平均抑制率分别为53.23%、52.03%、55.52%、52.77%、56.58%及53.82%。优化后的最佳碳源为蔗糖(10.0 g/L)和葡萄糖(10.0 g/L)复合碳源;最佳的氮源为酵母粉(20.0 g/L)和胰蛋白胨(20.0 g/L)复合氮源。单因子正交试验结果显示的碳、氮源为蔗糖30.0 g/L、葡萄糖10.0 g/L、酵母粉30.0 g/L、胰蛋白胨40.0 g/L;对芒果炭疽菌抑菌率为78.3%,较BPA培养的HAB-7提高了10.80%,活菌数达到1.97×10^(10)cfu/m L。

一株抗真菌解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵条件的初步研究

从堆肥中分离到一株对植物病原菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)具有强烈抗菌活性并具有较广抗菌谱的细菌Q-12菌株。通过形态观察、生理生化实验1、6S rDNA同源性序列分析以及部分特异性基因序列分析,鉴定该菌为解淀粉芽孢杆菌。该菌的最适培养基组成为:葡萄糖5g/L,NH4Cl 1g/L,牛肉膏0.8g/L,氯化镁5g/L。最适培养温度为33℃,最适培养pH为6.0,最适培养时间为40h。

解淀粉芽孢杆菌Q-12抗真菌特性的研究

从土壤中分离到的解淀粉芽孢杆菌Q-12在生长过程中产生的抗菌活性物质,能够强烈抑制镰刀菌、曲霉、青霉、毛霉等能引起食品腐败的真菌。受到抑制的真菌菌丝生长速度明显变慢,并且菌丝的形态发生变化。Q-12的发酵液经过(NH4)2SO4沉淀得到的粗提产物对热稳定,121℃高压灭菌15 min仍能保持很高的活性,易溶于水及极性有机溶剂,经非极性有机溶剂萃取后,保留在水相的活性物质活性变化不大,在较宽的pH值范围内都具有很高的抗菌活性,并且对蛋白酶K、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶不敏感。

解淀粉芽孢杆菌B1619脂肽类抗生素的分离鉴定及其对番茄枯萎病菌的抑制作用

【目的】从解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)生防菌株B1619发酵液上清中分离脂肽类抗生素,分析其抑菌活性相关成分,为应用解淀粉芽孢杆菌B1619菌株防控番茄枯萎病提供依据。【方法】利用特异性引物对B1619中3种脂肽类抗生素合成相关基因sfp、ituA和fenB进行检测;通过盐酸沉淀、甲醇抽提法等方法提取脂肽类抗生素粗提物;用Supelclean^(TM) LC^(-1)8柱及PHASE HF-NH2柱对3种脂肽类抗生素粗提物进行分离;通过MALDI-TOF-MS和HPLC分析、鉴定3种脂肽类抗生素;采用平板对峙培养分别测定3种脂肽类抗生素粗提物对番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.lycopersici)的抑菌活性。【结果】从解淀粉芽孢杆菌B1619的基因组DNA中扩增sfp、ituA和fenB等脂肽类抗生素合成基因,扩增产物经克隆、测序分析,表明B1619菌株中含有这3个基因。通过HPLC分析,发现60%甲醇洗脱液分离物分别在12、16.5、18 min处出现相应峰值,保留时间与bacillomycin L标准品一致,分泌量为18.5 mg·L^(-1);70%甲醇洗脱液分离物分别在22、34、37、51及53 min处出现相应峰值,保留时间与fengycins标准品一致,分泌量为5.1 mg·L^(-1);100%甲醇洗脱液分离物分别在27、37、41、51及53 min处出现相应峰值,保留时间与surfactins标准品一致,分泌量为74.3 mg·L^(-1)。经液质联用进一步验证分析3种脂肽类抗生素的质子化峰值,60%甲醇洗脱液分离物峰值范围在m/z=1 043.4、1 057.5和1 071.4 Da,是C13—C15的bacillomycin L;70%甲醇洗脱液分离物峰值范围在m/z=1 463.9、1 477.9、1 491.9和1 505.9Da,是C15—C17的fengycins;100%甲醇洗脱液分离物峰值范围在m/z=1 008.6、1 022.7和1 036.7 Da,是C13—C15的surfactins。平板对峙法试验结果表明1 mg·m L^(-1) bacillomycin L和fengycins对番茄枯萎病菌有较强的抑菌效果,而1 mg·m L^(-1)surfactins对番茄枯萎病菌的抑菌活性较弱,再将surfactins的浓度提高至3和6 mg·m L^(-1),发现其抑菌效果没有明显变化。【结论】B1619菌株分泌3种脂肽类抗生素,其中对番茄枯萎病菌生长起重要抑制作用的抗生素是bacillomycin L和fengycins,surfactins对番茄枯萎病菌的抑制活性较弱。

