55株芽孢杆菌16S rRNA基因序列测定与系统发育学分析

采用16S rRNA基因序列分析法对中国工业微生物菌种保藏管理中心(CCIC)保藏的55株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)进行复核鉴定。菌株经纯化培养,以改良CTAB法提取总DNA,采用细菌16S rRNA通用引物、TD-PCR方法(touchdown-PCR)进行16S rRNA基因序列扩增,PCR产物纯化后直接进行序列测定,序列经人工校对后用Clustal X进行比对分析,最后用MEGA3.1软件构建系统发育树。系统发育分析结果表明:55株枯草芽孢杆菌中有52株菌种与原鉴定结果一致,有3株菌种与原鉴定结果存在差异,其中2株鉴定结果为巨大芽孢杆菌(B.megaterium),另1株鉴定结果为地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)。

23株芽孢杆菌16S rRNA基因序列扩增与系统发育分析

采用16S rRNA基因序列分析对西南菌种站(SICC)收集保藏的23株芽孢杆菌进行复核鉴定,以改良的CTAB法提取细菌DNA,用通用引物F1、R1对菌株进行16S rRNA扩增,使用Clustal X对序列进行比对分析,并用MEGA 4进行建树分析。鉴定结果表明其中13株与原学名一致,1株与原学名不符,其余9株在绘制的N-J发育树中显示同时与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)汇聚到一个分支,需要用特异PCR方法进一步核实。