球形芽孢杆菌C_3-41菌株感染致倦库蚊幼虫的组织病理学研究

本文采用光学显微镜和电子显微镜观察了球形芽孢杆菌C_3-41菌株感染致倦库蚊C(?)lexp(?)p(?)ens quinquefasciatus 幼虫的组织病理变化。实验结果表明,被感染幼虫的中肠上皮细胞出现膨大、脱落和瓦解,胃盲囊细胞也膨大和破坏。但围食膜在整个感染过程中保持完整。发现感染后3小时,细胞中的溶酶体增多增大,而线粒体在感染后6小时发生改变,其基质电子密度增高,嵴增宽,进而嵴变得模糊或消失,终至线粒体的瓦解。同时内质网也表现出膨大或破坏,基膜内褶膨大形成空泡。骨架肌肉组织及其细胞也产生一定程度的病变。本文还讨论了球形芽孢杆菌C_3-41毒素的作用机理。

B.s.C_(3-41)菌株杀蚊毒素的提取纯化及某些特性的研究

本文以球形芽孢杆菌C_(3-41)、Bs_(-10)和2362菌株为材料,研究了从冻融芽孢中提取和纯化杀蚊毒素蛋白的条件,并对其毒蛋白的分子量、杀蚊活性、稳定性及氨基酸组成进行了检测,用0.05N NaOH溶解得到的毒蛋白粗制品,经SephadexG-75和DEAE-52两次柱层析,可得到纯化的毒蛋白。C_(3-41)和Bs_(-10)的毒素蛋白的分子量均为40KDa,对Ⅲ龄致倦库蚊幼虫感染24小时的LC_(50)值分别为26.99ng/ml和37.92ng/ml,该毒蛋白对热处理(50～80℃,20分钟)和0.05～0.2N NaOH处理(24小时)具有不稳定性。对胰蛋白酶具有机性,但链霉蛋白酶可使其完全丧失杀蚊活性,在pH9～10中保存48小时对其毒性没有影响。C_(3-41)和Bs_(-10)的毒蛋白由16种氨基酸组成。C_(3-41)毒蛋白的氨基酸组成与B.s.2297和B.t.i的毒素相同,但与Bs_(-10)毒素略有差异。

球形芽孢杆菌C_(3-41)乳剂杀灭淡色库蚊幼虫试验观察

采用球形芽孢杆菌C3-41制剂处理淡色库蚊幼虫,实验室测试LC_(50)为0.0237ppm,回归方程式y=8.3337+2.0530x。现场试验结果表明,使用剂量为1ml/m^2时持效7天,3ml/m^2时持效2周以上。但该制剂对其卵和蛹无杀灭作用。

球形芽孢杆菌C_（3－41）菌株杀蚊毒蛋白的生物合成

本文报道球形芽孢杆菌Ｃ３－４１菌株毒蛋白的生物合成的检测结果。对Ｃ３－４１菌株不同发育阶段发酵液的毒蛋白量进行了酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ），并用生物测定方法检测了发酵液杀蚊毒性，证明其毒蛋白合成量与该菌芽孢的发育和形成密切相关，同时揭示了ＥＬＩＳＡ测出的毒蛋白量与生物测定所示的杀蚊毒力具有很高的符合率。

球形芽孢杆菌C_（3－41）对嗜人按蚊和东乡伊蚊幼虫的毒性测定

本文报道球形芽孢杆菌Ｃ３－４１对嗜人按蚊和东乡伊蚊的毒性。实验室生物测定结果表明，ＢｓＣ３－４１液剂对嗜人按蚊Ⅳ龄幼虫处理后２４ｈ和４８ｈ的ＬＣ５分别为２．４０ｐｐｍ和１．７８ｐｐｍ，对东乡伊蚊的ＬＣ５０分别为５．３５ｐｐｍ和３．１４ｐｐｍ；持效为１～２周。Ｂｓ．Ｃ３－４１粉剂对嗜人按蚊和东乡伊蚊处理后２４ｈ的ＬＣ５０分别为３．３３ｐｐｍ和４．４４ｐｐｍ，处理后４８ｈ的ＬＣ５０分别为１．３６ｐｐｍ和１．４４ｐｐｍ。球形芽孢杆菌Ｃ３－４１处理蚊幼虫４８ｈ后的效果明显优于处理后２４ｈ的。

球形芽孢杆菌C_（3－41）菌株的晶体和芽孢的分离

本文报道球形芽孢杆菌Ｃ３－４１菌株的晶体和芽孢的分离方法。采用１００μｇ／ｍｌ的溶菌酶处理培养物和４４％复方泛影葡胺离心，可使芽孢含量比例由５５～７５％提高到９０～９６％，但用优选的６号固体培养基培养时，芽孢纯度可达９８％以上。采用５０ｍｍｏｌ／Ｌ二硫苏糖醇（ＤＴＴ）处理芽孢，在－３０℃和室温下冻融及４２％复方泛影葡胺离心程序，离心管上清液中可获得高纯度的被分离的晶体。