解淀粉芽孢杆菌对山茶灰斑病菌的抑制作用

解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)及其分泌物对山茶灰斑病病原菌茶褐斑拟盘多毛孢(Pestalotiopsis guepini(Desm.)Stey)具有较好的拮抗作用。采用正交试验法探究了碳源、氮源、pH值、温度、接种量等因子对解淀粉芽孢杆菌产拮抗物质的影响。结果表明:最佳碳、氮源分别为葡萄糖和蛋白胨。最佳优化条件为25℃、蛋白胨0.3 g、葡萄糖0.5 g、pH值6.0、每125 mL接种2 mL孢子悬液于300 mL锥形瓶中震荡培养。基于生长曲线的测定,通过研究解淀粉芽孢杆菌培养时间与代谢产物拮抗活性的关系,得到解淀粉芽孢杆菌对茶褐斑拟盘多毛孢的最佳作用时间为72 h,抑菌值达0.85。

1株生防芽孢杆菌的鉴定及其抑菌活性的初步研究

从芝麻连作田中分离筛选到1株具有拮抗作用的细菌菌株B10-26,为明确其对植物病原真菌的抑菌效果及其分类地位,采用纸碟法及含毒介质法测定了其对部分植物病原真菌的抑菌作用,并通过形态学、生理生化特征以及分子鉴定方法对菌株B10-26的分类地位进行了确定。结果表明,生防菌B10-26菌体和活性物质对菜豆壳球孢(Macrophomina phaseolina)、尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)、多主棒孢霉(Corynespora cassiicola)和芝麻长蠕孢(Helminthosporium sesami)均有较好的抑制作用。对菌株B10-26的16SrDNA序列同源性和系统发育分析,只能将其鉴定到芽孢杆菌属;对菌株B10-26的ITS序列同源性和系统发育分析表明,B10-26的ITS序列与解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的ITS序列位于同一簇群,同源性达100%。结合形态特征、生理生化特性和ITS序列分析鉴定指标,将B10-26菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌。

解淀粉芽孢杆菌B10-26抑菌物质的稳定性研究与初步分离纯化

为了将解淀粉芽孢杆菌B10-26应用于植物病害的生物防治,以芝麻茎点枯病菌等13种病原菌为指示菌,采用含毒介质法检测生防菌发酵液的活性;对抑菌物质粗提物在不同温度和pH值条件下处理,采用牛津杯法检测活性;采用高效液相法对抑菌物质进行初步的分离纯化.结果表明,解淀粉芽孢杆菌B10-26发酵液对13种植物病原真菌均有不同程度的抑制作用,对芝麻茎点枯病菌的抑菌率最高,达到91.67％.抑菌物质活性虽然随着温度的升高有所下降,但在121℃高温处理下,仍然产生11 mm的抑菌圈,说明其具有较高的热稳定性;在pH值2～10时,押菌活性没有明显变化,说明其具有较好的酸碱稳定性,但在碱性条件下活性较高.对抑菌物质的初步分离表明,B10-26发酵液中含有多种活性成分.

