一株地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究I

从皖北盐碱地土样中分离到 0 1 1菌株 ,对其进行了菌种鉴定以及胞外碱性蛋白酶的初步研究。结果表明 :0 1 1菌株符合地衣芽孢杆菌种的特征 ,但该菌芽孢端生、孢囊膨大、中度耐盐、高度耐碱 ,可在NaCl浓度为 1 3%和pH1 1的培养基中生长 ,这些特征又不同于该种几个模式株 ,因而将 0 1 1菌株鉴定为地衣芽孢杆菌的一个亚种 ,命名为地衣芽孢杆菌砀山亚种(Bacilluslicheniformissubsp .dangshanensis)。该菌在发酵培养基中能产生较高产量的胞外碱性蛋白酶 ( 72 5u/mL)。酶的最适作用条件 :60℃、pH9.0 ,该酶在pH6.0～ 1

地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究 Ⅰ.碱性蛋白酶高产菌的筛选及产酶条件初探

从成都佳丰食品厂等处采集的样品中平板分离初筛到124株碱性蛋白酶产生菌，进一步复筛出一株高产，且稳定的碱性蛋白酶产生菌株B．L．JF-ld，初步鉴定为地衣穿孢杆菌（Bacilluslicheniformis）。该菌的最适产酶条件为：培养基（％）为麦芽糖7．5，酵母膏3，NaCl0．5，K2HPO4·3H2O0．53，NaHPO4·2H2O0．03，Na2CO30．056，MnSO4l×10－4mol／L，pH8．7，通气量为（1：0．5）～（1：1）（v／v），37℃发酵40h，酶活力单位高达7180U／ml。

一株地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究Ⅱ

曾分离到一株产碱性蛋白酶的地衣芽孢杆菌 0 1 1 ,命名为地衣芽孢杆菌砀山亚种。酶的最适作用条件 :pH9 0 ,6 0℃。对该菌株进行连续 4次不同的物理、化学方法的诱变处理。诱变剂为紫外线、亚硝酸、和低能N+离子 ,其处理方式包括单独或复合处理两种。最后获得一株高产碱性蛋白酶的变异株 (C3 0 3)菌株产酶活力从 72 5u/mL提高到 1 2 4 2 5u/mL。该突变株的最适产酶条件为起始pH8 0～ 9 0 ,培养温度 3 2℃～ 3 7℃ ,振荡培养时间 44～ 48h。

一株共青土壤产碱性蛋白酶的地衣芽孢杆菌的分离纯化与鉴定

从共青地区禽类养殖场的土壤中筛选出了4株地衣芽孢杆菌,其中1株地衣芽孢杆菌产碱性蛋白酶的酶活高达805.53 U/mL。通过酪蛋白培养基初筛,取能够产生水解圈的菌株进行平板划线获得单一菌株,再对菌株进行革兰氏染色和芽孢染色等形态学鉴定及生化特征鉴定筛选,最后对获得菌株进行分子生物学鉴定,16S rDNA测序结果显示4株菌株与地衣芽孢杆菌的同源性在97%以上。结合其形态学鉴定结果和生化特征鉴定结果,确定筛选出来的4株菌株均为地衣芽孢杆菌;最后通过Folin-酚试剂法测定各菌株产碱性蛋白酶粗酶酶活,最终获得的菌株中:菌株2-1-1酶活为805.53 U/mL、菌株2-1-2酶活为688.87 U/mL、菌株2-1-3酶活为593.91 U/mL、菌株3-1-1酶活为729.40 U/mL。