铁载体产生菌筛选、鉴定及防治Botryosphaeria dothidea

葡萄座腔菌属(Botryosphaeria spp.)真菌在全球范围广泛引起多种果树发生溃疡病和流胶病等病症,严重制约种植业的健康发展。作者从蜂蜜中分离出产儿茶酚型铁载体的H47菌株和产异羟肟酸型铁载体的H114菌株,经16S rRNA基因分析和生理生化鉴定,两菌株均为解淀粉芽孢杆菌。菌株用MM9培养基发酵,上清液经有机溶剂萃取、真空干燥获得铁载体的粗品。铁载体粗品对B. dothidea Ces.&De Not ACCC 38026进行平板抑菌实验,结果表明:H47和H114菌株产生的不同类型铁载体粗品对葡萄座腔菌均有抑菌作用,毒力回归方程分别为y=1.432x+0.578和y=1.744x+0.063。由此可见,H47菌株和H114菌株有成为生物防治剂的潜力。

拮抗菌RY3抗菌粗蛋白理化性质及其对柑橘绿霉病菌的抑菌活性

解淀粉芽孢杆菌RY3是从冬枣果园根际土壤分离获得的一株具有高效广谱拮抗活性的拮抗细菌，其发酵液经盐酸沉淀后得到抗菌粗蛋白。为明确该抗菌粗蛋白的理化性质和抑菌活性，研究温度、pH、紫外线、蛋白酶等对抗菌蛋白稳定性的影响，并研究抗菌粗蛋白对柑橘绿霉病菌的抑菌作用。结果表明：该粗蛋白具有较高的热稳定性，100℃处理60min后押菌活性仍为原有活性的82．84％；其耐酸且在pH2～10时均有抑菌活性；对紫外线、胰蛋白酶不敏感，对蛋白酶K具有一定的耐受性。该抗菌粗蛋白对柑橘绿霉病菌分生孢子具有明显的抑制萌发活性，10倍稀释液处理的孢子萌发率仅为2．86％，该抗菌粗蛋白还可导致芽管变短变粗、菌体细胞质凝集、菌丝消融等。

基于均匀设计与支持向量回归的拮抗辣椒链格孢菌解淀粉芽孢杆菌发酵条件优化(英文)

为了提高内生细菌解淀粉芽孢杆菌的抗菌代谢物质的产生,结合均匀设计(UD)与支持向量回归(SVR)发展了一种新的配方优化方法UD-SVR,用来优化选择培养基成分和发酵罐条件。最优配方考虑9因素通过3轮混合水平实验得出最佳优化条件为:淀粉0.5%、葡萄糖2%、酵母提取物0.4%、CaCl21.3%、KH2PO40.1%、30℃、36h、接种量1%、pH7.0。发酵液稀释10倍抑制活性达到57.39%,比基准实验高出20.53%,UD-SVR明显优于参比模型,可被广泛应用于实验设计和分析的处方优化过程中。

解淀粉芽孢杆菌 HAB-7 对18 株植物病原真菌的抑制作用

HAB-7是一株分离自豇豆根际土壤、具有较强抑菌作用的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。研究HAB-7对18株植物病原真菌及其发酵液粗提蛋白对植物病原的抑制作用,并测定其对番茄种子的促生作用。采用平板对峙法测定其对18株植物病原真菌的抑制活性,以橡胶树炭疽菌为指示菌,对其发酵上清液经60%、80%硫酸铵盐析获得的抗菌粗蛋白进行测试;并将HAB-7菌液稀释成6个浓度梯度,分别用来对番茄种子进行促生测试。结果显示:HAB-7对18株植物病原真菌的平均抑菌率为61.03%;其发酵上清液对橡胶树炭疽病菌的抑制率为56.80%,80%硫酸铵粗提蛋白对橡胶树炭疽病菌的抑制率为38.88%;10-4CFU/m L的HAB-7菌液浓度促进了番茄种子胚根的伸长,长度比CK提高67.76%。HAB-7菌株对植物病原菌有较广谱的抑菌活性,其分泌的活性物质除了活性蛋白外,可能还有其他的活性物质,低浓度的HAB-7菌液能促进植物根系生长。本研究结果为后续研究其致病机理起到重要的作用。

解淀粉芽胞杆菌XJ5挥发性物质抑菌活性及对苹果褐腐病防效测定

解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens XJ5挥发性物质对苹果褐腐病菌Monilinia fructigena等多种病原真菌具有良好的拮抗活性。通过固相微萃取-气相色谱质谱联用仪(Solid-phase microextraction-Gas chromatography mass spectrometry,SPME-GC-MS)对菌株XJ5产生的挥发性物质进行检测,利用平板对扣法测定挥发性化合物的抑菌活性,并离体接种评价菌株XJ5挥发性物质对苹果褐腐病的防效。结果表明,XJ5菌株挥发性物质对9种植物病原真菌的抑菌率在47.9%~84.8%,其中对苹果褐腐病菌的抑菌率最高为84.8%。SPME-GC-MS检测及抑菌活性测定表明,菌株XJ5分泌的主要挥发性物质为十二醛(Dodecanal),具有抑菌活性的挥发性物质主要为2-壬醇(2-Nonanol)、2-乙基己醇(2-Ethyl-1-hexanol)和2-十一醇(2-Undecanol)。其中2-壬醇抑制苹果褐腐病菌的EC50为3.43μg/mL,且XJ5菌液离体熏蒸与2-壬醇离体熏蒸均可有效抑制苹果褐腐病菌丝生长及病斑扩展,其对苹果褐腐病的离体防效分别在14.4%~71.2%和66.4%~97.6%,与对照差异显著。

枯草芽孢杆菌STO-12脂肽类物质抑菌活性及其特性分析

为了探索植物病害生物防治的新途径,对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)STO-12的脂肽类物质的抑菌活性和特性进行分析,采用滤纸片法、排油试验、乳化试验和表面张力测试检测脂肽类物质的抑菌活性和特性。研究结果表明,枣缩果病菌(Alternaria tenuissima)、杨树炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)和杨树腐烂病菌(Cytospora chrysosperma)的生长受到脂肽类物质的强烈抑制,最小抑菌浓度(MIC)分别为0.02,0.04和0.02 mg·disc-1;分别在高温处理、强酸强碱处理、蛋白酶处理、紫外线处理及室温保存条件下,STO-12的脂肽类物质仍能保持其抑菌活性的稳定;另外,通过3种不同的检测试验,发现STO-12的脂肽类物质还具有较好的表面活性剂的特性。综上所述,研究表明枯草芽孢杆菌STO-12分泌的脂肽类物质具有高效的抗真菌活性,较好的抑菌活性稳定性和较强的表面活性的特性,作为生防制剂和生物表面活性剂,在工业和田间应用中具有较大的应用潜力。

一株产毒曲霉拮抗细菌的筛选、鉴定及抑菌活性研究

为获得同时抑制产毒赭曲霉(Aspergillus ochraceus)和黄曲霉(Aspergillus flavus)生长的拮抗菌株,充分开发利用有益微生物资源。从种植园土壤和赤豆(Vigna angularis)中分离筛选拮抗赭曲霉和黄曲霉的细菌,通过形态学、生理生化反应、16SrDNA序列同源性及特异PCR鉴定其种属;并研究菌株发酵上清液的抑菌稳定性等指标。结果显示,从种植园土壤中筛选出同时抑制赭曲霉和黄曲霉生长的拮抗细菌SC-B15,对赭曲霉和黄曲霉抑菌率分别达到47.30±13.17%和52.44±2.78%,鉴定结果为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。其上清液对赭曲霉和黄曲霉的抑菌圈直径分别为15.03±2.66mm和13.95±2.62mm。抑菌物质在20-40℃,pH6-10条件下保持稳定,对胰蛋白酶和木瓜蛋白酶不敏感,显微检测赭曲霉和黄曲霉菌丝均出现异常。分离自土壤的B.amyloliquefaciensSC-B15菌株及其上清液可以有效抑制产毒赭曲霉和黄曲霉,对食品及饲料的防霉抑菌具有一定的开发应用价值。

小麦茎基腐病生防菌HB-081的鉴定及抑菌活性

为筛选用于小麦茎基腐病的生防菌,以假禾谷镰刀菌为指示菌,从女贞叶片中分离筛选到一株拮抗菌HB-081,根据形态学、生理生化特征及分子生物学对其进行鉴定,并对该菌株的抑菌活性和盆栽防效进行了测定.结果表明:菌株HB-081对假禾谷镰刀菌的抑菌率为61.86%;结合形态学、生理生化特性,16S rRNA及gyrA基因序列分析,将其鉴定为解淀粉芽孢杆菌.该菌株的无菌发酵液能够抑制病原菌的菌丝生长,导致菌丝出现分支增多、膨大畸形;无菌发酵液对病原菌的孢子萌发过程也具有抑制作用;对扣试验显示,该菌株产生的挥发性物质可以抑制病原菌的菌落生长;盆栽试验中,该菌株对小麦茎基腐病的防治效果为66.69%.此外,菌株HB-081对9种植物病原真菌具有拮抗效果.

抗青霉芽孢杆菌优良菌株的分离、筛选及鉴定

为了获得一株对青霉有强烈拮抗作用的芽孢杆菌以应用于食品的防腐保鲜中,从木瓜、柑橘、葡萄、全麦面包、太子参、陈皮等食品及中草药共计30个样品中分离得到132株芽孢杆菌。通过平板对峙法,筛选出18株对青霉有较强拮抗作用的芽孢杆菌。对其中3株抑菌效果显著的芽孢杆菌利用杯碟法测定其发酵液的抑菌效果,最终筛选出一株芽孢杆菌LPL40,其发酵上清液对青霉的抑菌圈直径达到(13.94±1.90)mm。通过形态学、生理生化及16SrDNA鉴定,最终将该菌株命名为解淀粉芽孢杆菌LPL40(Bacillus amyloliquefaciens LPL40)。

解淀粉芽胞杆菌抗真菌活性研究进展

解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)具有很强的抑制植物病原真菌的能力。其菌体细胞能产生多种酶类、脂肽类抗生素、生物表面活性素、聚酮类化合物和抑菌蛋白,同时具有诱导植物产生系统抗性(ISR)的能力,因此在工农业、种植业、养殖业、食品加工业、果蔬的采后保鲜和饲料业等行业具有重要价值。本文对解淀粉芽胞杆菌抗真菌作用、抗真菌能力提高策略、抗菌化合物合成调节、抑制真菌机制及其引发的ISR等问题进行了深入探讨和综述。

解淀粉芽孢杆菌TF28抗菌蛋白基因TasA克隆与表达

[目的]克隆解淀粉芽孢杆菌TF28抗菌蛋白基因Tas A并进行原核表达和抑菌活性研究。[方法]采用PCR方法扩增抗菌蛋白基因Tas A,连接p ET22b载体,导入E.coli BL21(DE3)菌株,进行IPTG低温诱导表达,用His柱纯化表达产物,采用纸片方法测定其抑菌活性。[结果]从解淀粉芽孢杆菌TF28中克隆了抗菌蛋白基因Tas A,以p ET22b为表达载体构建高效表达抗菌蛋白Tas A的基因工程菌株,该菌株在0.05 mmol/L IPTG 15℃诱导4 h,Tas A蛋白表达率为34.2%,经His柱纯化后获得SDS-PAGE电泳一条带的纯化Tas A蛋白,其含量为67.8 mg/L,收率为90.8%。该蛋白抑制番茄灰霉病和叶霉病、玉米茎基腐病和水稻稻曲病菌生长。[结论]实现抗菌蛋白基因Tas A的原核表达,表达率34.2%,表达蛋白具有广谱抑菌活性,在植病生防方面具有应用潜力。